Способ получения средства для диагностики заболеваний поджелудочной железы

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ .ЖЕЛЕЗБ1, вклЕочающий измельчение вареных двенадцатиперстных кишок свиней, их экстракцию уксусной кислотой, отделение экстракта, его очистку и последующую сублимационную сушку, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени проведения процесса и повышения выхода целевого продукта, после отделения экстракта его наносят на смолу «Биокарб Т, затем отмывают смолу раствором уксусной кислоты с рН 3,3-3,5, элюируют целевой продукт раствором уксуснокислого аммония с рН 8,9--9,1 и осаждают его йцетоном при соотношении элюат-ацетон 1:4.

СОЮЗ СОЭЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (21) 3560298/28-13 (22) 29.12.82 (46) 15.09.84. Бюл, № 34 (72) Л. Л. Борткевич, Т. Н. Орлова, В. Д. Си ницына, P. В. Илюхина, П. Ф. Крышень, Ю. И. Рафес, А. А. Гендролис, В. И. Казилявичус, Г. П. Рачайтене, Л. К. Шатаева и Г. В. Самсонов (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт мясной промышленности (53) 615.36 (088.8) (56) 1. Патент Франции № 1536919, кл. А 61 К 35/37, 1968.

2. Авторское свидетельство СССР № 683746, кл. А 61 К 35/37, 1979. (19) . М(1Ь 1 1 1 1 27

3 (59 61 35 38 37 24 (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИИ ПОДЖЕЛУДОЧНОИ ЖЕЛЕЗЫ, вклЬча|ощий измельчение вареных двенадцатиперстных кишок свиней, их экстракцию уксусной кислотой, отделение экстракта, его очистку и последующую сублимационную сушку, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени проведения процесса и повышения выхода целевого продукта, после отделения экстракта его наносят на смолу «Биокарб Т», затем отмывают смолу раствором уксусной кислоты с рН 3,3 — 3,5, элюируют целевой продукт раствором уксуснокислого аммония с рН 8,9 — 9,1 н осаждают

его ацетоном при соотношении элюат-ацетон

1:4.

1113127

10

45 зО

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения диагностических препаратов из биологически активного сырья.

Известен способ получения средства для диагностики заболеваний поджелудочной железы путем замораживания двенадцатиперстных кишок свиней, их измельчения, автолиза в течение 72 ч при температуре от 40 до 45 C в присутствии соляной кислоты с последующим центрифугированием и фильтрацией полученного раствора t I).

Однако этот способ крайне трудоемок.

Известен также способ получения средства для диагностики заболеваний поджелудоч ной железы, включающий измельчение вареных двенадцатиперстных кишок свиней, их экстракцию 1,5 объемом 0,5 н уксусной кислоты при рН 3,0 — 4,0, температуре 18 — 25 С в течение 20 ч, отделение экстракта с последующим отделением балластных белков ha активированном угле, отделение экстракта от балластных белков и активированного угля центрифугированием, прогрев экстракта при 60 — 70 С в течение 3,5 — 4,5 ч, осаждение балластных белков при рН 4 — 5, температуре

4 — 6 С в течение 16 — 18 ч, отделение балластных белков центрифугированием, фильтрацию раствора, добавление стабилизатора ,и сублимационную сушку целевого продукта.

Продолжительность получения 160 флаконов препарата по данному способу составляет

80 — 90 ч !2).

Однако данный способ получения препарата является длительным процессом, а получаемый препарат имеет большую дозу балластных веществ, плохую растворимость и невысокий выход.

Цель изобретения — сокращение времени проведения процесса и повышение выхода целевого продукта.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения средства для диагностики заболеваний поджелудочной железы, включающему измельчение вареных двенадцатиперстных кишок свиней, их экстракцию уксусной кислотой, отделение экстракта, его очистку и последующую сублимационную сушку, после отделения экстракта его наносят на смолу «Биокарб-Т», затем отмывают смолу раствором уксусной кислоты с рН 3,3 — 3,5, элюируют целевой продукт раствором уксуснокислого аммония с рН

8,9 — 9,1 и осаждак>т его ацетоном при соотношении элюат — ацетон 1:4.

Пример 1. 1 кг промытых, прогретых в воле при 96 С в течение 10 мин двенадцатиперстных кишок свиней измельчают на мясорубке, заливают 3,0 л 05 н раствором уксусной кислоты и экстрагируют в течение 4 ч при 20--22 С. Отделяют жмых через капроновое сито, фильтруют через бумажный .фильтр и сорбируют активное вещество на смоле «Биокарб Т». Затем через смолу последовательно пропускают буфер (0,5 н раствор уксусной кислоты) для отмывки смолы от балластных белков, элюируют активное вещество буфером с рН 9,0 (0,25 М раствор уксуснокислого аммония) . Полученный элюат осаждают в холодном (4 — 6 С) ацетоне в соотношении (элюат — ацетон) 1:4. Г1олученный осадок растворяют в дистиллированной воде и высушивают сублимированием.

Вес активной фракции 7,2 г; активность

3,5 кл. ед.; выхол 25200 ед/кг.

Пример 2. 1 кг промытых, прогретых в воде при 96 С в течение 10 мин двенадцатиперстных кишок измельчают на мясорубке, заливают 4 л 0,5 н раствором уксусной кислоты, экстрагируют при перемешивании в течение 5 ч прн 20 — 22 С. Отделяют жмых

20 через капроновое сито, фильтруют через бумажный фильтр и сорбируют на смоле

«Биокарб-Т». Затем через смолу последовательно пропускают буфер (0,5 н раствор уксусной кислоты) для отмывки смолы от балластных белков и десорбируют активное вещество буфером с рН 910 (0,25 М раствором уксуснокислого аммония). Полученный элюат осаждают в холодном (4 — 6 С) ацетоне. Осадок растворяют в дистиллированной воде, высушивают сублимированием. Вес активной фракции 6,0 г; активность 3,4 кл. ед выход 20400 ед/кг.

Пример 3. 1 кг промытых, прогретых при .96 С в воде двенадцатиперстных кишок свиней измельчают на .мясорубке, заливают

2,0 л 0,5 н раствора уксусной кислоты, экстрагируют перемешиванием в течение 3 ч при 20 — 22 С. Отделяют жмых через капроновое сито, фильтруют через бумажный фильтр. Полученный раствор сорбируют на смоле «Биокарб-Т», затем последовательно пропускают буфер (0,5 н раствор уксусной кислоты) для отмывки смолы от балластных веществ, элюируют активное вещество буфером с рН 9,0 (0,25 М раствор уксуснокислого аммония). Элюат осаждают в холодном ацетоне (4 — 6 С) в соотношении 1:4 (элюатацетон). Полученный осадок растворяют в дистиллированной воде и высушивают сублимированием. Вес активной фракции 5,8 г; активность 3,0 кл. ед.; выход !7400 ед/кг.

Активность полученных образцов определяют биологическим методом цо Сватосу.

Чистоту препарата и его фракционный состав — методом электрофореза в полиакриламидном геле в сравнении с препаратом

«Секретин» английской фирмы «Boots».

Сопоставительный а нализ тех ни ко-экономических показателей предлагаемого способа и прототипа приведен и таблице, lll3l27

Способ

Продолжи тель ность процесса быход

Прототип

П редла гаемый способ

90 400 ед/кг

48 25000 ед/к

Составитель В. Брусиловская

Редактор И. Касарда Техред И. Верес Корректор И. Муска

Заказ 6171/7 Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий

118055, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Фнлнал ППП <Патент>, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Как следует из таблицы, предлагаемый способ получения средства для диагностики заболеваний поджелудочной железы позволяет интенсифицировать процесс в 2 раза и увеличить выход целевого прод) кта с 400 до 25000 ед/кг, получить высокоочищенное и качественное средство.