Способ определения циркулирующих иммунных комплексов

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ИШУННЫХ КОМПЛЕКСОВ, включающий титрование комплемента в сыворотке крови больного и определение антикомплементарности сыворотки по разности общей комплементарной актив-г ности и оставшегося несвязанного комплемента иммунными комплексами, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, титрование исследуемой сыворотки больного и определения антикомплементарности сыворотки осуществляют комплементом той же сыворотки .

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

И,И И

РЕСПУБЛИК

Ogl (11) З15| А 61 К 39/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

N 8 8 TOP TNOMV C88T8T8CT8V (21) 3426894/28-13 (22) 08.01.82

{46) 30.10.84. Бюл. 11- 40 (72) Б.И.Рудык и П.В.Барановский (71) Тернопольский медицинский институт (53) 615.373(088.8) (56) 1. S.Soee ing, K.SoQKing, Jassen J. Scand. J. Rheum, 1980, 9, У 2, 118-122.

2. Лаврова Т.P., Родштейн О.А., Косицкая Л.С. и др., Терапевтический архив. т.50, В 9, 1978, с. 68-72. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ, включающий титрование комплемента в сыворотке крови больного и определение антикомплементарности сыворотки по разности общей комплементарной актив-. ности и оставшегося несвязанного комплемента иммунными комплексами, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, титрование исследуемой сыворотки больного и определения антикомплементарности сыворотки осуществляют комплементом той же сыворотки.

1121007

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения циркулирующих имиунных комплексов, включающему титрование комплементов в сыворотке крови больного и определение антикомплементарности сыворотки по разности общей компле-иентарной активности и оставшегося несвязанного комплемента иммунньми комплексами, титрование исследуемой сыворотки больного и определение

«5

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к способам определения циркулирующих имиунных комплексов (ЦИК), и может быть использовано для оценки при наблюдении эа развитием и течением болезней у человека и животных, в особенности таких как болезни с диффузным поражением соединительной ткани, почек, аутоимиунные, цитопении, некоторые 10 хронические болезни легких и сердца.

Известен способ определения ЦИК пс связыванию иммунным комплексом исследуемой среды С1 -фракции комплемента человека., который позволяет определять количество антиген-неспецифических коиплементфиксирующих

ЦИК (1j.

Однако известный способ недостаточно точен, что затрудняет определение ЦИК в малых концентрациях, так как используется лишь один компонент (С1, ) системы комплемента, а также сложен в учете конечного результата, длитепен в постановке реакции, и сло-25 жен методическими приемами в получении чистой фракции С что делает способ мало доступным. Кроме того, способ с использованием С1 -фракции

% комплемента не позволяет одновременно в одной и той же исследуемой среде определить общую комплеиен— тарную активность сыворотки и комплемента, поглощенный ЦИК, что важно для суждения об участии комплемента

35 в аутоиииунных реакциях.

Известен также способ определения

ЦИК пс антикомплеиентарности сыворотки, который основан на определении поглощения ЦИК исслецуемой среды

4О комплемента морской свинки 2 .

Однако известный спосо" недостаточно точен„ так как используется гетерслогический комплемент морской свинки.

Цель изобретения — повьппение точности и упрощение способа. антикоиплементарности сыворотки осуществляют комплементом той же сыворотки.

Способ реализуется следующим образом.

Определение общей комплементарной активности сыворотки.

Берут 0,05 мл исследуемой сыворотки, 0,45 мл веронал-мединалового буфера с РН 7,3 и проводят титрацию.

Определяют общую гемолитическую активность в единицах комплемента по 507-ному гемолизу сенсибилизированных эритроцитов барана (ЕД пс СН )

Затем определяют антикоиплементарность исследуемой сыворотки. Для этого 0,1 мл исследуемой сыворотки инактивируют на водяной бане при 56 С на протяжении 30 мин, прибавляют к ней 0,05 мл исследуемой неактивированной сыворотки (при низкой общей комплементарной активности исследуемой сыворотки добавляется 0, 1 ил) и 0,35 мл веронал-мединало=:îãî буфера с PH 7,3 (при низкой комплементарной активности 0,3 мл вероналмединалового буфера). Помещают в теро иостат на 2 ч при 37 С. После инкубации определяют оставшийся комплемент (ЕД по СН 5 ) . По разности общей ксмплеиентарной активности и оставшегося несвязанного комплемента определяют антикоиплеиентарность сыворотки, т.е. количество ЦИК.

Частное от деления общей комплементарнсй активности исследуемой сыворотки на количество ЦИК (антикоиплементарность) оценивается как коэффициент аутоиииунизации (К ).

Коэффициент аутоиимунизации находим пс формуле: где С вЂ” общая коиплементарная актив ность сыворотки в (ЕД по

СНБО) 3 14 — количество ЦИК (антикомплеиентарнссть) сыворотки в (ЕД по СНБO)

П р и и е р. Производим расчет, Общая комплементарная активность исследуемой сыворотки 48 ЕД. Оставшийся комплемент -.. исследуемой пробе

«а 1,ИК 44 ЕД.

Количество ЦИК (антикоиплементарность) исследуемой сыворотки определяется путем вь."чета ст общего уровСоставитель Г.Крюкова

Редактор Н.Воловик Техред M.Tenep Корректор Е.Сирохман

Заказ 7841/5 Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðoä, ул.Проектная, 4

3 1121 ня комплемента количества последнего, оставшегося после поглощения IIHK:

48-44=4 ЕЛ.

К (коэффициент аутонммуниэации) =

48

= — =12 условных ед.

По предложенному способу наличие аутоиммунного компонента определяют при величине коэффициента аутоиммунизации ниже 15 условных ед, риск 1О развития аутоиммуниэации процесса при величинах 15 — 20 условных ед., отсутствие аутоиммунизации и риска ее развития при величинах коэффициента более 20 условных ед. 15

Пример 1. Обследовано 20 больных с тяжелым течением бронхиальной астмы. Ни в одном случае не получено коэффициента аутоиммунизации выше

20 условных ед., а средняя величина 20 группе 16,4+3,4 условных ед.

Пример 2. Обследовано 18 больных ревматоидным артритом и системной красной волчанкой, ни в одном

007 4 случае не получены величины коэффициента аутоиммуниэации более условных ед, при средних величинах 12, 1+

=3 условных ед.

Пример 3. Обследовано 20 практически здоровых взрослых лиц, где во всех случаях коэффициент аутоиммунизации был выше 20 условных ед. и в среднем составлял 24,4+2,6 условных ед.

Всего было обследовано 62 больных и в 73,17 случаях было определено наличие иммунных комплексов с назначением соответствующей терапии. По известному способу возможность обнаружения иммунных комплексов составляет лишь 58-59Х.

Таким, образом, предложенный способ повышает точность определения иммунных комплексов и упрощает методику определения, что делает его доступным для лечебно-профилактических и научно-исследовательских медицинских учреждений.