Способ определения концентрации иммунных комплексов в сыворотке крови
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ, включающий их преципитирование полиэтиленгликолем с последующим определением величины светорассеяния, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, преципитирование проводят двукратно при концентрациях полиэтиленгликоля в пределах 3,45-3,550/0 и 3,95-4,05«/о с последующим определением концентрации иммунных комплексов в сыворотке крови по приросту светорассеяния во второй пробе в сравнении с первой.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
И
РЕСПУБЛИК
З 1511 А 61 К 39/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3438640/28-13 (22) 18.03.82 (46) 23.09.84. Бюл. № 35
0 5 0 6 20 25
Средняя масса иммунных комплексоб Ф оп носигпельныл единицах (за единицу массы приняли массу иммуноглобулина & )
Фиг.!
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЬЙ
172) К. К. Острейко, И. А. Туманова, В. В. Лаврентьев
:(71) 2-й Московский ордена Ленина государ-. ственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова (53) 615.373(088.8) (56) I. «Jnternational Archives of Allergy
and Applied Jmmunology», 1979, vs, № 4, . р. 402-410.
„.SUÄÄ 1114425 А (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ, включающий их преципитирование полиэтиленгликолем с последующим определением величины светорассеяния, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, преципитирование проводят двукратно при концентрациях полиэтиленгликоля в пределах 3,45-3,55% и 3,95-4,05% с последующим определением концентрации иммунных комплексов в сыворотке крови по приросту светорассеяния во второй пробе в сравнении с первой.
1114425
Изобретение относится к медицине, пре. имущественно к способам определения им мунных комплексов в биологических жид.
@остях организма, например в сыворотке крови и может быть использовано при выявлении иммунных комплексов при различных патологических состояниях.
Известен способ определения концент-. рации иммунных комплексов в сыворотке крови, включающий их преципитирование полиэтиленгликолем с последующим определением величины светорассеяния 11).
Однако. недостатком известного способа является его невысокая точность при определении концентрации иммунных комплексов в зависимости и с учетом молекулярной массы последних.
Цель изобретения — повышение точности способа.
Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения концентрации иммунных комплексов в сыворотке крови, включающему их преципитирование полиэтиленгликолем с последующим определением величины светорассеяния, преципитирование проводят двукратно при концентрациях полиэтиленгликоля в пределах 3,45-3,35Р/р и 3,95-4,05 /р с последующим определением концентрации иммунных комплексов в сыворотке крови по приросту светорассеяния во второй пробе в сравнении с первой.
" Пример 1. В качестве калибровочной системы взяли комплексы иммуноглобули- 30 нов человека класса G, полученные стандартной тепловой агрегацней (63 20 ). Агрегаты различных масс (от 7 до 25 масс иммуноглобулина G) получались при изменении концентрации иммуноглобулина G от
0,5 до 5 мг/мл при тепловой агрегации. Массы агрегатов определялись нефелометрически. Для калибровки брали концентраци и а гре гатов от 0,5 flo 0,075 м г/мл. В первой контрольной пробе к 0,5 мл раствора агрегатов известной средней массы и известной концентрации добавляли 0,5 мл 40 фосфатного буфера, во второй — 0,5 мл полиэтиленгликоля конечной концентрации
3,5Р/р, в тРетьей — 0,5 мл полиэтиленгли,коля конечной концентрации 4 /р. После
I ч инкубации при 22 С проводили изме- 45 рения величины светорассеяния проб на лазерном нефелометре, определяли приросты светорассеяния по отношению к соответствующим контрольным пробам и строили калибровочные графики.
Взяли сыворотку больного системной красной волчанкой. 0,1 мл цельной сыворотки разводится фосфатным буфером в отношении I:25. К 05 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл фосфатного
55 буфера — контрольная проба. Во второи пробе к 0,5 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл полиэтиленгликоля конечрой концентрации 3,5Р/р, в третьей — 0 5 мл. полиэтиленгликоля конечной кон центрации
4Р/р. После 1 ч инкубации при 22 C измеряется светорассеяние в этих трех пробах.
Измерения проводились на лазерном нефелометре с цифровой индикацией: 1 проба—
49,0 усл. ед.; 2 проба — 62,7 усл. ед; 3 проба — 70,1; буфер — 2,2 усл. ед.; полиэтиленгликоль 3,5Р/q — 2,7 усл. ед.; полиэтиленгликоль 4% — 13,4 усл. ед, Определяют приросты светорассеяния во второй и третьей пробах по отношению к первой (с вычитанием фоновых значений полиэтиленгликоля и буфера) и их отношение:
62,?-49,0-(12,7+2,2) =3,2;
70,1-49,0-(13,4+2,2) =9,9; 9,9:3,2=3,09.
Затем по графику (фиг. 1) находят среднюю массу иммунных комплексов М-7 массам иммуноглобулина G, а затем по графику (фиг. 3) находят концентрацию С =
1,5 мг/мл (с учетом разведения сыворотки).
Пример 2. Сыворотка донора 0,1 мл цельной сыворотки разводится фосфатным буфером в отношении 1:25. К 0,5 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл фосфатного буфера — первая контрольная проба. Во второй пробе к 0,5 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл полиэтиленгликоля конечной концентрации
3,5Р/р, в третьей — 0,5 мл полиэтиленгликоля конечной концентрации 4Р/р. После 1 ч инкубации при 22 С измеряется светорассеяние: l проба — 39,5 усл. ед; 2 проба—
55,3 усл. ед., 3 проба — — 59,2 усл. ед.
Значения фоновых величин те же, что и в примере l. Определяют приросты светорассеяния во второй . и третьей пробах по отношению к первой и их отношение:
55,3-39,5- (! 2,7-2,2) = 5,3;
59,2-39,5- (13,4-2,2) =8,5; 8,5:5,3= 1,6.
По графику (фиг. 1 определяют среднюю массу иммунных комплексов М = 25 массам иммуноглобулина G, а затем по графику (фиг. 2) находят концентрацию иммунных комплексов в сыворотке крови С=
О,l мг/мл.
Пример 3. Сыворотка больного дискоидной красной волчанкой. 0,1 мл цельной сыворотки крови разводится фосфатным буфером в отношении I:25. К 0,5 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл фосфатного буфера — первая проба. Во второй пробе к 0,5 мл разведенной сыворотки добавляется 0,5 мл полиэтиленгликоля конечной концентрации 3,5 /р, в третьей
0,5 мл полиэтиленгликоля конечной концентрации 4"/р. После 1 ч инкубации при22 С производится измерение светорассеяния: 1 проба — 64,4 усл. ед.; 2 проба—
78,0 усл. ед; 3 проба — 82,5 усл. ед.
Значения фоновых величин те же, что и в примере 1. Определяют приросты светораг1114425 сеяния во второй и третьей пробах по отношению к первой и нх отношение:
78,0-64,4-(1 2,7-2,2) = 8,1;
82,5-64,4-(! 3,4-2,2) = 6,9; 6,9:3,1 =- 2,2.
Затем по графику (фиг. ) находят сред. нюю массу иммунных комплексов М =
15 масс иммуноглобулина G, а затем по графику (фиг. 3) находят концентрацию
Концентрация иммунных комплексод со средней массой
25 относительных единиц, мг/мл
Фиг.2
«Ъ
CJ
3,5!е
Концентрация иммунных комллексод со средней массой 15 относительны» единиц, мг)мл Фиг. 5
Составитель П. Боиарцев
Техред И. Верес Корректор Л. Пилипенко
Тираж 687 Подписное
ВКИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП сПатент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Редактор И. Дербак
Заказ 6387/4 д
; 50
Ъ Ъ (Ъ
Е
CJ иммунных комплексов в сыворотке крови
С=0,25 мг/мл.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет ие только зафиксировать факт наличия иммунных комплексов, но и существенно повысить точность и надежность их определения в сыворотке крови, поскольку определяется как концентрация, так и средняя масса иммунных комплексов.
