Способ определения азафена

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЗАФЕНА путем измерения интенсивности флюоресценции раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, пробу растворяют в уксусном ангидриде и обрабатывают концентрированной серной кислотой в соотношении 1:0,2 0 ,4, облучают возбужданядим светом с длиной волны 360 нм, а интенсивность флюоресценции измеряют при длине волны 470 нм.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦЦАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН ()9) () )) 4(у) А б! К 31/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР йО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ASTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (2 1) 36213 76/28- 1 3 (22) 08.07.83 (46) 23.03.85. Бюл. Н» (72) В.Ю.Оверлингас, А.А.Хабаров, И.Ф.Оверлингиене и С.А.Полетыкин (71) Курский государственный медицинский институт (53) 616.07(088.8) (56) 1. "Таблетки аэафена" (фармакопейная статья) ФС-42-1059-76.

2. Синнжин В.И. Всасывание и распределение по органам нового антидепресанта азафена. — "Фармакология и токсикология", 1973, Ф 4 с.409-412 (прототип). (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЗАФЕНА путем измерения интенсивности флюоресценцни раствора, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, пробу растворяют в уксусном ангидриде и обрабатывают концентрированной серной кислотой в соотношении 1:0,20,4, облучают возбуждаюцим светом с длиной волны 360 нм, а интенсив. ность флюоресценции измеряют при длине волны 470 нм.

1146048

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения лекарственного препарата азафена, Известен способ количественного определения азафена, заключающийся

- в растворении азафена в — .нстиллированной воде с последующим измерением оптической плотности полученного раствора при длине волны 344 нм (1) . 1О

Недостатками этого способа являются невысокая чувствительность определения- — 2 мкг/мл и низкая избирательность.

Известен также способ определения 15 азафена путем измерения относительной интенсивности флюоресценции раствора (2f .

Недостатком известного способа является то,что чувствительность 20

0,1 мкг/мл не всегда достаточна при определеиии азафена в биологических исследованиях и невысокая избирательность, так как собственной флюоресценцией обладает большое число 25 органических соединений.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения азафена путем измерения интенсивности флюоресценции раствора, пробу

-растворяют в уксусном ангидриде и обрабатывают концентрированной сер4 ной кислотой в соотношении 1:0,20,4, облучают возбуждаюцим светом с 35 длиной волны 360 нм, а интенсивность флюоресценции измеряют при длине волны 470 нм.

Способ осуществляют следующим образом.

Анализируемую пробу растворяют в уксусном ангидриде и обрабатывают концентрированной серной кислотой в соотношении 1:0,2-0,4 r, после чего доводят объем раствора до 10 мл " уксусным ингидридом, облучают возбуждающим светом с длиной волны

360 нм и измеряют относительную интенсивность флюоресценции полученно го раствора при длине волны 470 нм. 0 .

Интенсивность флюоресценции не изменяется в течение 24 ч.

Пример 1. Качественное определение азафена.

К крупинке мелкоизмельченных . таблеток или порошка азафена прибавляю i мл уксусного ангидрида, встряхивают, затем к полученному раствору прибавляют 0,2 мл концентрирован-" ной серной кислоты, в результате чего. появляется при облучении ультрафиолетовым светом с длиной волны

365 нм интенсивно флюоресцирующее голубым светом соединение, что говорит о наличии азафена в пробе.

П р и и е -р 2. Количественное определение азафена, 0,01 г (точная навеска) порошка азафена переносят в мерную колбу на 100 мл, прибавляют 10 мл муравьиной кислоты, встряхивают 10 мин, доводят объем уксусйым ангидридом до метки.

1 мл полученного раствора переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем уксусным ангидридом до метки.

К 1 мл полученного раствора прибавляют 0,2 мл концентрированной серной кислоты, встряхивают и добавляют 8,8 мл уксусного ангидрида.

Раствор тщательно перемешивают и измеряют относительную интенсивность флюоресценции.

Пример 3. Определение азафена в моче.

К 1 мл мочи прибавляют 1 мл дистиллированный воды, перемешивают.

На хроматографическую пластинку

Silufol наносят 0,05 мл смеси небольшими порциями, высушивая пятно после нанесения каждой порции. Хроматографическую пластинку помещают в насьпценную парами хроматографическую камеру со смесью растворителей спирт этиловый:раствор аммиака

257-ныл в соотношении 9:1.

Пятна азафена с Rf = 0,75 количественно переносят в центрифужную пробирку, прибавляют 1 мл уксусного ангидрида, 0,2 мл концентрированной серной кислоты, встряхивают и добавляют 8,8 мл уксусного ангидрида.

Раствор центрифугируют при

3000 об/мин в течение 10 мин, после чего прозрачный раствор сливают в кювету и измеряют относительную интенсивность флюоресценции.

В качестве стандартного раствора берут раствор с одной из следуюцих концентраций: 0,001, 0,005, 0,01, 0 05 0,1, 0,5, 1,0 мкг/мл.

Полученные результаты определения азафена в моче (искусственая смесь с = 10 мкг/мл) приведены в табл. 2.

Параллельно проводят опыт со стандартным раствором азафена и

1146048

1О

Н -Н с = — c, Н вЂ” Н

2 где С с

Т абл ица1

Метрологические

Найдено, 7

Номер определения характеристики

Х = 98,32Х

98,1

v v-- 0,93

99,5

Е = 10,93Х

97,3

97,3 а = 98,32+ 0,93Х

99,2

98,5 а = 97,.26+ 1,197.

96,5

98 2

Т аблица 2

Найдено, Х

Метрологические характеристики

Номер определения

Х = 97,26 7

1,04

97,2

96,0

98 4

Е =. 1 197.

Заказ 1253/6 . Тираж 722

Подписное филиал ППП "Патент" ° г.Ужгород, ул.Проектная, 4

3 контрольный опыт. В качестве стандартных берут растворы азафена с концентрацией: 0,001, 0,005, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5 и 1,0 мкг/мп.

Контрольный опыт проводят с чистым уксусным ангидридом и концентрированной серной кислотой.

Концентрацию измеряемого раствора рассчитывают по формуле концентрация исследуемого раствора азафена, концентрация стандартного раствора азафена, показатель электрофлюориметра для испытуемого раствора, показатель алектрофлюориметра для контрольного опы-. та, 4

Н, — показатель алектрофлюори= метра для стандартного раствора.

Результаты определения азафена в порошке приведены в табл. 1.

Использование предлагаемого спосо ба в практике позволяет повысить чувствительность способа в 70 раз в сравнении с известным.

Кроме того, способ прост в исполнении, не требует дорогостоящих реактивов, что в целом определяет целесообразность использования предлагаемого способа в практике аналитических лабораторий предприятий, выпускающих данное лекарственное ве» щество, клинических лабораторий ме- . дицинских учреждений, фармакологических лабораторий и контрольно-аналитических лабораторий аптекоуправлений.