Способ консервации малярийных паразитов

 

СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ МАЛЯРИЙНЫХ ПАРАЗИТОВ, включающий заражение ьодпей мялярийными плазмодиями, извлечение биологического материала, содержащего эритроцитарные стадии малярийных паразитов, замораживание их в парах жидкого азота, 6 т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью упрощения способа и увеличения количества консервируемых малярийных паразитов, в качестве биологического материала, содержащего эритроцитарные стадии малярийных паразитов, используют -эксплантаты печени, селезенки, сердца и легких, измельченные до размера 0,5-2 мм. (Л 4: -vj САд

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

ОЛМЛИ

13ЕСГ1УБЛИН (19) SU (1 и

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н автаеснам сецдатдъствм

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

fO ДЕЛАМ ИЗОТ.„ТЕНИЙ И 0ТНРЫТИЙ.(21) 3523124/30-15 (22) 19. 1 t . 82 (46) 30.03,85. Бюл. Ф 12

{72) Г.Т.Акиншина, А.С.Оганесян, Л.В.Федянина, И.В.Кукина

° и E.À.×óñoâà, (71) Ордена Трудового Красного Зна"мени институт медицинской паразито логии и тропической медицины им; Е.И. Марциновского (53) 616.936 ° 1 (088.8) (56) 1.ЪК! зоа R.I.М., arrant Y., Wa1ter С.А. Preservation of intrherythrocyfic Jorms of ве1агъа1 paraaites

by one-step and two-е ер coo1ing praedures.- - "Bu11 %НО", 1977, 55, (2/3) ° . 309-319 °

2. Schneider И.D., Johnson D.L., Shefner А.М. Surviva1 time and retenbion of anbima1aria1 resistance of

ma1aria1 parasites Ы repository in.

1iguid nitrogen (-196 С) ° "App1ied

microbio1ogy, " 1968, 16, 1422-1423 (прототип) .

4(>>) А 01 N 1/00; А 01 К 1/02;, С 12 И 1/04 (54) (57) СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ МАЛЯРИЙНЫХ ПАРАЗИТОВ, включающий заражение мваией мялярийными плазмодиями, извлечение биологического материала, содержащего эритроцитарные стадии малярийных паразитов, замораживание их

8 парах жидкого азота, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью упрощения способа и увеличения количества консервируемых малярийных паразитов, в качестве биологического материала, содержащего эритроцитарные. стадии малярийных паразитов используют

° эксплантаты печени, селезенки, сердца и легких, измельченные до размера

0,5-2 мм.

1147316

1 !

Изобретение относится к медицине и биологии. а именно к маляриологии и касается способов криогенной консервации малярийных паразитов.

Известен способ криогенной консервации малярийных паразитов, заключающийся в том, что биологический материал сначала замораживают при -79 С ,в смеси 96 -ro спирта и сухого льда в течение 30 мин, после чего погру- 10 жают в пары жидкого азота или в жидкий азот (температура -170 и -196 C соответственно). Однако указанный двуступенчатый способ криогенной консервации требует постоянного наличия сухого льда и дополнительных затрат времени Я .

Известен также способ, который заключается в одноступенчатой криогенной консервации эритроцитарных стадий Zg малярийных паразитов Р.berghei. Инфицированную P.berghei мышь забивают с помощью шейной дислокации и стерильно берут кровь as сердца в

3,8 -ном растворе цитрата натрия. 25

Максимально.от одной мыши можно получить 0,5-0,8 мл крови. Это дает воэможность заморозить 1-2 пробы биологического материала, так как криогенная консервация осуществляет- ЗО ся в объемах ие более 0,4-0 5 мл.

Цитратную кровь центрифугируют при

1500 об/мин в течение 10 мин, надосадочную жидкость удаляют. К осадку добавляют равный объем криопротек-

35 такта следующего состава. Х: глицерин 20, сорбитол 3 и хлористый натрий 0,65, смешивают, разливают по

0,4-0,5 мп в стерильные пластиковые (желательно) пробирки и помещают в пары жидкого азота. Все манипуляции проводят при комнатной температуре с соблюдением правил асептики 523.

Недостатком способа является сложность получения достаточного ко- 45 личества биологического материала, необходимого для оценки его эффективности и биологических характеристик штамма на нужном количестве животных, так как размораживание одной о пробы биологического материала обеспечивает заражение лишь 1-2 мышей.

Кроме того, желательно оценивать свойства материала,- полученного от одного животного, в течение года и в более отдаленные сроки хранения. Для этого требуется большое количество идентичных проб.

Целью изобретения является упрощение способа и увеличение количества консервируемых малярийных паразитов, получаемых от одной мьппи.

Цель достигается тем, что согласно способу консервации малярийных паразитов, включающему заражение мышей малярийными плазмодиями, извлечение биологического материала, содержащего эритроцитарные стадии малярийных паразитов и замораживание их в парах жидкого азота, в качестве биологического материала, содержащего эритроцитные стадии малярийны паразитов, используют эксплантаты печени, селезенки, сердца и легких, измельченных до размера 0,5-1 мм.

Способ осуществляют следующим образом.

Инфицированную P.berghei мьппьзабивают с помощью шейной дислокации, извлекают внутренние органы, которые содержат кровяные формы малярийных паразитов. Из органов готовят клеточную суспенэию с добавлением питательной среды. Полученный биологический материал центрифугируют прн

1300-1500 об/мин в течение 7-10 мин, надосадочную жидкость удаляют, осадок ресуспендируют в равном объеме криопротектанта. Полученную взвесь разливают по 0,5 мл в пластиковые пробирки и погружают в пары жидкого азота.

Пример 1. Зараженную малярийными паразитами (P.berghei) мьппь весом 15-20 г забивают с помощью шейной дислокации на 7-е сутки после заражения с паразитемией около 90Х.

Брюшную поверхность обрабатывают о

96 -ным спиртом. Стерильно вскрывают бркипиую полость и извлекают печень, селезенку, легкие, сердце. Из печени готовят клеточную суспенэию.

Орган помещают в ступку и растирают, постепенно добавляя питательную среду в соотношении 1: 10. Клеточную суспенэию центрифугируют при

1500 об/мин 10 мин. Надосадочную жидкость удаляют, осадок ресуспендируют в равном объеме криопротектанта, содержащего, Х: глицерин 28, сорбитол 3 и хлористый .натрий 0,65.

Полученную суспенэию разливают в стерильные пластиковые пробирки по

0,5 мп и погружают в пары жидкого азота. Все манипуляции проводят при комнатной температуре с соблюдением лравил асептики. Из одного животного

Составитель С.Светлышев

Редактор Х.Недолуженко Техред С.йовжий Корректор А.Тяско

Заказ 1422/4

Тираж 743 П одпис ное

ВНИИПИ Росударственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, .Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул.Проектная,4

3 1473

МоКНо получить до 30 мл суспензии, т.е. 60 проб для замораживания. Оценка качества сохранности материала проводится путем испытания его ин@ективности на белых мышах. Для этого биологический материал размораживают и внутрибрюшинно по О, 1 мл вводят белым мьнпам, после чего ежедневно делают мазки крови иэ хвостовой вейы и подсчитывают процент паразите- 1р мии.На 7-8 сутки у мышей развивается типичная малярийная инфекция с паразитемией 80-90Х.

Пример 2. Способ аналогичный, . однако для поготовления клеточной суспензии используют селезенку, легкие, сердце, которые тщательно иэ16 4 мельчают глазными ножницами на мелкие фрагменты размером 0,,5-1 мм в небольшом количестве питательной среды. Режим центрифугирования

1300 об/мин 10 мин.

Таким образом, предлагаемый способ одноступенчатого консервирования эритроцитарных стадий малярийных паразитов (P.berghei) позволяет получить от одного экспериментального, животного не 1-2 пробы биологического материала, а 60 проб, что повышает эффективность способа, упрощает его осуществление (так как изолирование органов проще, чем взятие крови из сердца).