Способ трипсинизации ткани и устройство для его осуществления

 

1. Способ трипсинизации ткани, включающий обработку ферментом с последующим отделением клеточных сус-v пензий, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода клеток и повышения чистоты клеточных суспензий, обработку проводят 0,080 ,1%-ным раствор трипсина,а отделение ведут при реверсивном вращении измельчителя с частотой 500-800 об/ /мин и интервалом 30 с.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3444157/28-13 . (22) 27 . 05 . 82 (46) 07.07. 85. Бюл. Ф 25 (72) Н.М.Пухова, П.П.Кузнецов, А.И.Гуславский, Л.Е.Нежута и В.А.Лукина (71) Всесоюзный научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (53) 578.085.23(088 ° 8) . (56) 1. Авторское свидетельство СССР

Ф 571516, кл. С 12 М 3/00, 1972.

2. Авторское свидетельство СССР з 652217, кл. С 12 М 3/00, 1974.

ÄÄSUÄÄ 1 5716

4РО С 12 М 3/00 С О1 Ы 1/28 (54) СПОСОБ ТРИПСИНИЗАЦИИ ТКАНЕЙ

И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ. (57) 1. Способ трипсинизации ткани, включающий обработку ферментом с последующим отделением клеточных сус- . пензий, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода клеток и повыИения чистоты клеточных суспензий, обработку проводят 0,080,1Х-ным раствором трипсина, а отделение ведут при реверсивном вращении измельчителя с частотой 500-800 об/ ".

/мин и интервалом 30 с.

1165716

2. Устройство для трипсинизации ткани, содержащее герметичный термостатируемый сосуд-трипсинизатор, .сооб щенный трубопроводами с емкостью для раствора трипсина и с холодильной камерой, и измельчитель ткани, вклю, чающий емкость для ткани и привод, отличающееся тем, что, с целью увеличения выхода клеток и повышения чистоты клеточных суспензий, емкость измельчителя установле-, на соосно в сосуде-трипсинизаторе и соединена с приводом с возможностьк реверсивного вращения для одновременной фильтрации клеточной суспензии, при этом стенки и дно емкости выполнены иэ металлического сетчатого материала квадратного плетения с острыми кромками.!

На чертеже представлено устройство для три синизации ткани.

Устройство для трипсинизации 20 ткани содержит герметичный стеклян-. ный териостатируеиый сосуд-трипсинизатор 1, сообщенный трубопроводами с емкостью 2 для раствора трипсина и с холодильной камерой 3. На трубо- 25 проводе между емкостью 2 и сосудои-трипсинизатором 1 размещен перистальтический насос 4. Устройство содержит иэмельчитель ткани, включающий емкость 5 для ткани и привод 6. щ

Емкость 5 иэмельчителя установлена соосно в сосуде-трипсинизаторе 1 и соединена с приводом 6 через магнитную муфту 7 с возможностью реверсивного вращения для одновременной 35 фильтрации клеточной суспензии, при этом стенки и дно емкости выполнены из металлического сетчатого материала квадратного плетения с ост рыми кромками.

Изобретение относится к биологии и может быть использовано для трипсиниэации тканей и органов животных с целью получения суспензии первичных клеток. 5

Цель изобретения — увеличение выхода клеток и повышение чистоты клеточных суспензий.

Способ осуществляют следующим образом.

Кусочки ткани или органы животных обрабатывают 0,08-0,17-ными растворами трипсина. Затем сосуд с клетками приводится в реверсивное вращение с частотой 500-800 об/мин с ин,тервалом 30 с. -

Пример 1. Эмбриональная ткань птиц обрабатывается 0,08Х-ным раствором трипсина. Затем сосуд с тканью приводится в реверсивное вращение с частотой 500 об./мин с интервалом 30 с.

Пример 2. Ткань почек телят измельчается до размера 2-3 мм. Далее загружают в измельчитель, в который подают 0,1Х-ный раствор трипсина. После измельчитель приводится в реверсивное вращение с частотой

800 об./мин с интервалом 30 с.

Устройство работает следующим образом.

Измельченные кусочки тканей или органов животных асептически загружают в емкость 5, которую помещают в стеклянный сосуд-трипсинизатор 1.

Затем в последний с помощью перистальтического насоса 4 подают раствор трипсина из емкости 2. После этого емкость 5 приводится во вращение через магнитную муфту 7 от элект-. родвигателя 6 и совершает реверсивное вращение с частотой 500-800 об./

/мин с интервалом 30 с. Дезагрегация тканей и органов животных осуществ" ляется путем механического воздействия в центробежном поле в присутствии фермента трипсина. Под действиеи раствора трипсина ослабляются межклеточные связи в кусочках органов или тканей животных. Под действием центробежного поля диспергированные ку-... сочки органов и тканей проталкиваются через сетчатую фильтрующую перегородку. Острые кромки фильтрующей перегородки разрушают кусочки органов и тканей до образования отдельных

1165716

Составитель Л.Стебаева редактор В.данко Техред О.Веце - Корректор С.Шекмар

Заказ 4285/24 Тираж 525 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д; 4/5. филиал ППП "Патент", з .Ужгород, ул.Проектная, 4 клеток. Таким образом, происходит дезагрегация органов и тканей животных и одновременно центробежное фильтрование клеточной суспензии.

После достижения необходимой концентрации отдельных клеток в растворе трипсина в сосуде-трипсинизаторе 1 создают избыточное давление, и клеточную суспензию перекачивают в холодильник 3.

Предлагаемый способ и устройство для трипсиннзации ткани обеспечивают увеличение выхода. клеток и повышение чистоты клеточных суспензий в 1,52 раза больше по сравнению с известным способом.

Кроме того, предлагаемое устройство обладает высокой производительностью