Способ определения фентоламина гидрохлорида

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНТОЛАМИНА ГИДРОХЛОРИДА путем обработки анализируемой пробы химическими реагентами в среде органического растворителя с последующим анализом полученного раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и избирательности определения, обработку ведут последовательно уксусным ангидридом и 30%-ной хлорной кислотой в качестве органического растворителя используют уксусную кислоту, и анализ проводят измерением относительной интенсивности флуоресценции . (Л С

СО(ОЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (1)). (51)4 G 01 N 21/64

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 *C

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3738376/23-04 (22) 04.05.84 (46) 30 ° 09.85. Бюл. № 36 (72) А.А. Хабаров, В.М. Иванов, В.Ю. Оверлингас и А.Е. Ермакова (71) Курский государственный медицинский институт (53) 543.42.062(088.8) (56) Фармакопейная статья 42-656-72.

Фентоламина гидрохлорид.

Поздняков Е.Г., Егорова З.И.

Фотометрическое определение фентоламина, фетанола и мезатона. — Фармация, 1982, ¹ 2, с. 54.

Авторское свидетельство СССР № 1078293, кл. G 01 N 21/78, 1982. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНТОЛАМИНА ГИДРОХЛОРИДА путем обработки анализируемой пробы химическими реагентами в среде органического растворителя с последующим анализом полученного раствора, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и избирательности определения, обработку ведут последовательно уксусным ангидридом и ЗОЖ-ной хлорной кислотой в качестве органического растворителя используют уксусную кислоту, и анализ проводят измерением относительной интенсивности флуоресцен- Е

O ции е

1182346

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам количественного определения фентоламина гидрохлорида (гидрохлорид

2- )N-n-толил-N-(м-оксифенил) амино- 5 метил) имидазолина), и может быть использовано в клинических лабораториях, контрольно-аналитических лабораториях аптекоуправлений, заводских и судебно-химических лабораториях.

Целью изобретения является повышение чувствительности и избирательности определения.

Способ осуществляется следующим 15 образом.

Качественное определение фентоламина гидрохлорида.

К крупинке порошка или мелкоизмельченных таблеток фентоламина гид- 20 рохлорида прибавляют 1 мл уксусной кислоты, встряхивают, затем к полученному раствору прибавляют 1 мл. уксусного ангидрида, 0 1 мл 30%- ной хлорной кислоты, в результате чего 25 при облучении ультрафиолетовым светом с длиной волны 365 нм появляется интенсивная зеленая флуоресценция.

Количественное определение фентоламина гидрохлорида. 30

0,1 г (точная навеска) порошка фентоламина гидрохлорида переносят в мерную колбу на 100 мл, прибавляют

80-90 мл уксусной кислоты, растворяют фентшламин гидрохлори@ и доводят объем уксусной кислотой до мет1 ки, 5 мл полученного раствора переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем уксусной кислотой до метки. 40

К 1 мл полученного раствора прибавляют 1,0 мл уксусного ангидрида, 0,1 мл 30%-ной хлорной кислоты, встряхивают и добавляют 7,9 мл уксус45 ной кислоты. Раствор тщательно перемешивают и измеряют относительную интенсивность флуоресценции. Параллельно проводят опыт со стандартным раствором фентоламина гидрохлорида

50 и контрольный опыт. В.качестве стандартного берут раствор концентрацией 5 мкг/мл.

Контрольный опыт проводят с чистой уксусной кислотой, уксусным ангидридом и 30%-ной хлорной кислотой.

Концентрацию измеряемого раствора рассчитывают по формуле

Н вЂ” Н

С = — —— С

Н вЂ” Н где С вЂ” концентрация исследуемого раствора фентоламина гидрохлорида;

С вЂ” концентрация стандартного

I раствора фентоламина гидрохлорида;

Н вЂ” показатель электрофлуори1 метра для исследуемого раствора;

Н вЂ” показатель электрофлуориметра для контрольного опыта;

Н вЂ” показатель электрофлуоримет2 ра для стандартного раствора.

Результаты определения фентоламина гидрохлорида в порошке приведены в табл. 1.

Таблица 1

98,2

98,7

98,4

0,73

S—

98,3

S— л

0,7

100,1

0,30

S--= х

S- = 0,77 0,95

99,0

98,7+0,77

98,3

Определение фентоламина гидрохлорида в таблетках по 0,025.

0,1 г (точная навеска) мелко измельченных таблеток переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, прибавляют 80-90 мл уксусной кислоты, растворяют,. доводят объем уксусной кислотой до метки и перемешивают.

50 мл данного раствора переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем до метки уксусной кислотой.

К 1,0 мл исследуемого раствора препарата прибавляют 1,0 мл уксусного ангидрида и 0,1 мл 30%-ной хлорной кислоты, встряхивают, прибавляют 7,9 мл уксусной кислоты и измеряют относительную флуоресценцию на электрофлуориметре.

Пример Найдено, 7 Метрологические данные

Продолжени табл.2

1182346

1 3

93,7

1,4 г

<„ -= 0,54

94,2

93,6

1, 388

94,8

94,05+

+1, 388

Таблица 3

93,62

94,7

0,79

94,3

S 0,8

93,3

S = 0,32

92,7

0,32

93,62

92,9

93,8

Приготовляют стандартный раствор

5,0 мкг/мл и измеряют относительную интенсивность флуоресценции..

Концентрацию фентоламина гидрохлорида определяют по указанной формуле.

Определение фентоламина гидрохлорида в моче (искусственная смесь).

К 2 мл мочи, содержащей 100 мкг/мл препарата, добавляют 2,0 мл 0,2 M 10 универсального буфера (рН 11,0) и экстрагируют 8 мл хлороформа три ра3а в течение 5 мин. Хлороформный слой сливают в выпарительную чашку и выпаривают на водяной бане до 0 05- 1у

0,1 мл. Полученный раствор наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол" УФ-254.

На пластинку наносят раствор фентоламина в метаноле в концентрации 2О

50 мкг/мл ("свидетель"). Пластинку с нанесенными пятнами высушивают в воздухе в течение 5 мин и помещают в хроматографическую камеру со смесью растворителей гексан:ацетон:аммиак 25

25% в. соотношении 5:20:2 и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителей пройдет 10 см, пластинку вынимают из камеры и сушат на воздухе в течение 5 мин. Локализацию пятен определяют в УФ свете с длиной волны 254 нм по гашению флуоресцентного индикатора. Ry = 0,32.

Пятно препарата количественно переносят в центрифужную пробирку, прибавляют 1 мл уксусной кислоты, 1,0 мл уксусного ангидрида и 0,1 мл

30%-ной хлорной кислоты. Встряхивают, прибавляют 7,9 мл уксусной кислоты, центрифугируют при 3000 об/мин в те- 4 чение 10,мин.

Прозрачный раствор сливают в кювету и измеряют относительную флуоресценцию стандартного раствора концентрацией 20 мкг/мл и контрольного раствора.

Концентрацию фентоламина гидрохлорида определяют по указанной формуле. Результаты определения фентоламина гидрохлорида в моче (искусственная смесь) приведены в-табл. 2.

Таблица 2

Определение фентоламина гидрохлорида в крови.

2,0 мл крови, содержащей 500 мкг/мл (искусственная смесь), переносят в мерную колбу на 25 мл и доводят объем до метки универсальным буфером (рН 11). Аликвотную часть полученного раствора (5 мл) экстрагируют двойным объемом этилацетата. Этилацетатный слой сливают в выпарительную чашку и выпаривают на водяной бане до 0,050,1 мл, хроматографируют и определяют концентрацию аналогично предыдущей методике.

Результаты определения фентоламина гидрохлорида в крови (искусственная смесь) приведены в табл.3.

Пример Найдено, % Метрологические характеристики

92,0

96,0 х = 94,05

S = 1,33

Результаты поиска оптимальной кон центрации кислоты и ее количества, а также количества уксусного ангидрида представлены в табл.4.

1182346

Таблица 4

Х, Опыт Х

Примечание

Х У

Симплекс

0 5

0,5

1,0

0,1

Sî

Оптим.

1,0

0,1

1,0

0,5

36

1,5

0,1

0,1

2,0

2,0

0,1

15

1,2

0,2

2,0

П р и м е ч а н и е. Х вЂ” концентрация хлорной кислоты, Ж;

Х вЂ” количество хлорной кислоты, мл;

Х вЂ” количество уксусного ангидрида, мл; э

У вЂ” флуоресценция, X.

Продолжение табл.5

Таблица.5 40 ю

10

Время с начала проведения реакции, ч ная инь флу1 ° %

45

80

80

80

SI (1,2,3,4,5)

8 .(3,4,5,6)

S (3,5,6,7)

S4 (3,5,6,7)

8 (3,5,6,9) Интенсивность флуоресценции не изменяется в течение 24 ч. Зависимость интенсивности флуоресценции от времени (С - 5 мкг/мл) приведена в табл.5.

Линейная зависимость между концентрацией фентоламина гидрохлорида и интенсивностью флуоресценции соблюдается в растворах с концентрациями

0 01 - 100 мкг/мл. Зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации раствора фентоламина гидрохло55 рида приведена в табл.6.

1182346

Таблица 6

Относительная интенсивность флуоресценции, Х

23

10,0

0,08

29

20,0

0,09

30,0

0,10

О, 20

40,0

0,30

50,0

58

60,0

0,40

70,0

73

0 50

80,0

0,60

90,0

82

0,70

87

0,80

93

0,90

22

1,0

2,0

3,0

4,0

5 0

6,0

7,0

8,0

9,0 86

Предлагаемый способ определения фентоламина гидрохлорида по сравнению с известным более чувствителен (0,1 мкг/мл и 80 мкг/мл соответственно), избирательность его также высока, так как определению фентолКонцентрация фентоламина гидрохлорида, мкг/мл

Относительная интенсивность флуоресценции, Ж

Концентрация фентоламина гидрохлорида, мкг/мл

100,0

110,0

120,0 амина гидрохлорида не мешают фенкпгидразин, тиоурацил, фенилтиомочевина, тиомочевина, ароматические альдегиды, тропафен, пирроксан и ряд других соединенийа