Способ определения степени агрегации тромбоцитов

 

Изобретение относится к способам определения степени агрегации тромбоцитов при ее индуцировании агрегирующими агентами. Цель изобретения повышение точности и специфичности способа за счет измерения степени агрегации тромбоцитов при использовании в качестве стимулятора тканевого тромбопластина. К 0,9-1,1 мл цитратной плазмы добавляют смесь, составляющую из 0,08-0,11 мл тромбопластина и О,220%-0,300% раствора хлористого кальция, взятых в соотношении 1:1. Образец после добавления смеси перемешивают . С 10-ой по 15-ю мин после перемешивания смеси определяют оптическую плотность образца. Индекс агрегации рассчитывают по соотношению исходной оптической плотности к величине ее максимального снижения. с € ю со со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК цд 4 С 01 N 33/80

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3765331/28-14 (22) 10 ° 07 ° 84 (46) 23.06.86. Бюл. N - ?3 .(71) МГУ им. М.В. Ломоносова (72) В.Е. Пасторова (53) 612.111.7(088.8) (56) Born G.V.R. Aggregation of

bfood platelets by adenosine diphoshate and its reversal.-Nature (Lond)

1962, 194, 927. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ (57) Изобретение относится к способам определения степени агрегации тромбоцитов при ее индуцировании агрегирующими агентами. Цель изобретения—

„„SU„„ l 239602 А 1 повышение точности и специфичности способа за счет измерения степени агрегации тромбоцитов при использовании в качестве стимулятора тканевого тромбопластина. К 0,9-1,1 мл цитратной плазмы добавляют смесь, составляющую из 0,08-0,11 мл тромбопластина и

0,2207-0,3007. раствора хлористого кальция, взятых в соотношении 1 : 1.

Образец после добавления смеси перемешивают. С 10-ой по 15-ю мин после перемешивания смеси определяют оптическую плотность образца. Индекс агрегации рассчитывают по соотношению исходной оптической плотности к величине ее максимального снижения °

39602

Составитель JI. Артк шина

Техред О.Сопко

Корректор М. Максимишинец

Редактор Л. Гратилло

Заказ 3390/44 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д, 4,/5.Производственно-полиграфическое предприятие,„ г. Ужгород, ул. Проектная, 4

1 1 2

Изобретение относится к методам определения агрегационной активности тромбоцитов при ее индуцировании аг— регирую ими агентами, применяемыми в пабораторной практике в области физиологии и биохимии свертывания крови с исследовательскими и клиническими целями.

Целью изобретения является повыш ние точности и специфичности способа за счет измерения степени агрегации тромбоцитов, обусловленной действием эндогенных стимуляторов.

Кровь из вены jugularis здоровых крыс (и-2i) с массой 200 r берут в объеме 4 мл шприцем с 3,87-ным раствором цитрата натрия в соотношении

9:1 соответственно в силиконированные пробирки ° Путем центрифугирования при небольшом числе оборотов (800 об/мин в течение 8 мин) получают ппазму, обогащенную тромбоцитами, с числом тромбоцитов 250000/мм . Плазму, обогащенную тромбоцитами,, помещают в пластиковую пробирку с несмачиваемой поверхностью.

Стандратный тромбопластин из мозга крыс готовят по методу П.Д. Улитиной и Б.А. Кудряшова (1948). Для этого 1 r мозговой ткани при медленном добавлении 10 мл 0,857.-ного раствора

NaC7 растирают в ступке. Полученную тонкую суспензию тромбопластина затем прогревают 14 мин при 57-58 С и перед использованием центрифугируют (2000 об/мин в течение 20 мин) для удаления твердых частиц. Полученный тромбопластин хранят в холодильнике при 4 С. Используют надосадочную.жидо кость. Свертывающая активность тромбопластина, определяемая при 37 С в реакции: 0,1 мл тромбопластина +

+ О, 1 мл 0,025 М раствора CaC z +

+ 0,1 мл крысиной плазмы, составляет 14,5 с.

К 0,9 мл термостатированной при

37 С плазме крыс, обогащенной тромбоцитами и имеющей оптическую плотность

0,80 (измерение производят на ФЗК-2М ипи на нефелометре при зеленом светофильтре в кювете с поперечным сечением 1,003 мм), добавляют. 0,08 мл стандартного тканевого крысиного тромбопластина и 0,08 мл 0,2207.-ного раствора CaCV . Образец тотчас после добавления смеси перемешивают на маг10 нитной мешалке. стержнем с несмачиваемой поверхностью со скоростью

800 об/мин. С 10-ной по 15-ю мин после добавления смеси и перзмешивания определяют оптическую плотность

15 образца. Максимальное ее снижение составляет 0,38 на 15 мин после добавления смеси. Индекс (И) агрегации рассчитывают при соотношении исходной оптической плотности к величине при максимальном ее снижении, И == 2,09, формула изобретения

Способ определения степени агрегации тромбоцитов в термостатированной плазме крови, обогащенной тромбоцита. ми, путем добавления стимуляторов с последующим перемешиванием и определением степени агрегации тромбоцитов по максимальному снижению оптической плотности образца, о т л и ч а ю— ,шийся тем, что, с целью повышения точности и специфичности способа за счет измерения степени агрегации

35 тромбоцитов, обусловленной действием эндогенных стимуляторов, в качестве стимулятора используют гомологичный тканевой тромбопластин, при этом к

0,9-1,1 мл цитратной плазмы добавляют смесь,, состоящую из 0,08-0,11 мл тромбопластина и 0,220-0,3007 раствора хлористого кальция, взятых в соотношении 1:1, а регистрацию оптичес» кой плотности образца проводят с

10-ой по 15-ю мин после добавления смеси.