Способ определения продигиозана
Изобретение относится к медицине . Цель изобретения - увеличение чувствительности способа. Готовят стандартный раствор. 0,01 г порошка продигиозана помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 40 мл нагретого до 90°С 0,9%-ного раствора хлорида натрия. После охлаждения раствора его объем доводят тем же растворителем до метки. В пробирку вносят 0,2 мл 0,03%-ного раствора DL-триптофана, 1,3 мл приготовленного раствора и 5 мл концентрированной серной кислоты. Затем готовят исследуемый раствор. В пробирку вносят 0,03% DL-триптофана, 1,3 мл 0,02%-ного раствора продигиозана и 5 мл концентрированной серной кислоты. Приготовленные растворы встряхивают, нагс ревают в течение 5 мин. После охлаждения растворов проводят количествен (Л ное определение продигиозана на спектрофотометре при AMQKC - 320 нм. 2 ил.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК (51)4 А 61 К 31/715
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3882094/28-14 (22) 12.04.85 (46) 30.11.86: Бюл. Р 44 (71) Центральный ордена Ленина институт усовершенствования врачей и Всесоюзный научно-исследовательский институт фармации (72) -Л.Е.Щедрина, Л.И.Брутко и Г.А.Растунова (53) 616-094(088.8) (56) Щедрина Л.Е., Брутко Л.И., Растунова Г.А., Щербакова Э.Т. Антибиотики. 1984, т. 29, с. 410 413. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДИГИОЗАНА (57) Изобретение относится к медицине. Цель изобретения — увеличение чувствительности способа. Готовят стандартный раствор. 0,01 r порошка
„ЛК 12 110 А1 продигиозана помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в
40 мл нагретого до 90 С 0,97-ного раствора хлорида натрия. После охлаждения раствора его объем доводят тем же растворителем до метки. В пробирку вносят 0,2 мл 0,037-ного раствора
DL-триптофана, 1,3 мл приготовленного раствора и 5 мл концентрированной серной кислоты. Затем готовят исследуемый раствор. В пробирку вносят
0,037 DL-триптофана, 1,3 мл 0,027.-ного раствора продигиозана и 5 мл концентрированной серной кислоты. Приготовленные растворы встряхивают, нагревают в течение 5 мин. После охлаждения растворов проводят количественное определение продигиозана на спектрофотометре при 1 „, = 320 нм. 2 ил.
1I 12731
Изобретение относится к фармации, а именно к способам количественного определения бактериальных липополисахаридов, применяемых в медицине в качестве лекарственных препаратов.
Цель изобретения — увеличение чувствительности способа путем предварительной обработки рас вора продигиозана триптофаном в присутствии концентрированной серной кислоты при 10 нагревании.
Способ осуществляется следующим образом.
Определение содержания продигиозана начинают с пригс говления О,ОЗХ-но- 15 го водного раствора DL-триптофана.
С этой целью 0 015 г порошка DI,-триптофана (точная навеска) вводят в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 40 мл нагретой до 90 С дис- 20 тиллированной воде, после охлаждения раствора до комнатной температуры его объем доводят тем же растворителем до метки.
Затем приготавливают стандартный и исследуемый растворы. Приготовле ние стандартного раствора: 0,01 r порошка продигиозана (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 40 мл нагретого до 90 С 0,97-ного раствора натрия хлорида, после охлаждения раствора до комнатной температуры его объем доводят тем же растворителем до метки. Далее в пробирку вносят 35
0,2 мл 0,037-ного раствора DL--триптофана, 1,3 мл приготовленного раствора и 5 мл концентрированной серной кислоты. Приготовление испьггуемого раствора: в пробирку вводят 40
0,2 мл О,ОЗХ-ного раствора DL-триптофана, 1,3 мл испытуемого 0,02Х-ного раствора продигиозана и 5 мл концентрированной серной кислоты. Все растворы готовят в пяти повторностях. 45
Приготовленные растворы встряхивают, нагревают на кипящей водяной бане в течение не менее 5 мин, по охлаждении растворов до комнатной температуры проводят количественное опреде- 50 ление продигиозана на спектрофотометре СФ-!6 при „ „, 320 нм в кюветах с толщиной рабочего слоя 1 см. Раствором сравнения служит раствор, содержащий 0,2 мл О,ОЗХ-ного раствора 55
Ж-триптофана, 1,3 мл 0,9Х-ного раствора натрия хлорида и 5 мл концентрированной серной кислоты.
1П 2
Содержание препарата рассчитывают по формуле
D „4-10 5 с где Х содержание препарата, г/мл; оптическая плотность исD
Иссл следуемого раствора;
D., — оптическая плотность стандартного раствора;
4 10 — содержание продигиозана в 1 мл стандартного раствора;
5 — разведение исследуемого раствора.
Содержание продигиозана в исследуемых 0,027-ных растворах составляет 1,899.10 — 2.075.10 " г/мл, что соответствует 0,019-0,0217.
Результаты количественного спектрофотометрического определения продигиозана в 0,02Х-ных растворах:
Пол уч е но, г /мл
2,075.10
1,975.10
1,901.10
1,899.10
1,955.10
Взято, г/мл
2.10 4
2.10
2.10
2.10
2.10
Предлагаемый способ характеризуется большей (в 5 раз) чувствительностью в сравнении с известным, так как количественное определение продигиозана проводится по компоненту молекулы продигиозана — комплексу полисахарида и липида А, ответственному за терапевтический эффект препарата, в отличие от известного способа, согласно которому определение проводят по нуклеиновой кислоте, не связанной с лечебным действием. Способ позволяет сократить расход препарата, необходимого для проведения анализа, в 5 раз.
Построение калибровочной кривой.
В ряд пробирок добавляют по 0,2 мл
0,037.-ного раствора DL -триптофана, по 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 мл приго— товленного раствора продигиозана, соответственно по 1,2; I,I; 1,0; 0,9;
0,8 мл 0,97.-ного раствора натрия хлорида. Во все пробирки добавляют по
5 мл концентрированной серной кислоты ° Bce пробирки встряхивают и нагревают на кипящей водяной бане в течение не менее 5 мин. После охлаждения растворов до комнатной температуры
1273
110 4 способу достигаются в пять раз большими концентрациями препарата (фиг.2).
Формула изобретения
Способ определения продигиозана, включающий проведение спектрофотометрического исследования раствора продигиозана с последующим определением его количества по калибровочной кривой, отличающийся тем, что, с целью увеличения чувствительности способа раствор продигиозана предварительно обрабатывают раствором DL-триптофана в присутствии концентрированной серной кислоты при нагревании в течение не менее 5 мин, а оптическую плотность измеряют при
= 320 нм.
100 ЛЮ
C, магг/мл
Риг. 8
Ю 80 50 с, мкг,Гмбх
Рпг. f
Составитель А.Агуреев
Редактор И.Рыбченко Техред Л.Сердюкова
Корр ект ор В. Синицкая
Заказ 6365/6,Тираж 660 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
1роизводственно-полиграфическое предприятие, г ° Ужгород, ул. Проектная, 4 проводят измерение величины оптической плотности на спектрофотометре
СФ-16 при 1„ 320 нм в кюветах с длиной оптического пути 1 см.
Затем строят калибровочную кривую, 5 где по оси абсцисс откладывают концентрацию продигиозана С в мкг/мл, а по оси ординат — оптическую плотность в единицах оптической плотности. tO
Как видно из фиг. 1, прямо пропорциональная зависимость между концентрацией растворов и величиной оптической плотности наблюдается в пределах концентраций 0 — 50 мкг/мл. 15
Те же значения величины оптической плотности при регистрации концентрации продигиозана по известному
08
07 аоб ою 6 04
Я ОS ог 01, 0,á
1 уО5
%04
biz
В ,0Z
601
