Способ получения растений злаковых культур из пыльцы

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений, и может быть использовано для ускоренного создания (за 1 год) константных селекционных форм. Цель изобретения - повьпиение выхода растений . Для получения растений из пыльцы пшеницы использовали пьшьники двух нижних цветков 4-14-х колосков средней части колоса. Пыльники культивировали на питательной среде, стимулирующей эмбриогенез. Через 34 недели из полости пьшьника появились эмбриоиды (Э). Э отделяли от пьшьников и переносили на среду для прорастания Э. На этой среде Э культивировали в течение 4 недель до получения (из некоторой части Э) первой группы растений. После чего жизнеспособные , но непроросшие Э бьши пересажены на свежую питательную среду и подвергнуты в течение 5-7 а 9 дней охлаждению при , рля выведения Э из состояния покоя. После ох (Л лаждения Э опять культивировали в течение 4-х нецель. Из 141 Э после периода культивирования и трех последующих охлаждений бьшо получено 94 растения, т.е. 66,7% от всего количества Э. 3 табл. to о: оо

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4, A 01 Н 3/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

"с, а

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ.И ОТКРЫТИЙ (21) 3868302/30-15 (22) 01. 04.85 (46) 15 ° 12.86. Б!сш. М 46 (71) Саратовский государственный упинерсигет им. Н.Г.Чернышевского (72) Т.Ф.Зайкина, В.N.Ñóõàíoâ и В.С.Тырнов (53) 63 1.522(088.8) (56) Bernard S. Tn vitro androgenesis in hexaploid tritica1i: determination of phisica1 conditions increasing embryoid and green plant production.-Pf1апяепкисhtnng,1980, vol. 85, Р 4, р. 308-321, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕИИЯ РАСТЕНИЙ ЗЛАКОВЫХ КУЛЬТУР ИЗ ПЫЛЬЦЫ (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений, и может быть использовано для ускоренного создания (за 1 год) константных селекционных форм. Цель изобретения — повышение выхода растений. Для получения растений из

„„SU„, 1276309 А1 пыльцы пшеницы использовали пыльники двух нижних цветков 4-14-к колосков средней части колоса. Пыльники кух!ьтиниpонaли на питательной среде стимулирующей эмбриогенез, Через 34 недели из полости пыльника появились эмбриоиды (Э). Э отделяли от пыльников и переносили на среду для прорастания Э. На этой среде Э культивировали в течение 4 недель до получения (из некоторой части Э) первой группы растений. После чего жизнеспособные,но непроросшие Э были пересажены на свежую питательную среду и подвергнуты в течение 5-7 дней охлаждению при 7с С для выведения Э из состояния покоя. После охлаждения Э опять культивиранали в течение 4-х недель. Из 141 Э после периода культивирования и трех последующих охлаждений была получено, 94 растения, т.е. 66,77 ат всего количества Э. 3 табл.

1276309

Выход растений из пыльцы пшеницы линии АД-147

Таблица 1

Стадия получения растений

Количество эмбриоидов

Выход растений погибших альбиносов зеленых всего всех

После культивирования 141

21

44 (31,27

После I-ro охлаждения 69

39 (27,7Ж) 18

Изобретение относится к с ельскому хозяйству, в частности к селекции растений, и может быть использовано для ускоренного создания (за 1 год) константных селекционных форм — родоначальников новых сортов или ценного материала для гибридизации, а также в экспериментальной биологии, исследованиях по генетике, физиологии, биохимии, эмбриологии и морфогенеза растений.

Цель изобретения — повышение выхода растений.

Пример осуществления. Получение растений из пыльцы пшеницы линии АД-147.

Донорные растения пшеницы линии

АД-147 выращивали в поле. Колосья срезали, когда влагалище предпоследнего листа находилось на уровне центральной части колоса. Срезанные побеги с колосьями ставили в водопроводную воду и помещали на 7-10 сут в холодильную камеру с температурой

1-3 С. После предобработки пониженной температурой колосья вместе с листовой оберткой стерилизовали в течение 5-7 сут водным раствором диацида (0,33 г этанолмеркулхлорида, 0,60 r цетилпиридинийхлорида, О, 1 мл

Твин-20 на 1 л водя|), после чего промывали тремя порциями стерильной воды. Затем колосья освобождали от листовых оберток. Для культивирования использовали пыльники двух нижних цветков 4-14-х колосков средней части колоса. В пробирки диаметром

16 мм, соцержащие по 10 мл питательной среды для культивирования пыльников (среда У 1), помещали по 15 пыльников.

5 Среда Р 2 содержала, мг/л: макрои микросоли по Гамборгу В, тиамин

0,5; пиридоксин 0,5; мезойнозит 100 нпкотиновая кислота 1; аскорбиновая кислота 1; сахароза 110000; агар

7000; 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д) 0,25. Перед автоклавированием рН среды доводили до 5,86,0. Пробирки с пыльниками инкубировали в темноте при 27+1С и относительно влажности 70-807..

Через 3-4 недели культивирования из полости пыльника появлялись эмбриоиды, возникающие из пыльцы. По мере появления. эмбриоиды отделяли

20 от пыльников и переносили на среду для прорастания эмбриоидов (среда

9 2). Среда У 2 отличалась от среды

N 1 вдвое меньшей концентрацией

F-хеллата, меньшей концентрацией сахарозы (10000 мг/л); 2,4-Д заменяли 3-индолилуксусной кислотой в кон; центрации 0,2 мг/л.

На среде У 2 эмбриоиды икубировали при 16-часовом фотопериоде (осве30 щенность 2000-5000 лк), температуре о

27+1 С и относительной влажности

70-80Х.

Культивирование осуществляли в течение 4 недель до получения (из некоторой части эмбриоидов) первой группы растений. Результаты представлены в табл. 1.

Продолжение табл. 1

i 76 3П9

Выход растений

Стадия получения растений! I<>! пп Г!их всех всего

После I-го охлаждения

5 (3, 5%) После III-rn охлаждения б (4, 3%) Количество эмбрилидон

Как следует из табл, 1, пз 141 эмбриоида, вычисленного из пыльникон и культивируемого при температуре прорастания, 28 эмбриоидов погибло, 25 из 21 эмбриоида получены растенияальбиносы и из 23 эмбриоидов — зеленые растения. Всего после периода культивирования получено 44 растения, (т.е, 31,2% от всего количества эмбриоидов). После этого 69 жизнеспособных, но непроросших эмбриоидов были пересажены на свежую питательную среду Р 2 и подвергнуты в течение 5 сут охлаждению при 7 С для выведения их из состояния покоя. 35

После охлаждения их опять культивировали при температуре прорастания (27+1 С) и фотопериоде в течение

4 недель. Как следует из табл. 1, из 69 эмбриоидов 13 погибло, от 21 и 18 эмбриоидов получены альбиносные и зеленые растения соответственно. Всего после 1-ro охлаждения было получено 39 растений (т.е.

27,77. от всего количества эмбриоидов). 17 жизнеспособных, но не проросших после 1-ro охлаждения эмбриоидов были пересажены на свежую питательную среду и подвергнуты II-му охлаждению в течение 5 сут при 7 С.

После II го охлаждения и культивироальбиносов зеленых вания в течение 4 недель при температуре прорастания было получено еще 5 растений (т.е. 3,5% от всего копичьства эмбриоидов) (см. табл. 1).

После III-ro охлаждения (см. табл.1) выделено еще б растений (4,3%). Таким образом, из 14! эмбриоида после периода культивирования и трех последующих охлаждений было получено 94 растения, т.е. 66,77. от всего количества эмбриоидов. После трех последовательных охлаждений выделено 50 растений (35,5%. от всех полученных эмбриоидон). Результаты, приведенные в примере 1, свидетельствуют о значительном повышении выхода растений из пыльцы при использовании предлагаемого способа.

Данные о влиянии длительности охлаждения эмбриоидов на выход растений представлены в табп. 2 и 3.

Как следует из табл. 2, выход рас— тений в зависимости от длительности охлаждения эмбриоидов колеблется от

8,7 до 17,37., в то время как согласно предлагаемому способу выход растений без охлаждения эмбриоидов при получении первой фракции растений находится в пределах 27,5-3 1,2% (см, табл. 1).

1276309

Та блица 2

Выход растений из пыльцы пшеницы при охлаждении (7 С) эмбриоидов до получения первых растений

Количество эмбриоидов

Выход растений всех типов

Длительность охлаждения, сут погибших всего

31(13,47)

9(17,3X)

2(8,77) 231

52(657)

23(82, 1т) 80

Таблица 3

Выход растений из пыльцы пшеницы в зависимости от длительности охлаждения эмбриоидов

Выход рас.тений

Количество

Длительность охлаждения, сут охлажденных эмбриоидов альбиносов зеленых

Btt põ типов

22

84

25

12

10 б Формула изобретения

Способ получения растений злаковых культур из пыльцы, заключающийся в культивировании пыльников на

55 питательной среде, стимулирующей эмбриогенез, отделении эмбриоидов от пыльников, пересадке эмбриоидов на питательную среду для прорастания

Из табл ° 3 следует, что наибольший выход растений (57,2-64,37) достигается при охлаждении эмбриоидов в течение 6-7 сут, Применение изобретения позволяет получать в массоном количестве растенич, служащие исходным материалом для сел ьс Y ох(13 лйс r Бе ннь!х работ по созданию новых сортов растений.

30(32,27)

39 (49, 2X)

48(57,27)

18(64,37.)

16(41,2X)

12(40X) !

276309

Составитель С.Куваева

Техред Л.Сердюкова Корректор В.сутяга

Редактор А.Orap

Тираж 679 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 6605/2

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 и охлаждения их в этой среде для выведения из состояния покоя с последующим культивированием при оптимальной температуре, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью ловы- 5 шения выхода растений, после прорастания эмбриоидов оставшиеся непроросшие эмбриоиды переносят на свежую среду для прорастания и перед культивированием охлаждают в течение

5-7 дней, при этом охлаждение и культивирование повторяют для каждой оставшейся партии жизнеспособных эмбриоидон цо получения растений из всех жизнеспособных эмбриои,цов.