Питательная среда для микроклонального размножения косточковых культур

 

Использование: в сельском хозяйстве и биотехнологии, в частности для микроклонального размножения косточковых культур. Сущность изобретения: питательная среда на основе половинной концентрации макро- и микросолей по Мурасиге-Скуг содержит дополнительно в качестве стимулятора роста экстракт алоэ 8 12 мг на 1 л среды. 2 табл.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для ускоренного размножения посадочного материала косточковых культур на основе культуры ткани зиготических зародышей.

Известны питательные среды для получения дополнительных побегов с целью микроклонального размножения и получения побегов нормальных параметров (Олешко Е.В. Особенности размножения вишни in vitro. Сб. Культура клеток растений и биотехнология, М. 1986, с. 117-120; Попов Ю.Г. Высоцкий В.А. Трушечкин В.Г. Культура изолированных стеблевых верхушек вишни. Физиология растений, 1976, вып.3, т.23, с. 513-518).

Недостатками этих сред являются длительный период выращивания культур, недоразвитость побегов, низкий процент размножения, дороговизна добавляемых в питательные среды стимуляторов роста.

Наиболее близкой по технической сущности к изобретению является классическая питательная среда Мурасиге-Скуга (1962) в половинном объеме (Свитайло А. М. Размножение in vitro сортов вишни Метеор и Норд Стар. Киев: Садоводство, 1986, вып.34, с.57-58).

Состав среды прототипа следующий, мг/л: основные неорганические питательные вещества: NH₄NO₃ 825 KNO₃ 950 CaCl₂ ˙ 2H₂O 220 MgSO₄ ˙ 7H₂O 185 KH₂PO₄ 85 H₃BO₃ 6,2 MnSO₄ ˙ 4H₂O 22,3 ZnSO₄ ˙ 7H₂O 8,6 источники микроэлементов: K1 0,93 NaMoO₄ ˙ 2H₂O 0,25 CuSO₄ ˙ 5H₂O 0,025 CoCl₂ ˙ 6H₂O 0,025 FeSO₄ ˙ 7H₂O 5,6 органические вещества: Тиамин хлорид 0,4 Пиридоксин хлорид 0,1 Мезоинозит 100,0 Глицин 2,0 Гибберелловая кислота 0,1 6-БАП 0,5 Сахароза 30000 Агар 5000 Недостатками известной среды являются длительность процесса размножения: срок от высадки до появления дополнительных побегов составляет 2-3 мес. низкий коэффициент размножения, полученные черенки не достигают стандартных размеров для высадки в грунт, дороговизна используемых фитогормонов глицерина, гибберелловой кислоты, 6-БАП.

Целью изобретения является сокращение сроков размножения, уменьшение себестоимости питательной среды.

Цель достигается тем, что предлагаемая питательная среда для микроклонального размножения, содержащая половинную концентрацию макро- и микросолей по прописи среды Мурасиге-Скуга, в качестве стимулятора роста содержит экстракт сока алоэ 8-12 мг/л, выпускаемый медицинской промышленностью для лечебных целей в ампулах. Благодаря новой совокупности компонентов достигается положительный эффект, а именно значительно сокращаются сроки размножения побегов, повышается коэффициент размножения, а также повышается эффективность выхода стандартных черенков для следующего этапа укоренения.

П р и м е р. Проводили исследования развития незрелых зародышей (стадия развития "сердечко") видов вишни: Cerasus sachalinensis, Cerasus serrulata "Hally Tolivetta", Cerasus vulgaris (сорт Владимирская). Эксплантанты высаживали на питательные среды составов, приведенных в табл.1. Маточные растворы макро- и микроэлементов, регуляторов роста и витаминов готовили на бидистиллированной воде. Растворы хранили в холодильнике. Питательную среду готовили общепринятыми методами. Автоклавирование проводили при 0,8-1 атм в течение 20-30 мин.

В ламинарном боксе из незрелых плодов извлекали зародыши, высаживали их на питательные среды в пробирке и ставили на рост в камеру. Условия культивирования: температура 26-27^о, длительность светового периода 16 ч, освещенность 2000 лк, влажность 70% Через 2-3 нед каждый исходный эксплант дифференцировал до 25 нормально развивающихся побегов длиной 20-30 мм. По 20 шт. высаживали на укоренение, остальные оставляли для микроклонального размножения.

В табл.2 представлены основные параметры развития регенерантов при выращивании на испытуемых питательных средах с различным соотношением компонентов. Из табл. 2 следует, что питательная среда предлагаемого состава обеспечивает значительное по сравнению с прототипом сокращение сроков размножения до 10,5+0,8 дн вместо 80-150 и увеличение коэффициента размножения до 1: 30-35, а также повышение эффективности выхода стандартных черенков для укоренения в грунте.

Использование изобретения позволяет сократить сроки размножения побегов, повысить эффективность выхода стандартных черенков при коэффициенте размножения 1:30-35, повысить эффективность процесса дифференциации эксплантантов независимо от генотипа, увеличить общую производительность селекционного процесса от высадки незрелых зародышей на питательную среду до укоренения и высадки растений в грунт, значительно снизить себестоимость среды.

Формула изобретения

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ КОСТОЧКОВЫХ КУЛЬТУР, содержащая аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, кальций хлористый двухводный, магний сернокислый семиводный, калий фосфорнокислый однозамещенный, борную кислоту, марганец сернокислый четырехводный, цинк сернокислый семиводный, калий йодистый, натрий молибденовокислый двухводный, медь сернокислую пятиводную, кобальт хлористый шестиводный, железо сернокислое семиводное, мезоинозит, сахарозу, тиамин хлорид, пиридоксин хлорид, стимулятор роста, агар и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит в качестве стимулятора роста экстракт алоэ при следующем соотношении компонентов, мг/л: Аммоний азотнокислый 820,0 830,0 Калий азотнокислый 945,0 955,0 Кальций хлористый двухводный 215,0 225,0 Магний сернокислый семиводный 180,0 190,0 Калий фосфорнокислый однозамещенный 75,0 90,0 Борная кислота 6,0 5,7
Марганец сернокислый четырехводный 20,0 24,5
Цинк сернокислый семиводный 8,0 8,6
Калий йодистый 0,9 0,95
Натрий молибденовокислый двухводный 0,23 0,28
Медь сернокислая пятиводная 0,023 0,028
Кобальт хлористый шестиводный 0,023 0,028
Железо сернокислое семиводное 5,4 5,8
Мезоинозит 90 110
Сахароза 25000 35000
Тиамин хлорид 0,3 0,5
Пиридоксин хлорид 0,08 0,15
Экстракт алоэ 8,0 12,0
Агар 5000 5200
Вода До 1 л

РИСУНКИ

Рисунок 1