Штамм вируса есно-11 используемый для приготовления диагностических препаратов

 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано при производстве диагностических препаратов. Цель изобретения - повьппение чувствительности и специфичности штамма. Штамм вьщелен от больного ребенка, депонирован под номером ГКВ № 1853. Используя штамм № 1853, получают диагностикум (I) и иммунную сыворотку (II), которые используют для определения титра антител к вирусу ЕСНО-11 у больных (I) и в реакции нейтрализации (II). 1 табл. (Л э it; 3 35

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (!9) (И) ИО 4 С 12 )1 7/ОО//(С 12 )) 7/ОО, С 12 R I:91) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4017757/28-13 (22) 31 Ol 86 (46) 23.10,87. Вюл. У 39 (71) Свердловский научно-исследовательский институт вирусных инфекций (72) С.Ф.Закирова, Л,В.Власова, Г.Г.Колесникова, H.Ï.Ãëèíñêèõ и Г.П.Степанова (53) 576.858 (088.8) (56) Подоплекин В.Д. Вирусы ECHO (биологические свойства, характеристика штаммов) . Автореф. докт. дисс.

М., )975. (54) ШТАММ ВИРУСА ECHO-1 1, ИСПОЛЬЗУЕМЫИ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (57) Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано при производстве диагностических препаратов. Цель изобретения — повышение чувствительности и специфичности штамма. Штамм выделен от больного ребенка, депонирован под номером ГКВ У 1853. Используя штамм

У 1853, получают диагностикум (I) и иммунную сыворотку (II), которые используют для определения титра антител к вирусу ECHO-11 у больных (I) и в реакции нейтрализации (II).

1 табл.

I 3466

Изобретение относится к медицинской вирусолог ии и может быть использовано при производстве диагностических препаратов, Цель изобретения — повышение чувствительности и специфичности штамма.

Штамм ECHO-ll выделен от больного ребенка и получен путем посева инфекционного материала на чувствительную культуру клеток ФЭЧ с последующим проведением двух пассажей на этой же культуре клеток и является новым антигенным вариантом. 15

Штамм допонирован в Государственной Коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И.Илагговского под номером ГКВ 11 1853 и характеризуется следующими признаками ° 20

Культурально-морфологические признаки.

При культивировании штамма

l1> 1853 на клетках ФЭЧ>.первичньгх клетках почек обезьян, на перевивле- 25 мых клетках м, -41, RH и ЛЭЧ вызывает четко выраженный цитопатогенный эффект, характерный для энтеровирусов, Титры вируса на этих культурах клеток достигает 5,0-7,0 1g ТЦД /мл. ЭО

Клеточные линии ПЕр-2 и ПЭТ (почки эмбриона телят) не чувствительны к штамму 11 1853 вируса ECHO-ll.

Устойчив к действию хлороформа> эфира. В присутствии 1М раствора хло35 ристого магния и хлористого кальция штамм сохраняет инфекционные свойства в культуре клеток после прогревао ния при 50 С в течение 1 ч, Обладает характеристикой rct40 .

Антигенные свойства.

Штамм после 4-5 пассажей на клетках ФЭЧ и первичных клетках почек обезьян (ПО) не вызывает агглютинации эритроцитов человека всех трех групп. Не патогенен для мышей-сосунков. Стимулирует продукцию специфических антител в организме кроликов, Антисыворотка к штамму ll 1853 нейтрализует штамм Gregori и штаммы, выделенные от бспьных с поражением сосудистого тракта.

Пример l. Получение диагностикума., 1иагностические препараты для постановки иммун погических реакций попучают путем заражения культуры клеток фибробггастов эмбриона человека (Ф 1Ч . ФЭЧ вырашивают в матрасах емкостью 0,25 л. В матрас высевают

74

6 млн клеток на 30 мл среды роста.

Состав среды роста: О, 57. гидролизат пактальбумина и 107 нативной сыворотки крупного рогатого скота без консерванта. Клетки формируют монослой о через 48-72 ч инкубации при 37 С.После достижения монослоя среду роста сливают, клетки однократно отмывают раствором Хенкса и заражают вирусом

ЕСПО-11 штамм 11 1853, Вирус вносят в объемс 1 мл на 30 мл среды поддержания (из расчета, что заражающая доза составляет О,l ТПД на 1 кпетку) .

После равномерного распространения инокупята по поверхности клеток через 60 5 мин контакта при температуре 37 С, матрасы с монослоем заливают средой поддержания, состояшей из среды 199 беэ сыворотки.

Инфицированные культуры инкубируо ют при 37 С до наступления полной дегенерации клеточного пласта. Для освобождения от клеточного детрита содержимое матрасов подвергают термолизису (одно-двукратному замораживао нию при температуре минус 20 С с последуюгяим оттаиванием при температуре

23 3 С) . Попученный препарат может быть использован для определения титра антител к вирусу ЕСНО-11 у больных с целью расшифровки вспышки заболеваний предположительно энтеровирусной этиологии, а также дпя изучения иммунопогического фона у здорового населения.

Пример 2. Получение иммунной сыворотки. Для получения иммунной сыворо тки к штамму ll ) 853 иммунизируют кроликов весом 2-3 кг трехкратно с интервалами в 3 и 2 недели между введениями. Вирус вводят внутривенно в объеме 10 мл (титр вируса 7,0 1g

ТПД, /мл). Через 10 дней после последней иммунизации производят обескровливание животных, Полученную сывоо ротку инактивируют при 56 1 С в течение 30 5 мин и используют в реакции нейтрализации.

Использование штамма 1853 в качестве антигена в реакции нейтрализации дает воэможность установить диагностическое (в 4-128 раз) нарастание титра вируснейтрализующих антител у 66,67. обследованных больных при изучении вспышки заболеваний среди детей с синдромом увеита. ПрименеУровень вируснейтрализующих антител

Наличие изолята

Возраст больного к штамму 1) 366 мес к штамму проба I

I I проба I проба II проба

«1:4

«1:4

I: 256

I:8

Не выделено

ECHO-1) из фекалии (1:4

I:16 с) 4 1 64

1:32 I:64 ):256

1 Не выде- c):4 лено

ECHO-1 1 иэ мочи I:64

1:128 1:64 1:256

11 ECHO-11 иэ крови 1:8

1:8 1:256

1:)6

4 ECHO-11 иэ мочи 1:8

I:32 1:256

1:64 1:256

1:16

10 Не выде- !:4 лено

1:8

I:256 1:256

1:4

8 ECHO-I I

1:4 из смыва конъюнктивы

Составитель В,Дроздов

Редактор Г,Волкова Техред И.Попович Корректор И. Эрдейи

Заказ 5096/26 Тираж 499 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул,Проектная, 4

3 )34 ние известного штамма Gregori npu изучении тех же об ра зцов сывороток позволяет выявить иммунологические сдвиги в крови больных у I)7. обследованных. Наличие положительной сероконверсии у больных, но выделявших вирусы, позволяет серологически подтвердить факт инфицированности этой группы лиц вирусом EÑÍO-II явившимся причинным агентом возникновения вспышки заболевания, сопровождавшегося синдромом поражения глаз у детей раннего возраста.

В таблице представлены в качестве примера результаты исследований в ре6674 акции нейтрализации проб крови (? и

II) от больных, вылелявших и не выделявших вирусы.

Использование вируса ECHO-II штамм

ГКВ N - 1853 позволяет в большем проценте случаев выявить положительную сероконверсию у больных, а также определить более высокий уровень антител, Формула изобретения

Штамм вируса ЕСН0-11, ГКВ Ф 1853, используемый для приготовления диагностических препаратов.