Способ определения токсичности питательной среды, используемой для выращивания культур животных клеток

 

Изобретение относится к области биотехнологии и касается определения токсичности питательной среды, используемой для выращивания культур животных клеток. Цель изобретения - ускорение способа. Сущность способа сводится к тому, что культуру клеток выращивают параллельно в испытуемой и контрольной средах, затем выросшие культуры снимают версеном или трипсином , пробы переносят в полярографические ячейки, термостатируемые при 37°С, и измеряют скорость потребления кислорода Затем в опытную пробу вносят оуабин до конечной концентрации 110 Ми повторно измеряют скорость потребления кислорода Определяют долю оуабаинзависимого дыхания при уменьшении величины оуабаинзависимого дыхания по сравнению с контролем определяют среду как токсичную. Если процент, ингибирования оуабаином дыхания клеток на испытуемой среде выше или близок к контролю, определяют питательную среду как нетоксичную для клеточных культур, 3 табл о сл 00 со 4

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3971634/28-13 (22) 28.!0.85 (46) 15.09.87. Бюл, ¹ 34 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт молекулярной биологии

Главмикробиопрома (72) Л.Д.Мартынец (53) 576.8.093.3 (088,8) (56) Metcalte S.M. Cell culture as a

test system for toxicite, J. Pharm.

Pharmal, 1971, и, 23, р. 817-823.

Shoji Marvora "Estimation of toxicity using cultured mammalian coll

of the organic pollutants recovered

from 1 аге Biwa uWater Research 1978, v. 12, р, 371-375 ° (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ

ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ДЛЯ

ВЫРАЩИВАНИЯ КУЛЬТУР ЖИВОТНЫХ КЛЕТОК (57) Изобретение относится к области биотехнологии и касается определения токсичности питательной среды, исполь(511 4 С 12 Q 1/04//(С 12 0 1/04, С 12 R 1:91) зуемой для выращивания культур животных клеток, Цель изобретения — ускорение способа, Сущность способа сводится к тому, что культуру клеток выращивают параллельно в испытуемой и контрольной средах, затем выросшие культуры снимают версеном или трипсином, пробы переносят в полярографические ячейки, термостатируемые при

37 С, и измеряют скорость потребления кислорода, Затем в опытную пробу вносят оуабин до конечной концентрации

1 10 М и повторно измеряют скорость потребления кислорода. Определяют долю оуабаинзависимого дыхания при уменьшении величины оуабаинзависимого дыхания по сравнению с контролем определяют среду как токсичную.

Если процент, ингибирования оуабаином дыхания клеток на испытуемой среде выше или близок к контролю, определяют питательную среду как нетоксичную для клеточных культур. 3 табл.

Изобрете?(г(е 0T(loc?(т я логии и может быть ясl лf)»О „". О;; н контроле качеств» (1?! "а cpJ(»f: . (Оеп, исполь зуемых для ))нра(()ив»н?(.«(у. (ь ур клеток, Целью изобрете:(ия;13 (яет»5: .Г;,;;(НИЕ СПОСОбал

11 р и м е р, Определен(= токов( ности питательной среды il(: 1 -) --ц Он,.

ДЯ Т С (Л С П O:1 Ь 3 О Б Л I IH <1. >1 ?:. 1 - 1 О ) I О Й К y! л: туры Â(1Ê-21 ((; 1 1 .

С маточно(о Г< Гу;(» .- к;-=точной

КУЛЬтУРОй ?3 СтЕР?(Л!л((Ь()(УС11.13!15I: С; ?1вают отработанную среду.,:: но(-, и

ЗаЛИВ»Ют 0,2 )j — НЬ)М ТpHIIC:3)л: (, . i:H..товленным на растворе Хз (кс» (сo.lil

К»ЛЬцня И МаГНИя 1 .Е,:)об«?35).i r)T) 1( р ЕЗ i — 2 МИН р» Ст Вор -. рп i)! H 1:1 (.Jl?.!i;;, Б ПОЛУЧЕШ(УЮ СУС(лЕНЗИЮ i

СВЕЖУЮ СРЕДУ С CblEIOP Q )

B камере Горяче?3(), Ле (аю(р-«звс;(он;)( до посевнГ)й дозы 1С0000 к:r! 1»,(:»ра:— лельно на контрольной и и<.г),1; уем(нг средах) . Суспензию E)b(r.eE)ai(>T в 1001>0 мл сосуды ((е менее 3--- co: дсв л на каждую питательную сред(,) . 1()c.:P. термостатирования при 37 :. в r;- че)(н<

2-3 дней клетки снимают н:- (тер<)льн:>

0,0257,— ным раствором зерсенa 11»;>;ic воре Хэ икса, Суслеi!H)lируют к".p. I(H

1-2 мл контрольной среды;" «(3 сз;вор(,"ки негосредстве)(но I(pред (..р:ел(ле)(но(дыхания клеток. Суспензпю 1:лет(::(ОбЪЕМЕ МЛ i,2, 1- 1., 1 МЛ))л Х ИЕ Г<. К, вносят в тСрмостатируем(у)Г (ри но)(ярГ)граф?(ческук) ячсйKó .: 3»:",, ы гым электродом т?)п.;; K."арк», .1 )i iH C: iil ": скорость потребления гп(с (О1:<)(),1 к»ми 3 течение 2 — 3 мин.:;:тем " lo я"

Oy »C) ñiltll Б КОНЕЧНОЙ КОII);(-Н i ):;Ннll ) х 10 1 -i снова 3»ни ы „ i)T: (с ро cт е) потp PблеH?(Я )

Оп )еделя!ят Et; (О:.51 ро и, )ме .. )ля

CKOpOr TF ПОТОЕб) Е)И(я <л)(:lrr ),r« (-, = НИЯ y:f(;1è::;. -..., ., ПС СЛЕ ННЕ(1 ?л 1 lf ) ,) i. « " н .:. i i p (з «3H си (ма я, i:". 1; i; r r:; l )i Г i-. l O l" ()Ь! Х, )11 ?3 31

))

0

;,;- lõ .«1(н я:...11: c) llr. H н от Об));е г(.х(! 111(?r (с)ст )к, 1о я О3 Bб с3?!нз ависH.I: К);1:ТО 1 а ((ОНТРОЛЬНС ?(ГРЕ.:Ос",:1..:.яе". 1 i-(,, )fа ?:с.!ытуеь!О?(,; -дс:l!,Г 1, i l - "+!i>8;:,, Б)(во; — < реп«

1 . в". .i r 1. я " Ок сиi) )(ОH . Г Т,IC)J(— 3 и )НВЕПЕНЫ,)ЕЗ )(Ьтат!)

: че;(ов(1н?15! пи-гак альных сред, Hc., i>зу((л((к;).1); (i «« l;I;::i: ку: )--;p l(Hå— л

Ср;11311.;l И r .:. : -. Н(!О, )feil J!и Он»нис )1; ед, !Оженно) О сп< СОуc_#_()ряет Ii у))ро)к()ек Опреде )BE(?!p Н НСJ(3) л)Е! .Hl (?!i 1 (-"! 1 Hi(..!)л)" p P 3 у.l ЬТа, С )!

; ° 3)3(-: Тfrl i« -.Оr !:б r,,°, ;) м,:!, 1) з (. б р е т е и 1. я

-1(-, ((>Рл О .: ) r= -I r -.-- P,:1;5) -О I< ГCH Ч I!О (Г ТIЛ л.. Г)-.:-.Ь!)Ой «Род(К?;C! ОЛЬЗУЕ?". й

)3Ы?> а((3?3 В а П)3Я КУ. . Ь Т / P ЖИР О 1 НЬ)Х КЛ (л— н)<((кх; 11<(i()3H;rf)(-;),)и(?-в ll(Hp кульурк,: Qv 13 ) с.: . ьзуе(мой питате.lьной сре (l(. CT»EIC .3КОР КО(>ТрОЛЯ С IO(IÈÄ . .: и Oilÿò.-(е.-::-;.-)е! of. и,.четом их х»вЂ” .: .)

;):1;-,; ер» ро;"(i, -.:::. (а к;" H и .«м) чт, с де)1ьг) ускорения с.-)о, б.), к )етк-,. с ять:е после первого

; С. «>((1, ПО .ЕИ(а?(т )л )(ОЛЯРОГРафИЧЕС— ую ячейку,. H:змеряют Отребле?!HP

: <лоро;)а, ";: ге.", Ell .о: ят суабаин до ,л ,: ..:Ел)НО? ((() ill (;(r ра)!?(?1 11 :() " ", ()ОВ.:. 1) ff() o))pl= „(T lir) «(л О);(стl: ((o "ребле—

1) 5! 1

5 й

Ф

8 о н ( к

Ц о к к к е о о о ж ((Т

Ю о н

СЪ

С 1 л (Ъ

В о

+!

СЧ

С о

1 х

v х х

m o

<О Ю

СЪ O х v о ъо о о о о.! н

СЧ

A с! (г о н о

С 4 о

+ (СЪ

+!

СЧ

-Ф л о н .Ф

СЧ о

+I о

ССЪ а ( х о к

+I

СЪ со

О о

+I !

О о е о о

И и о!

D н !

СЪ

A о.Ф о

+I

СЪ

СА!

Ч".! о

+I

ОЪ

Ф О

СЧ С 4 ю о

+ I +I

СО г \

A !

СЪ (Ъ

С н

ССЪ

A о

СО

Ф о

+I л

МЪ

СЧ о

+I

С!

Ф

4 Ъ

СЧ

Ф

Т л.Ф С 4 о о

+! +!

СО л

СЧ

Г о

+I

С Ъ с

+!

С Ъ

СЧ

+I л

С Ъ с с

+! +! (A

Л СЪ

С Ъ

A о н

С Ъ

С о

+I

А

С 4

Ф в о

+I

С

С Ъ СЪ

СЧ

С

Ф

СЧ

1 о

+ c

4 + о

СО

С

+I

%

CO о ъ

A A с о

+! +I л

СЪ ЧЪ

ССЪ ю о

+! +!

ССЪ 4Ъ

Ф

3 х х х о к о

CI

5555!

С! (о

+I O!

СЪ +4

СО! л (а о н

CO РЪ о о н н и СЧ

С 4 о

+!

Ю

С 4 С! о н (4

С!

44

С 4

Ф .Ф Ф С а

2 а

3 (СЪ

CO!

Ф;"

-Р о (к к

И а

Ю а> о й

CO N

С Ъ Ф и ь 3 j 5

И

v и ((( о о (х

Ф х а

C! v

m о

С о—! о

Ц а — Ic

О СЧ Ц

5 g

5 а о ххо х. о и о

I.i а

m o о х

5 а о

Й

Ф)

v х о о о о

g I о ! 1 о

Ц

1 — 1

Ф е

Р

v f к

5 (—

Х аC(I (m (((X хо о л ао х

m o

6 а о о х (CO CO ЧЪ ю o o

+! +! +I о -г

С 4 о о о

Е-!