Способ получения основы питательной среды для приготовления стафилококкового энтеротоксина типа а

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при производстве энтеротоксина типа А. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. Казеин подвергают ферментативному гидролизу с помощью поджелудочной железы. Нерасщепленный казеин осаждают при рН 4,5 - 5,0 и отделяют супернатант, содержащий целевой продукт. Далее гидролизат подвергают ультрафильтрации через мембранные фильтры с порогом пропускания 10 кД. Ультрафильтрат разводят дистиллированной водой до содержания аминного азота 200 - 250 мг% и используют в качестве основы питательной среды для получения СЭА.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для получения энтеротоксинов стафилококка. Цель изобретения повышение выхода энтеротоксина. П р и м е р 1 кг коммерческого казеина замачивают в 10 л дистиллированной воды и выдерживают в течение суток при 37^оС, доводя рН до 8,0 с помощью 1 н. NaOH каждые 2 ч. Затем в смесь добавляют 1 кг свежей, очищенной от жира и соединительной ткани гомогенизированной поджелудочной железы крупного рогатого скота, доводя рН до 7,4. Гидролиз проводят при 48^оС в течение 7-10 сут. Полученный гидролизат подкисляют 1 н. раствором HCl до рН 4,25 и оставляют на 24 ч при 4^оС. Выпавший осадок удаляют на сепараторе АСГ-3М (10000 об/мин). Осветленный гидролизат казеина доводят до рН 6,7 1н. раствором NaOH. Гидролизат имеет следующие химические показатели, Общий азот 1,6±0,31 Аминный азот 0,9±0,1 Пептоны 0,5±0,1 Белковый азот 0,2±0,1 С целью очистки от высокомолекулярных контаминаций полученный гидролизат казеина после предварительной фильтрации через 9 пластин фильтрокартона заправленных в фильтродержатель, подвергают ультрафильтрации на мембранных фильтрах с порогом пропускания 10 кД. Для этого используют или мембраны УПА-100 (Химволокно, СССР), выполненные в виде полых волокон, или ультрафильтрационную систему "Pellicon" (Millipore, США) с кассетным фильтром РТGC 00 05. Режим работы при использовании мембран УПА-100: скорость потока 1 л/мин на 1 см² поперечного сечения при давлении 0,7-1,0 кгс/см²; при использовании системы "Pellicon" скорость потока 0,2-0,4 л/мин при давлении 0,7-1,0 кгс/см². Из 10 л исходного гидролизата получают 9,0-9,5 л ультрафильтрата, который имеет следующие химические показатели. Общий азот 1,32±0,21 Аминный азот 0,9±0,1 Пептоны 0,4±0,1 Белковый азот 0,02±0,005 Ультрафильтрат разводят дистиллированной водой в соотношении 1:4 (до содержания аминного азота 200-250 мг%) и используют в качестве основы питательной среды для получения СЭА. Для этого проводят глубинное культивирование в ферментере, например, АК-10 штамма-продуцента на среде с добавочными ингредиентами при следующем соотношении, г/л основы:
K₂HPO₄˙3H₂O 0,8-1,2
KH₂PO₄ 0,8-1,2
MgSO₄˙7H₂O 0,18-0,2
CH₃COONa 6,5-7,5
Тиамин 0,00004-
0,00006
Никотиновая
кислота 0,001-0,002
Са пантотенат 0,0005-0,0006 рН 6,7-6,8 до автоклавирования. В результате культивирования и очистки получают гомогенный препарат СЭА. Использование предлагаемой основы питательной среды позволяет увеличить выход СЭА вдвое, а также повысить качество очищаемого препарата СЭА за счет увеличения степени его очистки.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОСНОВЫ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВОГО ЭНТЕРОТОКСИНА ТИПА А путем ферментативного гидролиза казеина с помощью поджелудочной железы с последующим отделением нерасщепленного казеина путем осаждения при pH 4,5 - 5,0 и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода энтеротоксина, полученный гидролизат дополнительно подвергают ультрафильтрации через мембранные фильтры с порогом пропускания 10 кД.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 36-2000

Извещение опубликовано: 27.12.2000        

---