Штамм бактерий bacillus sp.,используемый для очистки сточных вод от оксалата
Изобретение относится к микробиологической промьшшенности и касается нового штамма бактер ий, который может быть использован при биологической очистке сточных вод от оксалата. Цель изобретения - штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-154вД, способный к полному разложению оксалата при концентрации его в среде до 40 г/л и росту при температуре до . В условиях аэрации при температуре 28 штамм разлагает 42,6 г/л оксалата за 40-42 ч. 3 табл. СО со сх 00
СОЮЗ СОВЕТО (ИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (!9) (И) (51)4 С 12 N 1/20, С 02 Р 3/34//
//(С 12 N 1/20, С 12 R 1:07) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3975253/31-13 (22) 05. 11.85 (46) 23.08.87. Бюл. 31 (71) Институт микробиологии АН БССР (72) С.П.Коваленко, Г.М.Зайцев, О.В.Ласковнева и С.Л.Мурзин (53) 663.15 (088.8) (56) Journ. Cen. Appl. Microbiol., 1963, v.9, N - 2, р.223.
Journ, Gen. Microbial 1955, v. 12, р.419-428. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ ВАСТЕЬЦЯ SP. ИСпОл зуем !Й nns omcTKH cTowHm Bog
ОТ ОКСАЛАТА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма бактерий, который может быть использован при биологической очистке сточных вод от оксалата. Цель изобретения — штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-1548Д, способный к полному разложению оксалата при концентрации его в среде до 40 г/л и росту при температуре до 4! С. В о условиях аэрации при температуре 28 С штамм разлагает 42,6 г/л оксалата за 40-42 ч. 3 табл.
133
Изобретейие относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма бактерий, который может быть использован при биологической очистке сточных вод от оксалата.
Цель изобретения — штамм бактерий
Bacillus sp. способный к полному разложению оксалата при концентрации его в среде до 40 г/л и росту при о температуре до 41 С.
Штамм выделен из огородной почвы методом накопительной культуры на минеральной среде следующего состава, г/л:
Аммоний щавелевокислый 46,86
КН РО 3,0
Na МКБОФ 7нго 0 05 Триосульфаг.натрия 1,0 рН среды 7,0 По 2 г почвы вносят в колбы объемом 250 мл, содержащие 50 мл среды, о и выдерживают при 28 С в течение 20 дней. Из тех колб, где происходит выделение аммиака, отбирают по 5 мл накопительной культуры и вносят в колбы со свежей средой. Культивирование проводят при 28 С на качалке о (180 об/мин). Через 5 дней из колб, где наблюдают рост, потребление оксалата и выделение аммиака, делают повторный пересев в колбы со свежей средой. Культивирование проводят в тех же условиях. Чистую культуру бактерий Bacillus sp. штамм ЛСМ-ОКС-1 выделяют из отдельной, наиболее быстрорастущей колонии, полученной путем рассева накопительной культуры на чашки с агаризованной минеральной средой с оксалатом аммония, Штамм сохраняет жизнеспособность в течение трех лет при хранении под слоем минерального масла на агаризованной среде с оксалатом аммония и в ,лиофильно высушенном состоянии. Штамм Bacillus sp ЛСМ-ОКС-1 депонирован Всесоюзной коллекцией микроорганизмов ИБФМ АН СССР под номером ВКМ В-1548Д и имеет следующие куль-. турально-морфологические и физиологобиохимические характеристики. Клетки - одиночные, прямые, короткие палочки размером 1,63х0,92 — 1,21х х0,74 мкм, подвижные: движутся при Ф помощи перитрихально расположенных жгутиков. Грамположительные. Образуют эндоспоры. 1889 2 На минеральной агаризованной среде с оксалатом колонии выпуклые гладкие, блестящие, с ровными краями, в центре светло-коричневого цвета, по краям— прозрачные, 3-5 мм в диаметре. Пигмент в среду не выделяют. На жидкой минеральной среде с оксалатом штамм растет, образуя муть, осадок, который при взбалтывании легко взмучивается. Пигмент в среду не выделяется. Аэроб, Дает положительную оксидазную реакцию, имеет каталазу. Рост на минеральной среде, содержащей оксалат, ингибируется хлористым трифенилтетразолием в концентрации 0,027. и хлористым натрием в концентрации 5,07. Растет при 40 С, не растет при 20 9 и 41 С. Оптимальная температура для роста 28-35 С Пределы рН для роста 6,8-9,0. Ацетоин и индол не образует, Лакмусовое молоко не изменяет. Желатину 25 не разжижает. Крахмал не гидролизует. Отношение к источникам углерода: штамм является облигатным оксалотрофом, т.е. использует в качестве источника углерода только оксалат. Этот вывод сделан на основании данных, полученных при изучении способности штамма использовать различные органические соединения в качестве единственного источника углерода. Проверено 65 соединений из группы сахаров, 35 спиртов, аминокислот, органических кислот ° Ни одно из проверенных соединений, кроме оксалата, не обеспечивает рост штамма. Штамм способен расти в среде, содержащей высокие концентрации оксалата, вплоть до насыщения,, при этом разложение оксалата происходит в присутствии многих органических соединений, Отношение к источникам азота: усваивает аммонийный азот, Не усваивает нитритный, нитратный азот и мочевину. Не нуждается в факторах роста. Не 50 патогенен. Признаки штамма устойчивы. II р и м е р 1. Разложение оксалата в условиях аэрации в колбах, Культуру штамма Bacillus sp ВКМ В-1548Д, выращенную при 28 С в течение 3 сут на агаризованной среде сле55 дующего состава, г/л: (NHq)g С О (оксалат аммония) 10; NaHCO > 9,8; NaH P0 2Н О 12,1; NaC1 0,7; КС1 0,57< М@С1 6Н О 0,1; СаС1т -6Н О 0,01; тиоКонцентрация оксалат-иона в среде, г/л 21 3 284 355 426 4,8 7,1 14,2 Время полного разложения 26-28 27-30 30-32 33-35. 36-38 40-42 43-45 оксалата ч Та блица Концентрация оксалат-иона в среде, г/л 7 1 14 2 21 3 2S 4 35 5 42 6 4,8 Время полного разложения оксалата, ч 17-19 18-20 20-22 23-25 28-30 34-36 40-42 3 13318 сульфат 1,6, петлей высевают в колбу емкостью 250 мл, содержащую 50 мл посевной среды того же состава. Колбу помещают на круговую качалку .5 (180 об/мин). Посевной материал выра- о .щивают в течение 30 ч при 28 С, Приготовленным посевным материалом в количестве 10 мл засевают колбы емкостью 500 мл, содержащие 90 мл среды того же состава. Выращивание культуры проводят на качалке (180 об/мин) при 28 С ° Время полного разложения оксалата в зависимости от его концентрации в среде приведено в табл.1. Пример 2. Разложение оксалата в условиях аэрации в ферментере. Посевншм материалом в количестве 100 мл, приготовленным, как описано в примере 1,, засевают ферментер емко- 20 стью 3,0 л, содержащий 900 мл среды. Режим культивирования: перемешивание — 250 об/мин; аэрация — 1 л/л среды, мин; температура 28 С. Время полного разложения оксалата в зави- 25 симости от концентрации его в среде приведено в табл.2. П р и и е р 3. Разложение оксалата в условиях аэрации в ферментере при разных температурах. ЗО Выращивание культуры проводят при различной температуре в среде, содер жащей 7,1 г/л оксалат-иона. Остальные операции проводят так же, как в примере 2. Время полного разложения ок35 салата в зависимости от температуры выращивания приведено в табл.3. 89 Пример 4. Разложение -оксалата, содержащегося в промьппленных сточных водах. Штамм выращивают на сточных водах гидролизного завода, содержащих следующие компоненты, г/л: Редуцирующие вещества 1,2 Монокарбоновые кислоты (в пересчете на уксусную кислоту) 2;0 Щавелевая кислота 7,0 Летучие кислоты 0,3 Азот 0,12 Фосфор 0,07 Сточную воду засевают посевным материалом в количестве 10Х, полученным при выращивании штамма бактерий на качалке (180 об/мин) в течение 30 ч при 28 С в колбах объемом 250мл с 50 мл среды, следующего состава, г/л: NaHCOg 9,S NaHgP04 2Н 0 !2,1; ИаС1 0,7.; КС1 0,57; NgClg 6Й О 0,1; СаС1 6Н 0 0,01; тиосульфат 1,6, оксалат аммония 10. Культивирование осуществляют в колбах объемом 500 мл; содержащих 100 мл сточной воды, на качалке (180 об/мин) при 28 С. В этих условиях штамм Bacillus sp ВКИ В-1548Д полностью разлагает 7,0 г/л оксалата за 25 ч. Формула изобретения Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-1248Д, используемый для очистки сточных вод от оксалата. Т а б л и ц а 1 1331889 Таблица 3 Температура выращивания, С 23 28 40 Редактор Н.Егорова Заказ 3770/23 Тираж 499 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 Время полного разложения, оксалата, ч 29-31 !8-20 19-21 20-22 25-27 Нет роста Составитель Л.Минеева Техред В.Кадар Корректор В. Гирняк
