Способ диагностики клещевого энцефалита

 

Изобретение относится к меди цине, точнее к иммунологической диагностике клещевого энцефалита. Цель изобретения - ускорение и повышение точности способа диагностики клещевого энцефалита. Для этого из пробы крови обследуемого вьщеляют лимфоидные клетки и доводят их концентрацию до 2,10 КЛ/Ш1. Готовят тест-эритроцит арную систему. Ставят реакцию розеткообразования, выявляя сенсибилизацию лимфоцитов к антигену вируса клещевого энцефалита. Лимфоциты инкубируют с эритроцитарным иммуноглобулиновым диагностикумом, обработанным антигеном вируса клещевого энцефалита 3-5 мин при 8-25 с и 20 мин при 4-5°С, При наличии розеткообраэующих клеток более 4% диагностируют клещевой энцефалит.При использовании реакции антигенспецифического розеткообразования подтверждение диагноза ускоряется на 10-14 дней. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (50 4 G 01 N 33 49

ОПИСАНИЕ И3ОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3852363/28-14 (22) 06.02. 85 (46) 15.05. 88. Бюл. В 18 (71) Пермский государственный медицинский институт (72) В.М. Минаева, Л.П. Быкова и Т,Г. Пархоменко (53) 615.373 (088.8) (56) Метод торможения миграции лнмфоидных клеток в агаровой среде как диагностический тест при клещевом энцефалите и других флавивирусных инфекциях. Методические рекомендации.

Омск, 1978. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ КЛЕЩЕВОГО

ЭНЦЕФАЛИТА (57) Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологической диагностике клешевого энцефалита. Цель

„„Я0„„1396058 А 1 изобретения — ускорение и повышение точности способа диагностики клещевого энцефалита. Для этого из пробы крови обследуемого выделяют лимфоидные клетки и доводят их концентрацию до 2.10 кл/мл. Готовят тест-эритроцитарную систему. Ставят реакцию розеткообразования, выявляя сенсибилизацию лимфоцитов к антигену вируса клещевого энцефалита. Лимфоциты инкубируют с эритроцитарным иммуноглобулиновым диагностикумом, обработанным антигеном вируса клещевого энцефалита 3-5 мин при 18-25 С и 20 мин при

4-5 С. При наличии розеткообразующих клеток более 4Ж диагностируют клещевой энцефалит.При использовании реакции антигенспецифического розеткообразования подтверждение диагноза ускоряется на 10-14 дней.

1396058

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологической диагностике клещевого энцефалита.

Целью изобретения является ускорение и повышение точности способа диагностики клещевого энцефалита.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь больного забирают из вены в 10 к6личестве 3 мл в раствор гепарина фз расчета 25 ЕД на 1 мл крови. Выфеление лимфоидных клеток производят отстаиванием в течение 45 мин. Клетки 2 раза отмывают средой 199, цент- 15 фифугируя по 5 мин при 500 q, и доносят их концентрацию средой до

2 ° 10 кл/мл. Для приготовления тестЭритроцитарной системы используют стандартный иммуноглобулиновый эрит оцитарный диагностикум к вирусу клеЩевого энцефалита, разработанный

Т.Г. Пархоменко и полученный по ори инальной метопике из свежих бара ньих .эритроцитов. Бараньи эритроциты формалинизируют 3".-ным нейтральным формалином при 37оC и в 0,5 ной концентрации смешивают с проти воэнцефалитным лошадиным гамма-глобулином производства Томского НИИВС и 30 бидиазотированным бензидином (коммерческий препарат).Конъюгацию .про водят 45 мин на ледяной бане. Сенсибилизированные эритроциты отмывают забуференным физиологическим раствором с РН 7,4 и подвергают лиофильному высушиванию в ампулах, Препарат может храниться длительное время.

Перед постановкой реакции сухой эритроцитарной диагностикум растворяют 40 в физиологическом забуференном раст.воре с РН 7,4 и обрабатывают в течео ние 1 ч при +4 С коммерческим антигеном вируса клещевого энцефалита. Отмывают 2 раза ЗФР с РН 7,4 путем центрифугирования по 5 мин при 800 q, Из осадка готовят 0,5%-ную взвесь эритроцитов на этом же растворе.

Постановка реакции. 0,5 мл 0„5 взвеси эритроцитов, приготовленных подобным образом, соединяют с равным объемом взвеси лимфоцитов, выделенных от больного. Смесь инкубируют

3-5 мин при 18-25 С, центрифугируют

5 мин при 200 q и выдерживают 20 мин при +4-5 С. Из осадка готовят мазок, о фиксируют и окрашивают ио методу

Романовского-Гимза. В мазке подсчитывают количество лимфоцитов, образующих ".розетки" с эритроцитами, несущими антиген. 3а положительный результат принимают величину выше 4 розеткообразукщих клеток.

Пример 1. Больной Л. С.И., 40 лет. Заболел 1. 7. 84 r., госпитализирован в rop. инфекционную больницу 2.7.84 г с подозрением на заболевание клещевым энцефалитом. 2.7.84 r из вены больного забрали 3 мл крови в раствор гепарина. После отстаивания в течение 45 мин при 37 С и отмывания выделено 2 10 клеток в 1 мл.

0,5 мл взвеси клеток соединяли с

0,5 мл 0,5 -ной взвеси эритроцитарного диагностикума, инкубировали

3 мин при 18 С, центрифугировали и выдержали . 20 мин при +4 С, затем о из смеси приготовлен мазок и при подсчете обнаружено 8 розеткообразующих клеток — показатель, свидетельствующий о наличии специфической сенсибилизации лимфоидных клеток организма. В официально рекомендованной серологической реакции (РТГА) положительный результат, титр антител 1:80 получен 26.7.84 г — на 26 день болезни в третьей пробе крови.

Клинический диагноз заболевания— клещевой энцефалит, менингеальная форма, тяжелое течение.

Пример 2. Больной Е.В., 23 года. Заболел 20.7.84 г, госпитализирован 22.7.84 r. при подозрении на заболевание клещевым энцефалитом.

Кровь для исследования взята 22.7.84 r в объеме 3 мл. После отстаивания и отмывания выделено 2 10 клеток в ! мл. 0 5 мл взвеси клеток соединяли с 0,5 мл 0,5 .-ной взвеси эритроцитар- ° ного диагностикума, инкубировали о5 мин при 25 С, центрифугировали и выдерживали 25 мин при +5 C. После этого из смеси готовили мазок и определили 9 . розеткообразующих клеток к вирусу клещевого энцефалита. Результат РТГЛ вЂ” отрицательный. Клинический диагноз — очаговая форма клещевого энцефалита, средней тяжести— удалось подтвердить при помощи определения розеткообразования при поступлении больного.

H p и м е р 3. Больная Л. A.Ã., 49 лет. Заболела 17.7.84 r. Госпитализирована 21.7.84 г. Кровь в объеме 3 мл взята для исследования

21.7.84 r. После отстаивания и o m>вания 0„5 мл взвеси клеток соединя58.

Положительный эффект способа подтверждается следующими данными: при помощи официально принятых серологических тестов, в частности РТГА и метода антигенспецифического розеткообразования, обследовано 159 больных клещевым энцефалитом. Диагноз поставлен по клинико-эпидемиологическим данным. Диагностически значимое нарастание титра антител в РТГА выявлено только в 29,93Х случаев. Положительные результаты при определении специфического розеткообразования зарегистрированы у 64,96 . больных, что позволило выявить специфическую сенсибилизацию к вирусу клещевого энцефалита дополнительно у 35,03 больных. Кроме того, при использовании реакции антигенспецифического розеткообразования лабораторное подтверждение диагноза клещевого энцефалита ускоряется на 10-14 дней по сравнению с использованием традиционных серологических тестов (РТГА) и на

2 сут. по сравнению с реакцией торможения миграции лимфаидных клеток по технике исполнения.

Формула из о бр етения

Способ диагностики клещевого энцефалита путем выявления сенсибилизации лимфоцитов к антигену вируса клещевого энцефалита, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, сенсибилизацию лимфоцитов выявляют в реакции розеткообразования, при этом лимфоциты инкубируют с эритроцитарным иммуноглобулиновым диагностикумом, обработанным антигеном вируса клещевого энцефалита в течение

3-5 мин при +18-25 С и не менее

20 мин при +4-5 С, и при наличии розеткообразующих клеток более 4Х диагносцируют клещевой энцефалит.

I 3960 ли с 0,5 мл 0,5 -ной взвеси эритроцитарного диагностикума, инкубировали

5 мин при 25 С, центрифугировали и выдерживали 15 мин при +5 С. Из смеси клеток готовили мазок, окраши5 вали и микроскопировали. Определено

З розеткообразующих клеток к вирусу клещевого энцефалита, отрицательный результат. Диагностически достовер- 10 ное нарастание титра антител 1:320 обнаружено во второй пробе крови в

РТГА 27.7.84 г. Клинический диагноз заболевания — клещевой энцефалит мей нингеальная форма, средней тяжести. 15

Таким образом, уменьшение времени холодовой инкубации снижало эффективность розеткообразования. При увеличении времени холодовой инкуба-. ции количество розеткообразующих 20 клеток увеличилось до 7 — положительный результат. Сделан вывод о необходимости инкубации при +4-5 С не менее 20 мин..

Пример 4. Больная Л., 19 25 лет. Заболела 16. 7.84 г ° Госпитализировали 19.7.84 r. Кровь в объеме

3 мл взята для исследования 19.7.84 г.

Выделение клеток производили путем отстаивания в течение 45 мин и после- 30 дующего отмывания. Затем 0,5 мл взвеси клеток лимфоидного ряда в концентрации 2 .10 в 1 мл соединяли с

0,5 мл 0,5 -ной взвеси, инкубировали о

3 мин при 18 С, центрифугировали, выдерживали 20 мин при +5 С. Из смеси клеток готовили мазок, окрашивали по методу Романовского-Гимза. В результате подсчета под микроскопом определено 4Х розеткообразующих кле- 4р ток к вирусу клещевого энцефалита.

Результаты РТГА отрицательные. Первичный диагноз клещевого энцефалита снят. Окончательный диагноз — реснира" торно-синцитиальная инфекция. 45