Способ выделения бактериофагов

 

Изобретение относится к медицинской промышленности и может быть использовано при производстве лечебно-профилактических бактериофагов. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и степени его очистки. Фаголизат бактериофага фильтруют через фильтр-картон (префильтр) для удаления бактериальных клеток. Затем фаголизат пропускают через каскад целлюлозных мембран с размером пор 0,5 - 0,7 мкм и 0,2 мкм. Профильтрованный фаголизат концентрируют и очищают последовательной ультрафильтрацией и диафильтрацией на полых ультрафильтрационных волокнах с порогом задержания веществ с мол.м. 100 тыс. дальтон в режиме ламинарного потока в полости волокон. Диафильтрат разводят диафильтрующим фосфатно-солевым раствором и консервируют хлороформом. Выход 100%, степень очистки 98,5 - 99,85%.

Изобретение относится к медицинской промышленности и может быть использовано при производстве лечебно-профилактических бактериофагов. Цель изобретения повышение выхода целевого продукта и степени его очиcтки. П р и м е р 1. Фаголизат бактериофага клебсиелл пневмонии К-555, содержащий 7 ˙10⁹ лизированных бактериальных клеток в 1 мл, 2,4 ˙10¹⁰ фаг. част. /мл, фильтруют через фильтр-картон (префильтр). Через 1 м² площади префильтра пропускают 10 л фаголизата. При этом удаляют 97,99% бактериальных клеток. Затем фаголизат последовательно стерильно фильтруют через каскад целлюлозных мембран с размером пор соответственно 0,7 и 0,2 мкм. Через 1 м² площади каждого фильтра можно пропустить в среднем 63 л фаголизата. Профильтрованный фаголизат не содержит бактериальных клеток, концентрация фага составляет 1,9˙10¹⁰ фаг. част. /мл, выход 80% Концентрация белка в профильтрованном фаголизате 10000 мкг/мл, в расчете на единицу активности (фаговую частицу) 5347,6 ˙10^-10 мкг/фаг. част. Объем фаголизата 10 л. Профильтрованный фаголизат концентрируют в 100 раз по объему путем ультрафильтрации через полые ультрафильт- рационные волокна с порогом задержания веществ с мол. м. 100 тыс. дальтон в режиме ламинарного потока в полости волокон со скоростью 130-150 л/ч при давлении 0,4 ати. Затем в тех же условиях проводят диафильтрацию в постоянном объеме 10-кратным объемом стериального диафильтрующего раствора, содержащего 0,14 М NaCl, 0,001 MgCl₂, 0,003 M KH₂PO₄, 0,007 M Na₂HPO₄, рН 7,0-7,2. Диафильтрат разводят до исходного объема (10 л) диафильтрующим раствором и консервируют добавлением 5% хлороформа. Полученный диафильтрат содержит 1,9˙10¹⁰ фаг. част./мл, выход фага 100% абсолютное содержание белка в диафильтрате 150 мкг/мл, концентрация белка на фаговую частицу 78,9˙10^-10 мкг/фаг. част. степень очистки 98,5% П р и м е р 2. Фаголизат дизентерийного бактериофага Зонне S₁, фильтруют через фильтр-картон. Затем фаголизат последовательно фильтруют через целлюлозные мембраны с размером пор 0,5 и 0,2 мкм. Профильтрованный фаголизат не содержит бактериальных клеток, концентрация фага 6˙10¹⁰ фаг. част./мл, концентрация белка 2000 мкг/мл, в расчете на фаговую частицу 333,3˙10^-10 мкг/фаг. част. Выход фага 71% Затем проводят ультрафильтрацию в соответствии с примером 1. Диафильтрат содержит 6˙10¹⁰ фаг. част. /мл (выход 100%), 10 мкг/мл белка (1,66˙10^-10 мкг/фаг. част. ), степень очистки 99,51% По известному способу титр фага 5,9˙10⁴ фаг. част./мл, выход 0,0007% Использование способа позволяет повысить выход фага, степень его очистки, а также упростить технологию.

Формула изобретения

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ путем фильтрации фаголизатов через фильтры с последующей очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и степени его очистки, фильтрацию проводят последовательно через фильтр-картон и каскад целлюлозных мембран с размером пор 0,5 0,7 и 0,2 мкм, а очистку проводят ультрафильтрацией и диафильтрацией на полых ультрафильтрационных волокнах с порогом задержания веществ с мол.м. 100000 дальтон.