Штамм бактерий rнizовiuм меlilотi для оценки конкурентоспособности штаммов клубеньковых бактерий люцерны

 

Изобретение относится к области микробиологических средств повьппения урожайности бобовых растений и предназначено для оценки конкурентоспособности различных штаммов клубеньковых бактерий люцерны. Оценка конкурентоспособности штаммов клубеньковых бактерий люцерны проводят при использовании штамма Rhifcobium meliloti 4076 (ВНИИСХМ), лишенного способности ассимилировать молекулярный азот по методу Амарте. Штамм получен из штамма Rhizobium meliloti СХМ-1 под действием УФ-излучения. 2 табл. i СЛ

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕС11УБЛИН

А1

„„SU„„1409 1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕЧ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4)60605/30-13 (22) 12.12.86 (46) 15.07.88. Бюл. 1 26 (71) Всесоюзный научно-исследователь" ский институт сельскохозяйственной микробиологии (72) С.Н.Федоров, Б.В.Симаров, Л.А.Яарыпова, А.Т.Новикова, В.Л.Князева и Н.Г.Орыценко (53) $76.8 (088.8) (56) Amarger N. Competition for nodule formation fetween effective and иiеЮЕective strains of Rhizobium meИХой1. - SoiI Biol. Biochem. 1981

13 У 6, р. 475-480. (S1)4 С 05 F 11/08, С 12 N 1/20//

//(С 12 N 1/20, С 12 К 1:41) (54) IllTAMM БАКТЕРИЙ RHIZOBIUM MKLILOTI ДЛЯ ОЦЕНКИ КОНКУРЕНТОСПОСОБНОСТИ

ШТАИИОВ КЛУБЕНЬКОВ11Х БАКТЕРИЙ ДОЦЕРНЫ (57) Изобретение относится к области микробиологических средств повышения урожайности бобовых растений и предназначено для оценки конкурентоспособности различных штаммов клубеньковых бактерий люцерны. Оценка конкурентоспособности штаммов кдубеньковых бактерий люцерны проводят при использовании штамма Rhitobium meliloti

407б (ВНИИСХМ), лишенного способности ассимилировать молекулярный азот . по методу Амарте. Штамм получен из штамма Rhizobium meliloti CXM-1 под Pg действием УФ-излучения. 2 табл.

1409617

Изобретение относится к микробиологическим средствам повышения урожайности бобовых растений и предназначено для оценки конкурентоспособности штаммов клубеньковых бактерий люце рны.

Цель изобретения — получение нового конкурентоспособного штамма клу беньковых бактерий люцерны, лишенного способности ассимилировать молекулярный азот.

Штамм бактерий Rhiaobium meliloti

407б получен из штамма Rhizobium meliloti СХМ1 под действием УФ-излучения. Он несет генетическую метку устойчивости к стрептомицину и образует на корнях люцерны большое количество мелких округлых клубеньков белого цвета ° 20

1!1тамм депонирован во Всесоюзной коллекции клубенькавых бактерий во

ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии под номером 407б.

Штамм Rhizobium meliloti 407б хо- 25 рошо растет на питательных средах следующего состава, г/л:

1. Бобовый агар: горох 100; сахароза 20; агар 20; рН 6,8-7,2.

2. Модифицированная среда Парийс- 30 кой: пептон 2,0; дрожжевой экстракт 1, О; маннит 8, О; агар 20„, О; рН 6, 87,2.

3. Маннитно-дрожжевой агар: К НР0

5, О; MgS04 7Н О О, 2; NaCl О, 1; СаСО следы, дрожжевой экстракт 1,0; маннит 10,0; агар 20,0; рН 6,8-7,2.

Мофолого-культуральные признаки штамма Rhizobium melilotт 407б (ВНИИСХМ) .

Величина клеток суточной культуры на бобовом. агаре 0,5-1,0х1,8 мкм.

Клетки имеют вид палочек. Церитрихи.

В молодом возрасте. подвижны, при старении утрачивают подвижность. Старые клетки располагаются в полисахаридных капсулах. Грамотрицательные, Быстрорастущие. Штрих на бобовом агаре полупрозрачный, слизистый, блестящий. Колонии на агаризованных средах однотипные, круглые, выпуклые, с четкими краями, до 3 мм в диаметре.

При посеве на мясопептонный агар штрихом образует скудный штрих кремовато-белого цвета.

Физиологические признаки штамма

R.melilnti 407б (ВНИИСХМ).

Молоко с лакмусом не пептонизируют, подщелачивают с образованием слизистой прозрачной зоны на поверхности, затем подкисляют.

Желатину не разжижают.

Клетчатку не усваивают. Аэробы.

Оптимум температуры для роста 28ОС.

Оптимальное значение рН среды 6,87,2. Прототрофы.

Пролин и нуклеиновые основания оказывают стимулирующее действие на рост бактерий.

Отношение к углеводам: растет на средах с углеводами, подкисляя среду. Активно усваивают арабинозу, га-. лактозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, маннит, сахарозу, фруктозу. Слабо усваивают дульцит, инозит, ксилозу, рамнозу, раффиноэу, сорбит. Не усваивают декстрин, крахмал.

Отношение к источникам азота: используют соли аммония и азотной кислоты, карбамид и аминокислоты. Признаки штамма устойчивы.

Штамм несет генетическую метку устойчивости к стрептомицину (1 г/л среды). Имеет серотип штамма 425 а.

Штамм не па то ге нен.

Пример. Изучение конкурентоспособности производствечного штамма 425а и других эффективных штаммов клубеньковых бактерий люцерны.

Оценка конкурентоспособности штаммов заключается в совместной инокуляции проростков люцерны штаммом R.meliloti 407б и одним из эффективных штаммов и дальнейшем установлении преобладания того или иного штамма по методу Амарже.

Титр бактерий штамма 407б в инокуляте, необходимый для оценки конкурентоспособности активных штаммов по массе люцерны, определяли в экспериментах с различной концентрацией штамма 407б в инокуляте. Для этого в экспериментах использовали контрас-, тно различающиеся по конкурен,оспособности активные штаммы К„ше1 1ос1

СХМ1-219 и СХМ1-220, маркированные устойчивостью к стрептомицину и канамицину.

Конкурентоспособность штаммов определяли по массе растений согласно формуле (А+Н) — Н

К

Л вЂ” Н где (Л+Н) — мас.са люцерны при совместной инокуляции активным и неактивным штаммамц

14096

20 аблица

Штамм

Сухая мас са растений, г

Конкурентоспособность активно ro штамма, (по массе растений) 7,8

4076

2,9

10,8

100

8,4

69,6

5,8

36,7

3,9

12,7

9,8!

9,8

100,0

СХМ1-220+4076(1:1)

Ф

CXN1-220+4076 (1: 1О) 87,0

8,5

8l,2

А — масса люцерны при инокуляции активным штаммом;

Н вЂ” масса люцерны при инокуляции неактивным штаммом.

Результаты совместной инокуляции люцерны парами штаммов (4076 и СХМ1219, 4076 и CXMl-220 ) при различной концентрации штамма 4076 приведены в табл. 1, 10

Из данных табл. 1 установлено, что по конкурентоспособности штаммы

СХМ1-219 и СХМ1-220 резко различаются между собой, что подтверждается как по определению массы люцерны, так и по продуценту клубеньков, сформированных ими, что наблюдается при .соотношении активного штамма к неактивному 1:10.

В табл. 2 приведены результаты, полученные при совместной инокуляции люцерны парами штаммов (4076 и 425а, Контроль б/и (спонтанное заражение) СХМ1-219

СХМ1-219+4076(!О:1)

СХМ1-219+4076(l:1)

СХМ1-219+4076(I 10)

CXN1-220

СХМ1-220+4076(10;1) 1-7

4076 и СХМ1 — l 05, 4o76 ts I — 7,) при соотношении активного г|та. 1t ë к неактивному 1: 10, как в условиях стерильного микровегетационного, так и вегетационного опытов. Конкурентоспособность определяли путем оценки массы люцерны и вычислений по указанной формуле.

Иэ табл. 2 следует, что, используя штамм R.meliloti 4076, можно па методу Амарже (по массе растений) оценивать конкурентоспособность различных штаммов н клубеньковых бактерий люцерны.

Формула иэобретения

Штамм бактерий Rhizobium meli1oti ВНИИСХМ 4076 для оценки конкурентоспособности штаммов клубеньковых бактерий люцерны.

Процент клубеньков, обраэованных активным штаммом (по антибиотикоустойчивости) )409617

Таблица 2

Вегетационный опыт»"

Микровегетационный опыт"

Штамм

Конкурентоспособность активного штамма, Х

Конкурента способност активного штамма, 7

Сухая мас са растений, мг

Контроль б/и (спонтанное заражение) 9,6

8,9

407б

9,8

3,2

15,3

15,3

425а

1! 17

13,9

75

18,3

16,3

l5 6

14,5

78

8,3

15,4

3,9

11,0

Повторность б-кратная.

«» Повторность 8-кратная.

Составитель А.Кураков

Редактор Т.Лазоренко Техред А.Кравчук Корректор М.Демчик

Заказ 3450/24 Тирам 425. Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4

425а + 407б

СХМ1-105

CHEMI-105 + 407б

СХМ1-175

СХМ1-175 + 407б

Сухая масса растений, r