Штамм бактерий viвriо сноlеrае еlтоr серовара ogawa км 1446/рс0107-2, используемый для получения холерного экзотоксина

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении холерного экзотоксина. Цепь изобретения - повьппение вьпсода целевого продукта. Штамм получен путем коньюгативного введения в клетки токсигенного штамма Vibrio cholerae el- tor RV79 гибридной плазмиды . Штамм хранится в коллекции ВНЖ1ЧИ Микроб под номером КМ 1446 рС0107-2. При культивировании в аэробных условиях выход экзотоксина 5 мг/л культурального фильтрата.

СОЮЗ СО8ЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (<.« .

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ CCCP

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИИ И OTHPbITI+I (46) . 15. 09. 90. Бюл. Р 34 (21 } 4144009/28-! 3 (22} 10,11,86 (71) Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб 1 и Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи

{72) Н.И.Смирнова, Л.Ф.Ливанова, А.Л,Гинцбург, Н.В.Янишевский, Ю.В.Вертиев и Т.С.Ильина (53) 576.097(088,8) (56) Takeda I.T. Honda Т., Taga S.

"in vitro .formation of hybrid toxins

between subunits oi E. co1i heatlabiee entегоtoxin and those of eho1ега entегоtoxin" Infect. and Immun.

l98l, v. 34„ р. 341.

„.SUÄÄ 34)2306 А1 (51)5 С 12 И 15/00//(С 12 N 15/00, С 12 R 1:63) (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ VXBRZO СНОЬЕНАЕ . ELTOR CEP0BAPA ОСАМ КИ 1446/pC0107-2

ЙЖОЛЪЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ХОЛЕРНОГО

ЭКЗОТОКСИНА (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении холерного экэотоксина. Цепь изобретения — повьппенне выхода целевого продукта. Штамм получен путем конъюгатнвного введения в клетки токсигенного штамма Uibrio cholerae eltor ВЧ79 гибридной плазмиды pCO 107.

Штамм хранится в коллекции ВНИПЧИ

"Микроб" под номером КМ 1446 рС0107-2 °

При культивировании в аэробных условиях выход экзотоксина 5 мг/л культурального Фильтрата.

1 l4I2306 2

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано прн получении холерного экзотоксина.

Цель изобретения - повышение выхо5 да цех евого продукта.

Штамм КМ 1446 получен путем коньюгативного введения в клетки известного токсигенного штамма Ч.cholerае е11ог RV79 гибридной плазмиды рС0107,10 детерминирующий синтез холерного экзотоксина.

Штамм хранится в коллекции микроорганизмов ВНИПЧИ Микроб" под номером KM 1446 1 С0107-2 и характеризу» 15 ется следующими признаками. . Культурально-морфологические признаки.

Подвижные слегка изогнутые палочки, спор и капсул не образуют, грам- 20 отрицательные.

На плотных полюценных средах формирует гладкие, круглые серовато-го,лубоватые полупрозрачные колонии размером 1,0-1,5 мм.. 25

В жидких питательных средах вызы.— вает равномерное помутнение.

Для роста на минимальной среде требует добавления аденина.

На полноценных плотных средах растет в присутствии 5 мкг/мп тетрациклина и 50 мкг/мл канамицина на щелочном агаре с добавлением 50 мкг/мл полимиксина.

Физиолого-биохимические свойства.

Физиологические свойства типичны для холерного вибриона.

Отношение к углеводам . ферментнрует до кислоты без газа маннозу, сахарозу, маннит, мальтозу, не ферменти- 0 рует лактозу и арабиноэу, Эритроциты барана не лизирует, агглютинирует куриные эритроциты.

Чувствителен к холерному диагно» стическому фагу эльтор, 3 и 5 фагам . 45

ХДФ.

Холерными сыворотками 0 и Ogava агглютинируется до титра, Патогенные свойства.

Вирулентен для кроликов-сосунков в дозе 10 мкл/мл.

Использование штамма иллюстрируется следуюшим примером.

Пример, Высушенную культуру

Ч. cholerae нз ампулы высевают на агар Хоттингера рН 7,6, содержащего

5 мкг/мл тетрациклина или 50 мкг/мп канамицина, и посевы ннкубируют 18 ч при t 37 С.

Для проверки способности штамма продуцировать экзотоксин колонии штамма KM 144б переносят методом реп лик на чашки с !7-ялм синказным агаром, содержапп м 17 отмытых в синказном бульоне эритроцитов барана. Контроль " штамм RV79. Посевы выращивают

18 ч при 4 ЗООС, заливают слоей 0,5Х синказного агара, содержащего азид натрия, комплемент морской свинки и монорецепторную антитоксическую сы-. воротку и помещают в термостат при

37 С. Через 1-2 ч наблюдают зону .лизиса эритроцитов вокруг макроколоний, продуцирующих экэотоксин.

Для получения экзотоксина и титрацин его в кожной пробе по Крейгу агаровые культуры Ч. cholerse eltor КМ

1446, ВЧ79 и высокотоксигенный штамм

569 (положительный контроль) засевают в пробирки со средой, содержащей

30 г/л казаминовых кислот, 5 г/л дрожжевого экстракта, рН 7,6 и выращивают при интенсивной аэрации 16-IS ч при 30 C. Затем культуру центрифугируют при 4000 g 15 мин, к супернатанту добавляют мертиолят натрия в конечной концентрации 1:5000. Полученный экэотоксин раститровывают двукратно и вводят внутрикожно двум кроликам в количестве 0,1 мл, Учет проводят через 24 ч. У штамма КМ 1446 положительная реакция зарегистрирована в разведении 1:800-1:1300, у штамма RU79 — в цельном супернатанте, у штамма 569-1:800-1:1300. Количество экзотоксина определяют иммунофермент ным методом Gm, ELlSA. Штамм RV79 продуцирует 0,0016 мг токсина/л культ. фильтрата, штамма КМ 14465 мт токсина/л культ, фильтрата.

Пробы экзотоксина испытывают на наличие холерогенного эффекта на крольчатах — сосунках .Экзотоксин,получерный с использованием штампа КМ 1446, дает положительный холерог енный эффек т.

Таким образом, штамм Ч. cholerae

eltor серовара Ogawa IR 1446 рС0107-2 может быть использован для получения холерной вакцины "холероген-анатоксин", а также для получения ионоспецифической сыворотки.

Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio cholerae

eltor серовара Ogawa КМ 1446/рС0107-2 (Музей живых культур ВНИПЧИ "Микроб" ), используемый для получения холерного экзотоксина.