Способ определения пролиферативной активности лимфоцитов при ревматоидном артрите

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„SUÄÄ 1422156 А1

uD 4.0 01 И 33/536 (Ы ?(1 списочник изоьеятьния

Н А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР по делАм изоБРетений и ОтнРытий (21). 3935906/28-14 (22) 24.07.85 (46) 07.09.88. Бюл. У 33 (71) Институт клинической иммунологии СО АМН СССР (72) В.С. Ширинский, Н.М. Старостина и М.А. Тихонова (53) 615.373(088.8) (56) Agents апй Actions, 1981, 11, В 6-7, р. 606-508. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ (57) Изобретение относится к медицине, предназначено для определения пролиферативной активности лимфоцитов у больных равматондным артритом (PA).

Цель изобретения — влияние иммунных комплексов (ИК) на пролиферативную активность лимфоцитов ° Для этого выделяют мононуклеары здоровых людей и больных PA. Добавляют к ним синовиальную жидкость больных с содержанием ИК и без них. Суспензию моноцитов периферической крови, обработанную и не обработанную ИК, вносят в культуру аутологичных мононуклеарных клеток, инкубируют клетки в присутствии активаторов пролиферацни Т- и

В-лимфоцитов и добавляют их в культуру нелимфоидных клеток, Учет пролиферативной активности лимфоцитов проводят радиоизотопным методом.

Пролиферативную активность лимфоцитов определяют по индексу суппрессии нелимфоидных клеток.

1422156

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для опредЕления пролиферативной активности лимфоцитов у больных PA

Цельк» изобретения является повышение информативности способа за счет определения влияния иммунных комплексов (ИК) на пролиферативную активность лимфоцитов, !О

Пример 1, Синовиальную жидкость получают пункцией коленного сустава ат больного равматоидным артритом (PA). Жидкость центрифугируют при 10000 об/мин 40 мин. ИК осаждали

2,5%-ным раствором полиэтиленгликоля и центрифугированием при 10000 аб/

/мин 45 мин. После центрифугирования в надосадке ИК не определялись во всех случаях. Освобождение надосадка от полиэтиленгликоля проводили элюцией на колонке 18» 600 мм с сефадексом С-75 (Pharmacia), уравновешенным забуференным фасфатным физиологическим раствором рН 7,4 со ско- 25 ростью 25 мм/ч, результаты регистрировали на аппарате "Увикорд-2". Элюат концентрировали при помощи системы Аш1 соп на фильтрах ХМ-50 в

15--20 раз. Канцейтрацию белка в элюате определяли по методу Лаури и доводили до исходной.

Обогащенную суспензию моноцитав периферической крови здоровых и больных PA получали после инкубации мононуклеаров (NHK) при 37 С в течение часа в пластиковых чашках .Петри. Неприлипшие клетки удаляли, а к прилипшим маноцитам добавляли среду

БРМТ-1640 с содержанием 20% синови40 альной жидкости, не содержащей ИК в. содержащие их до и после элиминации. Образец синовиальной жидкости о п»редварительно прогревали при 56 С .l0 мин. После инкубации в течение получаса прилипшие клетки (А-клетки) снимали раствором лидокаина 30 ммоль/

/моль (TI) и дозированно добавляли к аутологичным неприлипшим клеткам.

Первая доза в соотношении 1:9, затем

":7. Первое соотношение соответствует нормальному содержанию моноцитов в мононуклеарах, выцеленных указанным образом, а второе — повьппенному содержанию маноцитов и гиперпродук55 ции ими ПГЕ, Затем в культуре MHK генерировали комплекс регулятарных клеток, "например, Тс. Для генерации Т три равнь»е взвеси МНК с содержанием 1 !О жизнеспособных клеток в 1 мл среды инкубиравали соответственно с тубер- кулином (8 мкг/мл), гистамином (50 мкг/мл) в течение 24 ч, ФГА-P (10 мкг/мл) в течение 72 ч с добавлением 20% смешанной сыворотки крови AB (IV) группы человека. Первичные культуры обрабатывали митомицином С в дозе 40 мкг/мл 30 мин, переносили ва вторичную культуру аллогенных лимфацитов в равных соотношениях, инкубировали с ФГА-P 72 ч.

Учет пролиферативной активности лимфоцитов проводили радиоизотопным методом. Индекс супрессии вычисляли по формуле число импульсав/мии в опыте

1 %> число импульсов/мин в контроле

Угнетение синтеза ПГЕ проводили

2 ,цобавлением к А-клеткам ингибитора простагландинсинтетазы — индометацина в дозе 1 мкг/мл на все время инкубации их с образцом синовиальной жидкости. Экзагенный ПГЕ2добавляли в первичные культуры мононукле-Б -p аров в дозах 10 -10 И. Фибробласты эмбриона человека выращивали в пенициллиновых флаконах. Пролиферативную активность фибрабластав и оценку индекса супрессии проводят указанным образом.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить информативность определения пролиферативной активности лимфоцитов за счет определения влияния ИК на нее.

Формула изобретения

Способ определения пролиферативнай активности лимфоцитов при ревматоидном артрите, включающий выделение мононуклеаров здоровых людей и больных ревматоидным артритом, добавление к ним синовиальной жидкости больных, содержащей и не содержащей иммунные комплексы, и определение пролиферативной активности лимфоидных клеток, а т л и ч а ю щ и йся тем, что, с цель»о павьппения информативности эа счет определения влияния иммунных комплексов на пролиферативную активность лимфоцитов, дополнительно суспе»»зи»»> монацитов, обработанных и не абра бата нных иммунными камплексами, вносят в культуру аутологичных MoHOHyKJIeap» клеток, далее инкубируют клетки в присутствии активаСоставитель М. Васильев

Техрец А.Кравчук

Редактор И. Шулла

Корректор Н. Король

Тираж 84 7

Заказ 4425/45

Подписное

ВПИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 б з 1422156

4 торов пролиферации Т- и В-лимфоцитов пролиферативной активности лимфоцитов и добавляют их в культуру нелимфоид- по индексу супрессии нелимфоидных ных клеток с последующим определением клеток.