Способ получения вещества, стимулирующего функцию сетчатки глаза
Изобретение относится к медицинской промышленности. Цель изобретения - повышение специфической биологической активности вещества для лечения сетчатки глаза. В качестве сырья берут сетчатку глаз млекопитающих, например крупного рогатого скота. Сетчатку выделяют из глаз, измельчают и экстрагируют 3% -ной уксусной кислотой с добавлением хлористого цинка, т.к. измельченная сетчатка обладает склонностью к набуханию, то для полного выделения активного вещества для экстракции берут не менее 10 - 15 объемов уксусной кислоты относительно количества сетчатки. Субстрат центрифугируют, надосадочную жидкость декантируют и добавляют 10 - 20 объемов ацетона. После формирования осадка его высушивают и растворяют в дистиллированной воде, экстрагируют, фильтруют и выделяют целевой продукт. Полученное вещество оказывает стимулирующее влияние на сетчатку, повышает ее световую чувствительность. 1 табл.
Изобретение относится к медицинской промышленности. Цель изобретения - повышение специфической биологической активности целевого продукта. Способ осуществляют следующим образом. Сетчатку глаза млекопитающих измельчают, экстрагируют в 10-15 объемах 3% -ного раствора уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтруют, обрабатывают надосадочную жидкость 10-20 объемами ацетона, отделяют осадок, перерастворяют его в воде, высушивают. П р и м е р 1. Берут глаз крупного рогатого скота, выделяют глазное яблоко, разрезают оболочку и выделяют сетчатку. Собранные сетчатки в количестве 0,5 кг измельчают и загружают в реактор с охлаждением и мешалкой. 1 часть сырья заливают 10 частями (5 кг) 3%-ной уксусной кислоты и добавляют хлористый цинк из расчета 1 г ZnCl2 на 1 л уксусной кислоты (0,005 кг). Экстракцию проводят 56 ч с периодическим перемешиванием по 1 ч 3 раза в сутки. По окончании экстракции субстрат центрифугируют в течение 20 мин со скоростью 3000 об/мин. Прозрачную надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют 34 кг ацетона (на 1 часть экстракта 10 частей ацетона) с температурой -1оС. Осадок формируют 20 ч при -1оС, фильтруют. Высушенный осадок, порошок черного цвета 0,03 кг растворяют в 0,6 кг дистиллированной воды и экстрагируют 2 ч при комнатной температуре и непрерывном перемешивании. Фильтруют и получают раствор темно-желтого цвета. В отфильтрованный раствор добавляют уксусную кислоту до рН 4,0, стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы и лиофилизируют при -27оС не менее 5 ч. Получают в каждом флаконе 10 мг лиофилизированного порошка белого цвета. Выход активного вещества из исходного сырья составляет 0,006 кг. Экстрагирование раствором уксусной кислоты в течение 56 ч позволяет провести гидролиз крупных белков, что позволяет в дальнейшем получить вещество с высокой степенью очистки и избежать аллергических реакций. Экстрагирование более длительное время приведет к непроизводительным расходам, а большего эффекта достигнуть не удается. Присутствие 1 г/л ZnCl2 позволяет более полно экстрагировать из сырья низкомолекулярные полипептиды, что дает возможность максимально выделить биологически активное вещество из сырья. Взятые объемы раствора уксусной кислоты и ацетона необходимы для более полного выделения биологически активного вещества, так как сетчатка имеет склонность к значительному набуханию. П р и м е р 2. Берут глаза мелкого рогатого скота, очищают, разрезают сетчатку. Собранные сетчатки в количестве 1 кг измельчают и загружают в реактор, туда же заливают 15 кг (15 объемов) 3%-ного раствора уксусной кислоты и добавляют 0,015 кг ZnCl2. Экстракцию проводят 48 ч с периодическим перемешиванием, по окончании экстракции субстрат центрифугируют 20 мин со скоростью 3000 об./мин. Надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют 248 кг ацетона (20 объемов) с температурой -3оС. Осадок формируют 24 ч при -3оС, фильтруют. Полученный осадок высушивают, измельчают и в количестве 0,06 кг растворяют в 1,2 кг дистиллированной воды, экстрагируют 2 ч при комнатной температуре и непрерывном перемешивании. Фильтруют и получают раствор темно-желтого цвета. В отфильтрованный раствор добавляют уксусную кислоту до рН 4,0, стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы и лиофилизируют при -27оС не менее 5 ч. Получают в каждом флаконе 10 мг лиофилизированного порошка белого цвета. Выход активного вещества от исходного сырья составляет 0,01 кг. П р и м е р 3. Берут глаза свиней, выделяют глазное яблоко, разрезают оболочку и выделяют сетчатку. Для накопления сырья его замораживают и хранят в холодильных шкафах при температуре -20оС. Замороженное сырье измельчают, помещают в реактор в количестве 10 кг и заливают 3%-ным раствором уксусной кислоты - 120 кг (12 объемов), туда же добавляют 0,12 кг хлористого цинка. Экстракцию проводят 56 ч с периодическим перемешиванием по 1 ч 3 раза в день. По окончании экстракции субстрат центрифугируют в течение 20 мин со скоростью 3000 об./мин. Прозрачную надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют 186 кг ацетона (15 объемов), охлажденного до -3оС, перемешивают, формируют осадок при той же температуре 24 ч, фильтруют. Высушенный осадок 0,6 кг растворяют в дистиллированной воде (12 л) и экстрагируют 2 ч, постоянно перемешивая. Балластные вещества отделяют фильтрованием. В отфильтрованный раствор темно-желтого цвета добавляют уксусную кислоту до рН 4,0, стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы и лиофилизируют при -24оС не менее 5 ч. Получают в каждом флаконе 10 мг лиофилизированного порошка белого цвета. Выход активного вещества из исходного сырья составляет 0,1 кг. Исследование влияния полученного вещества на орган зрения проводили на глазу кролика, который является наиболее простой, доступной и адекватной моделью глаза человека. Регистрацию биоэлектрической активности сетчатки глаза кролика проводили путем отведения биопотенциалов от внутреннего верхнего квадранта роговицы при помощи роговичного и склерального электродов контактной линзы. Отводимые от роговицы биопотенциалы усиливались на электроэнцефалографе типа BST-1 (ГДР), с выхода которого сигналы подавались на анализирующее устройство Ф-37 для синхронного накопления и усреднения результатов. Полученное вещество из сетчатки глаза вводили однократно парентерально кроликам массой 3-4 кг в количестве 1 мг на 1 кг массы. Стимулирующий эффект на сетчатку, выразившийся в увеличении амплитуды В волны ЭРГ, проявлялся на 20 мин после введения и достигал максимума через 1 ч, сохраняясь на этом уровне в течение 4-5 ч. Сравнительные данные об амплитуде В волны ЭРГ до и после введения вещества, стимулирующего функции сетчатки, при постоянстве условий фототеста представлены в таблице (энергия фотостимула равна 0,068 Дж).
Формула изобретения
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТИМУЛИРУЮЩЕГО ФУНКЦИЮ СЕТЧАТКИ ГЛАЗА, включающий гомогенизацию ткани глазного яблока животных, экстракцию, фильтрацию, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической биологической активности целевого продукта, в качестве ткани используют сетчатку, экстракцию проводят в течение 48 - 56 ч 3%-ным раствором уксусной кислоты при соотношении ткань : кислота 1 : 10 - 1 : 15 с добавлением хлористого цинка в количестве 1 г/л смеси, центрифугируют надосадочную жидкость, содержащую целевой продукт, обрабатывают ацетоном при соотношении 1 : 10 - 1 : 20 при -1 - +3oС и лиофилизируют.РИСУНКИ
Рисунок 1PC4A - Регистрация договора об уступке патента Российской Федерации на изобретение
Номер и год публикации бюллетеня: 27-1999
(73) Патентообладатель:ООО "Клиника Института биорегуляции и геронтологии"
Договор № 8615 зарегистрирован 28.04.1999
Извещение опубликовано: 27.09.1999
