Способ подготовки замороженных клеток костного мозга к использованию

 

Изобретение относится к медицине, предназначено для подготовки консервированных биологических материалов к использованию, в частности ядросодержащих клеток костного мозга. Цель изобретения повышение числа жизнеспособных клеток. Для этого замороженную клеточную взвесь размораживают на водяной бане при 40 42°С, затем переносят в стеклянный флакон и добавляют цитохром С в конечной концентрации 0,0023 0,0027% и холинхлорид в конечной концентрации 0,8 1,2% Выдерживают 20-30 мин в холодильнике при 4°С, затем определяют процент сохранившихся в жизнеспособном состоянии клеток.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при подготовке консервированных биологических материалов к использованию, в частности ядросодержащих клеток костного мозга. Целью изобретения является повышение числа жизнеспособных клеток. Способ осуществляют следующим образом. Замороженную клеточную взвесь размораживают на водяной бане при 40-42^оС, затем переносят в стеклянный флакон и добавляют цитохром С в конечной концентрации 0,0023-0,0027% и холин-хлорид в конечной концентрации 0,8-1,2% Выдерживают 20-30 мин в холодильнике при 4^оС, после чего определяют процент сохранившихся в жизнеспособном состоянии клеток. П р и м е р 1. Ампулы с костным мозгом, замороженным до -196^оС, помещают на 30 с в водяную баню с температурой 42^оС, для равномерного размораживания ампулы подвергают покачиванию со скоростью 2 качания в 1 с в вертикальном направлении. После этого взвесь переносят в стеклянный флакон, в который добавляют цитохром С до конечной концентрации 1% и ставят на 20 мин в холодильник при 4^оС. После этого определяют жизнеспособность клеток по эозиновой пробе и их количество в 1 мкл суспензии. П р и м е р 2. Ампулы с замороженным костным мозгом помещают на 30 с в водяную баню (42^оС), где размораживают при постоянном покачивании. После этого суспензию переносят в стеклянный флакон, добавляют цитохром С и холин-хлорид в конечных концентрациях 0,0025 и 1% соответственно и ставят на 5 сут в холодильник (4^оС). П р и м е р 3. Ампулы с замороженным костным мозгом помещают в 30 с в водяную баню (42^оС), где размораживают при постоянном покачивании. После этого суспензию переносят в стеклянные флаконы, в которые вводят цитохром С в различных концентрациях: 0,001, 0,0023, 0,0025, 0,0027 и 0,025% Холин-хлорид добавляют во все флаконы до конечной концентрации 1% П р и м е р 4. Ампулы с замороженным костным мозгом помещают на 30 с в водяную баню с температурой 42^оС, где размораживают при постоянном покачивании. После того как суспензию размораживают, ее разливают в стеклянные флаконы, в каждый из которых вводят цитохром С до конечной концентрации 0,0025% а затем добавляют холин-хлорид в различных концентрациях: 0,5, 0,8, 1,0, 1,2, 2,0% Жизнеспособность клеток в суспензии, подготовленной предлагаемым способом, на 21% выше, чем в суспензии, подготовленной известным способом. Через 5 сут жизнеспособность клеток в суспензии подготовленной предлагаемым способом, на 16% выше по сравнению с прототипом. Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает жизнеспособность 85% клеток.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ЗАМОРОЖЕННЫХ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ, включающий замораживание клеток при температуре жидкого азота, размораживание, последующее добавление цитохрома С, отличающийся тем, что, с целью повышения числа жизнеспособных клеток, в размороженную суспензию дополнительно вводят холин-хлорид в концентрации 0,9 1,1% а цитохром С берут в концентрации 0,0025 0,0027%

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 8-2000

Извещение опубликовано: 20.03.2000        

---