Способ анализа биологических объектов
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУЬЛИК (19) (11) 1) 4 G 03 С 7/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А BT0PGH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4236113/24-10 (22) 23.02.87 (46) 23. 12.88. Бюл. Р 47 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов (72) В.А.Долматов и И.И.Захаров (53) 771.72 (088.8) (56) Деже С. Цветная медицинская микрофотография. 1978.
Советское фото, 1985, 1(3, с.43. (54) СПОСОБ АНАЛИЗА БИОЛОГИЧЕСКИХ
ОБЪЕКТОВ . (57) Изобретение относится к прикладной биологии, а именно к методам анализа биологических объектов с использованием микрофотосъемки. Для повышения точности воспроизведения объекта микрофотосъемки биологического объекта в УФ-лучах с помощью микроскопа съемку осуществляют на цветную негативную пленку типа ЦНД-32, которую обрабатывают в режиме прямопозитивной цветной пленки, но с измененными временными характеристиками основных стадий процесса. 1 табл.
1446593
50
Точность воспроизведения объекта микрофотосъемки при использовании предлагаемого и известного способов иллюстрирует таблица.
1,5
0,3 л
Изобретение относится к прикладной биологии, а именно к методам анализа
1, биологических объектов c,èñïoëüçîâàнием лабораторной микрофотосъемки.
Цель изобретения — повышение точности анализа за счет улучшения качества снимка.
Пример 1. Биологический объект — взвесь клеток лимфомы мьппи, 10 флуорохромированный хлортетрациклином и этидиумбромидом, исследуется с помощью микроскопа МБИ-15 или серии
"Люмам с ртутной лампой сверхвысокого давления в качестве источника ос- 15 вещения (ДРШ-250-3), светофильтрами возубждения, люминесценции ФС-1, С3С24, БС-8 и светофильтрами эмиссии
ЖС-18 + ЖЗС-19 и соответствующей светоделительной пластинкой, объективом 20 (90 1.25 (ЛОМО). Микрофотосъемка ве дется на цветную негативную пленку типа ЦНД-32.
Фотопленку обрабатывают по следущей схеме: первое проявление 8 — 25
12 мин (25+2 С), оптимум 10 мин, промывка 1 мин (13-20 С); остановка проявления 3 мин (20 С), промывка 5 мин (13-20 С); засветка 5 мин; цветное проявление 6-10 мин (25+2 С), опти- 30 мум 8 мин, промывка 20 мин (13-20 С); отбеливание 5-7 мин (20 С) промывка о
t.
5 мин (13-20 С); фиксирование 10—
12 мин (20 С), промывка 30 мин (13 —, 20 С).
Составы используемых растворов, содержащие, г/л: черно-белый проявитель "Орвоколор" С-07
Трилон Б 2
Натрий тетраборнокислый 15
Сульфат натрия безводный 40
Гидрохинон 4,5
Метилфенидон 0,25
Калий углекислый 25
Калий роданистый 2
Калии иодистыи 0,007 стоп-ванна "Орвоколор С-37":
Квасцы алюмокалиевые 20 цветной проявитель "Орвоколор С-17"; раствор А
Гексаметофосфат натрия 3
Гидроксиламинсульфат
ЦПВ-1
Вода раствор Б
Гексаметофос ат натрия 1
Калий углекислый 75
Сульфит натрия безводный 3
Калий бромистый 2
Вода 0 5 л отбеливатель "Орвоколор С-57":
Калий железосинеродистый 100
Калий бромистый 15
Калий фосфорнокислый однозамещенный 5,8
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 4,3 фиксаж "Орвоколор С-71":
Тиосульфат натрия кристаллический 200
Для приготовления всех растворов используют дистиллированную воду.
На слайдах, полученных предлагаемым способом, правильно воспроизводится биологический объект с характерной желто-зеленой люминесценцией митохондрий (локализация тетрациклина) и красной люминесценцией нуклеиновых кислот в ядре (взаимодействие этидиумбромида с двухцепочными нуклеиновыми кислотами). Слайды, полученные при фазово-контрастном освещении: с желто-зеленым светофильтром, имеют соответствующий цвет.
Пример 2. Экспонированную фотопленку типа ЦНД-32 обрабатывают как в примере 1 с временем чернобелого проявления, цветного проявления, отбеливания и фиксирования меньше 8, 6, 5, 10 мин соответственно. Изображение на слайдах в этом случае имеет неправильную цветопередачу и пурпурную вуаль.
Пример 3. Экспонированную фотопленку типа ЦНД-32 обрабатывают как в примере 1 с временем чернобелого проявления, цветного проявления, отбеливания и фиксирования больше 12, 10, 7, 12 мин соответственно. Слайды в этом случае перепроявлены, т.е. сплошь черные.
1446593
Характеристики биологического объекта
Способ
2,0
15,0
40,0
4,5
0,25
25,0
2,0
0,007
До 1 л проявиизвестHblA предлагаемый
Количество митохондриальных частиц в одной клетке
1 0-20
30-40
Цвет люминесценции
Желтый
Желтоэеленый
4,0
1 ф 5
4,0
75,0
3,0
2,0
До 1 л теле
Ядерные включения
Обн аруживаются слабо
Четко видны
Цвет люминесценции
Красный
Розовый
100
5,8
4,3
Составитель В.Андреев
Редактор Н.Рогулич Техред М. Ходанич Корректор М.Васильева
Заказ 6746/52 Тираж 442 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Формула изобретения
Способ анализа биологических объектов, включающий введение в них зондов, микрофотосъемку на цветную фотопленку, ее черно-белое проявление, остановку проявления, засветку, цветное проявление, отбеливание и фиксирование, о т л и ч а ю щ и и -,- с я тем,что, с целью повышения точности анализа за счет улучшения качества снимка, съемку осуществляют на негативную фотопленку, проявляют
8-12 мин в черно-белом проявителе следующего состава, г/л:
Динатриевая соль с этилендиамин-N,N,N,,N— тетраукусуной кислоты
Тетраборат натрия
Сульфат натрия безводный
Гидрохинон
Иетилфенидон
Карбонат калия
Роданид калия
Йодид калия
Вода дистиллированная
6-10 мин проявляют в цветном теле состава, г/л:
Гексаметафосфат натрия
Гидроксиламинсульфат
Диэтил-п-фенилендиамин
Карбонат калия
Сульфит натрия безводный
Бромид калия
Вода дистиллированная
5-7 мин отбеливают в отбелива состав, г/л:
Феррициакид калия
Фосфат калия однозамещенный
Фосфат натрия двуэамещенный
Вода дистиллированная До 1 л и 10-12 мин фиксируют в водном растворе тиосулъфата натрия кристаллического в концентрации 200 г/л, причем об " ч проявления проводят при о
25+0,5 С, а отбеливание и фиксирование при 20+1 C.
