Способ получения инсектицида из энтомофторовых грибов

 

Изобретение относится к созданию средств защиты растений от вредителей, а именно к производству инсектицидов микробного происхождения на основе энтомофторовых грибов. Цель повышение выхода и активности препарата биоинсектицида. Способ заключается в том, что выращивают культуру гриба рода Entomophthora, отделяют мицелий и смешивают его с щелочным раствором спирта концентрации 15 20% нагревают до кипения и выдерживают 1 2 ч. При этом происходят одновременно процессы экстракции и щелочного гидролиза липидов. В результате выход метаболитов токсичной для насекомых вредителей фракции повышается более чем в 2 раза. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биологии, в частности к созданию средств защиты растений от вредителей, а именно к способам получения биологических инсектицидов на основе энтомофторовых грибов. Цель изобретения повышение выхода и эффективности биологического инсектицида на основе метаболитов энтомофторовых грибов. Способ заключается в том, что одновременно с экстракцией липидов проводят их щелочной гидролиз. На основании проведенных исследований установлено, что липидная фракция энтомофторовых грибов содержит не более 4-5% токсичных метаболитов, обладающих инсектицидной активностью, а остальные компоненты фракции не активны в отношении насекомых. Однако при щелочном гидролизе (омылении) липидов активность экстрактов значительно возрастает за счет образования инсектицидных веществ, по-видимому, солей жирных кислот, входящих в состав липидов энтомофторовых грибов. Суммарная эффективность полученного препарата слагается из инсектицидной активности токсина и омыленных липидов. Одновременное проведение экстракции и омыления липидов осуществляется спиртовым раствором щелочи. Биомассу энтомофторовых грибов, выращенную в глубинных условиях, отделяют фильтрованием и обрабатывают 15-20% -ным раствором щелочи (КОН или NaOH) в спирте в течение 1-2 ч при температуре кипения смеси. После окончания процесса омыления экстракт нейтрализует HCl, биомассу с осадком отделяют фильтрованием, а фильтрат упаривают при 40-60^оС до постоянной массы. Применение более концентрированных растворов щелочи в спирте нецелесообразно, так как выход токсичной фракции увеличивается незначительно. Применение растворов с концентрацией щелочи менее 2% значительно увеличивает время процесса растворения. П р и м е р 1. Гриб E.thaxteriana выращивают при 27^оС на питательной среде следующего состава: соевая мука 1% глюкоза 6% вода остальное, рН среды 6,8. Длительность культивирования 4 сут. Выращенную биомассу отделяют фильтрованием, высушивают при 40-60^оС и размалывают. Обработку биомассы проводят 15%-ным раствором щелочи в спирте в течение 1 ч при температуре кипения смеси. Полученный экстракт отделяют от биомассы, нейтрализуют и выпаривают при 60^оС до постоянной массы. Одновременно проводят обработку биомассы по известному способу (спиртовая экстракция с последующим выпариванием растворителя). Определяют выход и биологическую эффективность токсичной фракции путем опрыскивания тест-насекомых 0,5%-ной водной эмульсией в специальной камере на ростках гороха. Результаты представлены в табл.1. При обоих способах происходит полное извлечение токсина, так как биомасса, оставшаяся после обработки, практически не токсична в отношении насекомых. Однако активность препарата при спирто-щелочном гидролизе значительно выше, чем при спиртовой экстракции. Повышение активности происходит за счет омыления неактивных липидов E.thaxteriana. П р и м е р 2. Культуры разных видов энтомофторовых грибов (E.thaxteriana, E.pyriformis, E.exitialis, E.virulenta) выращивают в глубинных условиях при 28^оС на разведенном в 2 раза пивном сусле, рН среды 6,5, длительность культивирования 5 сут. Полученную биомассу отделяют, сушат и обрабатывают 15%-ным раствором щелочи в спирте в течение 1 ч при температуре кипения смеси. Одновременно токсичные вещества выделяют методом спиртовой экстракции по известному способу. Экстракты, полученные двумя способами, отделяют от биомассы и выпаривают до постоянной массы. Эффективность образцов определяют по биооценке на тест-насекомых методом контакта с обработанной поверхностью, концентрации рабочих растворов препаратов 1% время контакта 1 ч. Результаты представлены в табл.2. Из данных табл.2 следует, что для разных видов энтомофторовых грибов одновременное проведение экстракции и омыления липидов способствует повышению эффективности препарата. Таким образом, получение инсектицидов на основе метаболитов энтомофторовых грибов в соответствии с предложенным способом более чем в 2 раза повышает выход и на 20-30% эффективность препарата за счет одновременного извлечения, токсина спиртом и образования дополнительных энтомоцидных веществ, по-видимому, солей жирных кислот, входящих в состав липидов энтомофторовых грибов. Кроме того, дополнительным положительным эффектом является хорошая растворимость препарата в воде и стабильность полученной эмульсии за счет образования из липидов поверхностно-активных веществ.

Формула изобретения

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНСЕКТИЦИДА ИЗ ЭНТОМОФТОРОВЫХ ГРИБОВ, включающий выращивание мицелиальной биомассы грибов рода Entomophthora, отделение ее от среды, добавление к ней спирта для экстракции липидной фракции и последующее концентрирование продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода активной фракции, в процессе экстракции проводят одновременный щелочной гидролиз липидов. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода препарата, щелочной гидролиз проводят путем добавления в спирт щелочи для концентрации 15 20% нагревания смеси биомассы и спиртового раствора щелочи до кипения и выдерживания при этой температуре в течение 1 2 ч.

РИСУНКИ

Рисунок 1