Способ определения плазматических иммуноглобулинпродуцирующих клеток на гистологическом препарате
Изобретение относится к иммуногистологическим методам диагностики. Цель изобретения - повышение точности определения иммуноглобулинпродуцирующих клеток в парафиновых срезах, предназначенных для гистохимического анализа. Поставленная цель достигается тем, что дифференцировку иммуноглобулинпродуцирующих плазматических клеток проводят путем обработки срезов с нанесенными на них специфическими антителами против ИГА, ИГУ, ИГМ раствором гепарина с последующей промывкой, подсушиванием и микроскопированием. В результате происходит гашение клеток, не продуцирующих иммуноглобулины, и четкая дифференцировка плазматических иммуноглобулинпродуцирующих клеток, что повышает достоверность при интерпретации результатов иммунофлюоресценции и исключает ошибочную трактовку и диагностически ложные результаты.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
Ф.1 (g1) 4 G 01 N 1/28! 1 ГАтвт:.; ",;.;;-„1 I
Б lE.,: - (1
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К A BTOPCHQMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM
ПРИ ГКНТ СССР (21) 4268019/28-14 (22) 26.06.87 (46) 15.08.89. Бюл. У 30 (71) Научно-исследовательский институт педиатрии АМН СССР (72) М.Я.Сахатов, В.П.Бобкова, В.Г.Иванов и Т.Б.Сенцова (53) 615.475(088.8) (56)Brandzaeg P., Bakl еп К. Immunohistochemica1 characterization of
local immunoglobulin formation in
grohn s disease in the clenne. Scand.
J ° Gastroentегоl, 1976, v. 11, р. 447-457. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЛАЗМАТИЧЕСКИХ ИММУНОГЛОБУЛИНПРОДУЦИРУНМЦИХ КЛЕТОК НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ (57) Изобретение относится к иммуногистологическим методам диагностики.
Цель изобретения — повьппение точносИзобретение относится к медицине, в частности к иммуногистологическим методам диагностики, и может быть использовано в деятельности клиникодиагностических лабораторий.
Целью изобретения является повьппение точности определения иммуноглобулинпродуцирующих плазматических клеток в парафиновых срезах, предназначенных для гистохимического анализа.
Способ осуществляется следующим образом.
Парафиновые срезы после депарафинации. промывают в фосфатном буфере, наносят на них люминесцирующие сыворотки против ИГА, ИГД, ИГМ, инкубиÄÄSUÄÄ 1500908 ти определения иммуноглобулинпродуцирующих клеток в парафиновых срезах, предназначенных для гистохимического анализа. Поставленная цель достигается тем, что дифференцировку иммуноглобулинпродуцирующих плазматических клеток проводят путем обработки срезов с нанесенными на них специфическими антителами против ИГА„ ИГУ, ИГМ раствором гепарина с последующей промывкой, подсушиваниеи и микроскопнрованием. В результате происходит гашение клеток, не продуцирующих иммуноглобулины, н четкая дифференцироька плазматических иммуноглобулинпродуцирующих клеток что повьппает дос- а т
Я товерность при интерпретации результатов иммунофнюореоценвин н ноннюеает (/) ошибочную трактовку и диагностически ложные результаты.
1 и
1 цацвЬ „Д (",,"
4Р
Я;:)
4Р (В руют в термостате при 37 С 30 мин,. отмывают проточной водой и наносят на каждый срез раствор гепарина рН
7, 7-7,8, помещают срезы во влажной среде при 37 С на 20 ч, после чего промывают проточной водой, подсушивают и микроскопируют, Пример, Больная Н,, 4 года.
Диагноз — хронический цистит. Произведена диагностическая биопсия стенки мочевого пузыря.
Материал залит в парафин по методу Сант-Мари. Срезы после депарафинации промывали в фосфатном буфере, наносили на них люминесцирующие антисыворотки против ИГА, ИГ11, ИГ ДЖИ, 1500908
Формула и э о б р е т е н и я
Составитель С.Колобов
Техред Л.Олийнык Корректор Т-Колб
Редактор Т.Парфенова
Заказ 4858/38 Тираж 789 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðoä, ул. Гагарина, 101
3 инкубировали в термостате при 37ОС
30 мин, отмывали проточной водой и наносили на каждый срез раствор гепарина рН 7,7-7,8, помещали срезы во влажной среде в термостат при 37 С на 19-21 ч, после чего промывали проточной водой, подсушивали, микроскопировали. Выявляли плазматические клетки, синтезирующие иммуноглобу- 10 лины.
При нанесении антисывороток ИГА, ИГМ, ИГ"ДЖИ" через 15-16 ч отмечается неспецифическое свечение в клетках инфильтрата, отсутствует дифференци- 15 ровка, через 19-21 час происходит четкая дифференциация плазматических клеток, ингибиция свечения в клетках, не относящихся к плазматическим, а через 22-24 ч происходит размывание 20 контуров плазматических клеток со снижением интенсивности свечения.
Оптимальный временной режим инкубации cpesos с гепарином 19-21 ч.
Использование предлагаемого способа обработки парафиновых срезов обеспечивает по сравнению с существующими способами следующие преимущества: дифференцирование иммуноглобулинсин-. тезирующих плазматических клеток в срезах, гашение клеток, не синтезирующих иммуноглобулины в срезах.
Способ определения плазматических иммуноглобулинпродуцирующих клеток на гистологическом препарате путем обработки деперафинированных срезов биологически активными веществами и люминестирующими сыворотками, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности, в качестве биологически активного вещества используют гепарин рН 7,7-7,8, при этом наносят его на срез после обработки люминестирующими сыворотками.
