Способ выявления гемадсорбирующих свойст вируса гриппа

 

Изобретение относится к вирусологии, в частности к лабораторному изучению вирусов гриппа. Цель изобретения - повышение чувствительности способа. Клеточный пласт инфицируют вирусом, затем проводят предобработку инфицированного монослоя клеток раствором гидрохлорида α -метил-1-аминометиладамантана (ремантадина) в концентрации 2,3 х 10^-4 - 4,5 х 10_-⁴ М, после чего ставят реакцию гемадсорбации и результаты оценивают по хемилюминесценции гемоглобина. Чувствительность увеличивается в 1,7 раз. 1 табл.

Изобретение относится к вирусологии, в частности к лабораторному изучению вирусов гриппа. Цель изобретения повышение чувствительности способа. П р и м е р. 24-часовые монослойные культуры фибробластов эмбрионов кур (ФЭК), сформированные на дне пенициллиновых флаконов, отмывают от ростовой среды, инфицируют вирусом гриппа A/FPV/Rostock, проводя для этого в течение 1 ч контакта клеток с вируссодержащей жидкостью из расчета 0,0001 БОЕ/клетка вируса, дополняют объем жидкости до 2,0 мл средой 199, инкубируют 8 ч в термостате. Затем культуральную жидкость удаляют, монослой дважды промывают фосфатным буфером Дульбекко (рН 7,2), наносят на клетки 2,0 мл раствора ремантадина в конечной концентрации 2,3˙10^-4 М и вслед за ним равный объем 0,8% -ной взвеси эритроцитов на этом же буфере. На контрольные культуры наносят 4,0 мл 0,4% -ной взвеси эритроцитов. После 20 мин инкубации при комнатной температуре взвесь эритроцитов сливают и монослой клеток трижды промывают фосфатным буфером, не содержащим ионы кальция и магния. Далее во флаконы вносят по 0,4 мл бидистиллированной воды и оставляют на холоде на 2 ч. Количество гемоглобина определяют хемилюминесцентным способом, используя в качестве регистрирующего прибора жидкостный сцинтилляционный спектрометр. В сцинтилляционные флаконы вносят 2,0 мл NaOH-фосфатного буфера (рH 12,0), добавляют 10^-3 М перекиси водорода в объеме 1,0 мл, замеряют фоновую интенсивность свечения, вводят исследуемую пробу и снова снимают показания. Получают 1,7-кратный прирост интенсивности хемилюминесценции в сравнении с инфицированными культурами, не обработанными препаратом, соответствующей увеличению количества гемоглобина, вышедшего из прикрепившихся к ткани эритроцитов (см. таблицу). Использование способа позволяет повысить чувствительность способа за счет улучшения адсорбции эритроцитов на поверхности инфицированных клеток.

Формула изобретения

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ГЕМАДСОРБИРУЮЩИХ СВОЙСТ ВИРУСА ГРИППА путем инфицирования клеточного пласта, инкубации, проведения реакции гемадсорбции и оценки результатов по хемилюминесценции гемоглобина, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, на инфицированные клетки предварительно наносят раствор гидрохлорида α -метил-1-аминометиладамантана в концентрации 2,3 х 10^-4 4,5 х 10^-4 М.

РИСУНКИ

Рисунок 1

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 23-2001

Извещение опубликовано: 20.08.2001        

---