Штамм бактериофага рsеudомоnаs aeruginosa, используемый для идентификации и индикации микробов рsеudомоnаs aeruginosa

 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к бактериологической диагностике микробов PSEUDOMONAS AERUGINOSA с помощью специфических бактериофагов, и касается нового пиоцианеус бактериофага. Поливалентный пиоцианеус бактериофаг МТ-2 депонирован под номером Ф-129 в коллекции Тбилисского НИИ вакцин и сывороток и характеризуется свойствами, присущими для диагностических бактериофагов: специфичностью и стабильностью литического спектра, высокой активностью и т.д. Эффективность диагностики PS. AERUGINOSA посредством нового пиоцианеус бактериофага МТ-2 подтверждена на клиническом материале (41 проба).

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК. Я0„, 1472500 A i (50 4 С 12 N 7/00//(Ñ 12 N 7/OOЭ

С,12 R 1:385) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4280087/28-13 (22) 28.07.87 (46) 15.04.89. Бюл. N - 14 (71) Тбилисский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (72) M.À.Дарсавелидзе, Т.П.Кратасюк, Т,Г.Чанишвили и Ж.С.Капанадзе (53) 576.858.9(088.8) (56) Аналогов в патентной и научнотехнической литературе не обнаружено. (54) ШТАММ БАКТЕРИОФАГА PSEUDOMONAS

AKRUGIN0SA, ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ И ИНДИКАЦИИ МИКРОБОВ PSEUDONONAS AERUGIN0SA (57) Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиоло1

Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к бактериологической диагностике микробов Pseudomonas aeruginosa с помощью специфических бактериофагов.

Пиоцианеус бактериофаг МГ-2 выде- лен иэ канализационных сточных вод и представляет собой смесь специфических клонов бактериофагов Ps. aeruginosa. Пиоцианеус бактериофаг YiT-2 депонирован под МФ-129 в коллекции

Тбилисского НИИ вакцин и сывороток, Фаг MT-2 характеризуется следующими свойствами.

При посеве двухслойным методом на агаре Мартена (рН 7,2-7,4) фаг

МТ-2 по морфологии стериальных пятен полиморфен. Диаметр негативных колоний (н,к,) 1-5 мм. гии, а именно к бактериоло|нческой диагностике микробов Pseudomonas

aeruginosa с помощью специфических бактериофагов, и касается нового пиоцианеус бактериофага. Поливалентный пиоцианеус бактериофаг МТ-2 депонирован.под номером Ф-129 в коллекции Тбилисского НИИ вакцин и сывороток и характеризуется свойствами, присущими для диагностических бактериофагов: специфичностью и стабильностью литического спектра, высокой активностью и т.д. Эффективность диагностики Ps.aeruginosa посредством нового пиоцианеус бактериофага NT-2 подтверждена на клиническом материа- Я ле (41 проба).

Специфичность фага МТ-2 изучалась в опытах перекрестного лизиса с гетерологичными видами микроорганизмов: эшерихиями (199 штаммов),. шигеллами (197 шт.), салмонеллами (224 шт.) протеем (61 шт.), Gersinia entегоcolitica (94 шт.).

Диапазон литической активности нового бактериофага МТ-2 определяют на коллекции музейных культур: Ps aernginosa — 25; P s. f luor escens — 5; P s.

ma 1 tophil ia — 5; P s ° t esto s tегоni — 5;

Ps,putida — 5 Ps.stutzeri — 5; и на

1170 свежевыделенных штаммах различ-ных видов и серологических типов микроорганизмов семейства ЕпгегоЬасteriacece.

Бактериофаг МТ-2 обладает строгой специфичесностью и широким диапазоном действия в отношении штаммов

1472500

Формула изобретения

Штамм бактериофага Pseudomonas

aeruginosa ТбНИИВС НФ-129, используемый для идентификации и индикации микробов Pseudomonas aeruginosa, Составитель А.Маныкин

Редактор И.Сегляник Техред Л.Сердюкова Корректор В.Романенко

Заказ 1674/28 Тираж 501 Поциисное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5, Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Ps.aeruginosa (лизирует 93,47. свежевыделенных штаммов).

Фаг МТ-2 проявляет высокую стабильность специфического действия. После многократного пассирования на гомологичных и гетерологичных штаммах, на их смеси и на устойчивых клонах гомологичных бактерий, фаг МТ-2 остается строго специфичным, лизируя только один вид — Ps.aeruginosa.

Таким образом, фаг MT-2 удовлетворяет требованиям, предъявляемым к диагностическим фагам как по специфичности, так и по стабильности ли- 15 тического спектра.

В результате изучения фаз взаимодействия фага МТ-2 с клеткой (эталонная культура Ps.aeruginosa 1038) установлено, что бактериофаг обладает 20 высокой адсорбционной способностью (максимальное время адсорбции 10 мин) и урожайностью (110 частиц ни 1 инфицированную клетку), коротким скрытым периодом (60 мин). 25

Высокий показатель эффективной множественности является одним из важнейших качеств йндикаторного фага, исключающий воэможность передозировки фага в РНФ (реакция нейтрали- 30 зации фага), следствием чего может наступить лизис без размножения.

В этих случаях РНФ будет отрицательной при нахождении в среде бактерий.

Установлено, что специфический бактериофаг МТ-2 обладает достаточно высоким показателем эффективной множественности, Интенсивное размножение фаза наблюдается при множественности 1 и ниже, 40

Пиоцианеус бактериофаг МТ-2 характеризуется довольно высокой термоустойчивостью — нижняя граница термоинактивации равняется — 55, верхняя—

85 C.

Для апробации эффективности РНФ в диагностике Ps.aeruginosa в частности, эффективности бактериофага MT-2 как индикаторного фага, проведен ряд опытов на клиническом материале. Всего исследовано 41 проба (20 проб крови, полученных из инфекционной больницы от больных с заболеваниями невыясненной этиологии; 10 проб гноя из ожогового центра; 11 проб мочи из разных инфекционных больниц).

Пример. К исследуемому материалу добавляют мясо-пептонный бульон (МПБ) в соответствии 1:10 и

1 мл индикаторного фага МТ-2, взятый .в рабочем разведении 10 фаговых частиц в 1 мл. Параллельно ставят контроль на присутствие в исследуемом материале свободного фага. По истечении времени инкубации содержимое каждой пробирки разводят в 100 раз МПБ. Конечные разведения прогревают при 56-58 С в течение 30 мин.

По 1 мл содержимого каждой пробирки исследуют по методу Грациа на эта-. лонной культуре Ps.aeruginosa 1038.

Результаты исследований считают положительными, начиная с трехкратного нарастания титра фага.

Таким образом, бактериофаг NT-2 по своим биологическим свойствамудовлетворяет требованиям, предъявляемым к индикаторным фагам. К тому же литическая активность бактериофага

МТ-2 весьма высока, а негативные колонии хорошо просматриваются на поверхности агара.