Способ диагностики рака легких

 

Изобретение относится к иммунорадиологическим исследованиям и может быть использовано в качестве диагностического теста при обследовании больных с подозрением на рак легкого. Цель изобретения - упрощение и повышение точности диагностики. Иммунорадиологически определяется цитотоксическая активность тромбоцитов. Тромбоциты периферической крови больных раком легкого осуществляют специфическое цитотоксическое действие против клеток перевиваемой линии рака легкого АКЛ, причем диагностическая точность равна 89,5%, тогда как тромбоциты больных хроническими воспалительными заболеваниями легких и тромбоциты здоровых лиц не способны к осуществлению подобного литического эффекта, т.е. специфичность метода равна 100%. У прототипа специфичность метода равна 71,7%, а диагностическая точность - 88,7%. Технически предлагаемый способ более прост в выполнении и менее травматичен для обследуемого. Таким образом, предлагаемый способ диагностики рака легкого может быть предложен в качестве одного из диагностических тестов при комплексном обследовании больных с подозрением на рак легкого. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (511 4 A 61 В 10/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К Д BTGPCHGMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4284398/28-14 (22) 15.07.87 (46) 23.09.89. Бюл. № 35 (71) Всесоюзный онкологический научный центр АМН СССР (72) Н. Г. Блохина, С. Н. Быковская, Д. Л. Сперанский и Т. А. Куприянова (53) 616.07(088.8) (56) Раково-эмбриональный антиген бронхоальвеолярнь:х смывов в диагностике рака легких.— Медицинская радиология, 1986, № I 1, с. 51 — 54. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАКА

ЛЕГКИХ (57) Изобретение относится к иммунорадиологическим исследованиям и может быть использовано в качестве диагностического теста при обследовании больных с подозрением на рак легкого. Цель изобретения — упрощение и повышение точности диагностики.

Иммунорадиологически определяется цитоИзобретение относится к иммунорадиологическим исследованиям и может быть использовано в качестве диагностического теста при обследовании больных с подозрением на рак легкого.

Цель изобретения — упрощение способа и повышение точности диагностики рака легкого.

Пример. 10 мл венозной крови больного вносят в пробирку объемом 20 см" с 5% ным раствором Ма2 ЭДТА. Соотношение крови и 1Х!а2ЭДТА равно 9:1. Пробирку оставляют на ч при комнатной температуре для оседания эритроцитов. Затем пробирку центрифугируют 10 мин при 200 g, из надосадочной жидкости забирают примерно 4/5 плазмы с тромбоцитами и переносят ее в другую про„„Я0„„1509040 А 1

2 токсическая активность тромбоцитов. Тромбоциты периферической крови больных раком легкого осуществляют специфическое цитотоксическое действие против клеток перевиваемой линии рака легкого АКЛ, причем диагностическая точность равна 89,5%, тогда как тромбоциты больных хроническими воспалительными заболеваниями легких и тромбоциты здоровых лиц не способны к осуществлению подобного литического эффекта, т. е. специфичность метода равна

100 У прототипа специфичность метода равна 71,7 4, d диагностическая точность-88,7%. Технически и редл а гаемы и способ более прост в выполнении и менее травматичен для обследуемого. Таким образом, предлагаемый способ диагностики рака легкого может быть предложен в качестве одного из диагностических тестов при комплексном обследовании больных с подозрением на рак легкого. 2 табл. бирку, которую центрифугируloT 10 мин при

200 g. Надосадочную жидкость, содержащую только тромбоциты, переносят в пластиковую пробирку и центрифугируют 15 мин при 1600 . Осадок тромбоцитов ресуспендируют в 1 мл среды КРМ! 1640 ((з1ВСО), содержащей 5% телячьей эмбриональной сыворотки, % l -глютамина, 1% буфера

HEPES и по 100 ед/мл пенициллина и стрептомицина (среда А). Количество тромбоцитов подсчитывают в камере Горяева при помощи микроскопирования, после чего суспензию тромбоцитов разводят средой А до концентрации 100)<10"/мл. При помощи последовательных разведений готовят суспеHзии с концентрациями громбоцитов 50.!0", 25 10, 12 !О", 10, 5 ° !О, 2,5.!О", 1,2.10", 0,6.10, 0,6 10, 0,3 10 и О,! 5.! О" /мл.

1509040 где о (опыт) Фор,иула изобретения

Таб ица1

Соотношение оффектор:Klt

250;1 125:1 100:I 50:1 25:1 12:1 6:1 3:1 1,5:1

1000:1 500:1

2,7

3,8

2,5

2,5

Х нитоииза

В качестве клеток-мишеней (КМ) используют монослойную культуру перевиваемой линии аденокарциномы легкого человека (АКЛ) .

Для получения меченых Сг КМ накануне опыта 5 IO" клеток АКЛ инкубируют в

0.5 мл среды 199, обогащенной 10% сыворотки крупного рогатого скота (среда Б), содержащей 75 — 100 мкКи Хав " Сг09, периодически встряхивая пробирку. Через 40 —60 мин инкубации клетки трижды отмывают в среде Б по 10 мин при 200 g и засевают по 2)(10 клеток в 0,2 мл среды А в плоскодонные 96-луночные микропластины. На следующий день, перед добавлением тромбоцитов, КМ дважды отмывают средой Б.

Тромбоциты в 0,2 мл среды А из каждого разведения добавляют к КМ, в результате получены следующие соотношения тромбоцит: КМ 1000:1, 500:1, 250:1, 125:1, 100:1, 50:1, 25:1, 12:1, 6 1, 3:1 и 1,5:1. Через 18 ч инкубации при 37 С в атмосфере 5% СО 20 из каждой лунки отбирают всю жидкость для определения радиоактивности в у-спектрометре. Процент лизированных КМ оценивают по формуле:

% лизиса КМ= К 100%, П вЂ” выход изотопа из лизированных КМ; с (спонтанный вы- — высвобождение изоход) топа интактными QQ

КМ; и (полное включе- полное включение ние) изотопа в КМ.

Процент цитолиза также может быть определен методом окраски клеток трипановым синим, однако этот метод использует- 35 ся только для суспензионных культур и неприемлем для монослойной культуры клеток

АКЛ.

Используя указанную формулу подсчета цитолиза и подставляя значения количеств импульсов в минуту, определяют процент лизированных КМ в каждом из соотношений (табл. 1).

В табл. 1 приведены данные цитолитической активности тромбоцитов больного раком легкого против клеток АКЛ (раститровка соотношений эффектор: КМ).

Таким образом, в приведенном примере, во-первых, максимальный уровень цитолиза

КМ (29,8%) отмечен при соотношении эффектор КМ, равном 50:1. Это соотношение признано оптимальным и используется во всех дальнейших экспериментах; во-вторых, уровень цитолиза превышает дискриминационную величину на 19,8%. Это позволяет диагностировать рак легкого у данного больного, что было впоследствии подтверждено при морфологическом исследовании биоптата из опухоли.

В табл. 2 дано сравнение цитотоксичности тромбоцитов периферической крови больных раком легкого и обследованных контрольной группы против клеток АКЛ.

В результате проведенных исследований установлено, что метод определения цитотоксичности тромбоцитов периферической крови обследуемых против клеток АКЛ технически более прост в выполнении, не требует сложной и дорогостоящей аппаратуры для бронхологического исследования и бронхоальвеолярного лаважа, Исследование цитотоксической активности тромбоцитов в качестве диагностического теста нри раке легкого составляет новизну изобретения.

Способ диагностики рака легких путем радиоизотопного исследования в биологических жидкостях, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения точности способа, исследование проводят с тромбоцитами крови, добавляют их к меченым клеткам перерываемой линии аденокарциномы легкого в соотношении (25 — 75):I, инкубируют, определяют процент лизированных клеток и при значении этого показателя больше или равном 10070 диагностируют рак легкого.

29 8 18 9 3 4 2 -3 6 -1 3

1509040

Т а б л и ц а 2

Цитотоксическая активность тромбоцитов, %

Обследуемые

Число об- Достоверследован- ность ных

Больные раком легкого

23,2 8,9

19 рс0,001

Еонтрольная гРуппа

4,3+2,7

Составитель В. Зотов

Редактор Л. Козориз Текред И. Верее Корректор (. Черни

За каз 555914 Тираж 643 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб.. д. 4, 5

Производственно-издательский комбинат «Патент», г. Ужгород, ул. Гагарина. 10!