Способ определения нервных клеток

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в нейроанатомии и гистологии. Целью изобретения является улучшение способа определения нервных клеток, меченных пероксидазой и флюохромом, путем повышения устойчивости окраски к действию ультрафиолетовых лучей. Способ заключается в определении нервных клеток, меченных пероксидазой, путем выявления их окраской 0,02%-ным раствором ортофенилендиамина с добавлением 0,01-0,03%-ного раствора перекиси водорода с последующей холодной промывкой при 2-4°С в ацетатном буфере при PH 4,0 и оценкой результатов при микроскопии как в видимом, так и в люминесцентном свете.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

1519655

А1 й0 4 Л 61 В 10/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К А BTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4227960/28-14 (22) 13.04.87 (46) 07.11.89. Бюл. ¹ 41 (71) Ставропольский государственный медицинский институт (72) В. С. Никольский (53) 615.475 (088.8) (56) The Journal оl Histochemistr, 1978, 26, № 2, р. 106 117. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕРВНЫХ КЛЕТОК (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано в нейроанатомии

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в нейроанатомии и ги столог ии.

Цель изобретения улучшение способа определения нервных клеток, меченных пероксидазой.

Пример. Крыса № 214. Под нембутааoвым наркозом (40 мг/кг) стереотыксически в

ХВОстатое ядро вводили 50%-ную пероксидазу хрена с RZ 2,4 в количестве 0,5 мкл на

2%-ном ВОднОм расТВоре лим(.Тилс«льфоксида. В контрлатеральное ядро вводили 3 мкл

10%-ного раствора примулина на 2Р/р-ном водном растворе ли метилсул ьфоксида. Рану ушивали наглухо. Через 2 сут после инъекции под нембулатовым наркозом (50 мг/Kf) крысу внутрисердеч Но перфузировали 2Р/р ным раствором хлористого натрия с добавлением сосудисторасширяю(цих средств и гепарина. Далее животное перфузировали холодным фиксатором (3,5% параформа, 0,25% глютаральлегида, 5% са«арозы на фосфатном буфере с рН 7,2). Голову животного обкладывали льдом. Промывали 10%ным раствором сахарозы. Извлекали голов2 и гtt(тологии. Целью и <обр»т»<(ия явля»тся

«ë«÷ø»HHå способа опре.(ел»ния нервны« клеток, меченных п»роксилызой и флюо«ромом, путем повышения устойчивости Окра. ки к действи(о ультрафиол»товы«лучей. Сll()соб заключается в Опред»л<. нии í pBHIIx кл»ток. Меченны«пероксидызой, путем выявл(ния и«окраской 0,02Р/р-ным раствором ()ртофенилендиамины с лобывлени»м 0,0!в

0,03Р,р-ного растворы переhlt»и волорола с последующей х()лодной проч ывкой при 2

4 C в ацетатном буфер» при рН 4,0 и <)«»«кой результатов при м)(кроскопии как и видимом, тык и люминесц»нтном св»т».

Holt мОзг. P»3a. lit на з() моры ж )< в«) к) п(< м Nl H hротоме на срезы толщиной 40 мкм, которые

«рани IH в холодильник» н 30Р р-н()м раствор» сахарозы на фосфатном буф»р». Гlерел окраской срезы переносили в фосфагный f)«ф«р без са«арозы с рН 72 при 20 С на 30 vlHH, через каждые 10 мин меняя раствор. П<гсле

ыт()го срезы перенесли в 0,02,,)-ный раствор ортоф»нилендиамина ны ыц»тытном A)«ф»р» с рН 4,0. гле срезы Hàxoëuëu»ü н т«мнот» при 18 С в течение 20 мип лля прон итки Далее в раствор ортофенил»нлиымина лобывили 0,01%-ный раствор n(рекиси водороды, TILIaTåëüHo распределяя его ll() вс»му объему красителя, и оставили в темнот«на 20 мин.

Г1осле окончания окраски реакцик) o»Tынавливали путем трехкратной промывки срезов по 5 с в ледяном ацетатном б«<р»р» с pll 4,0.

Затем срезы монтировали в 0,1, р-ном растворе желатина на предметны» стекла. Срезы ставили на ночь в хололпльник лзя сушки.

Чср»з !8 ч высушенны» ср< зы На пр(лм»тHûx стеклах обезв<)живали посл» E()BEET(льn() в 96 абсолютно«) спирте, просветляли 5 мин в толуолс и заключали в ЭПОН 812. Ср»зы

1519655

Фор,иуда изобретения

С> ст(>вите.и, .А. Чирков

Ре,(иктор Е Iаип Т хр И. В р Корректор О. Кравцова

3ак;>.> 6>6 >6 т Тираж 643 Гlоднисн»е

ВНИГ1П11 Государственного комитета цо изобретениям и открытиям нри I КНТ СССР ! 1 3035, Москва, Ж- -35, Раушская наб., д. 4 5

Ilроиаводственно-изд»г>дьский комбинат «Г1атент», г. Ужгород, уд. Гагарина, I 0 I пр(гома грпвали на люминесцентном микроск(н(е с фильтром пропускания 470 — 1050 нм для выявления нейтронов, содержа(цие перокспдазх с фильтром пропускания 302—

460 нм для выявления свечения примулина. (.(игсоб определения нервных клеток путе м м;(рки ронни нейронов пероксидазной меткой с последующим анализом в ультрафиолетовом свете, отличающийся тем, что, с целью повышения устойчивости пероксидазной метки к ультрафиолетовому облучению, гистологические срезы окрашивают 0,02 /оным раствором ортофенилендиамина с добавлением перекиси водорода при 18 — 20 С в течение 20 — 45 мин с трехкратной промывкой срезов в растворе ацетатного буфера при рН 4,0 и температурой 2 — 4 С.