Способ подготовки проб для количественного определения лекарственных средств группы первичных ароматических аминов в ткани печени

 

Изобретение относится к токсикологической химии и может быть использовано при проведении химико-токсикологических и судебно-химических исследований. Цель - упрощение и повышение чувствительности определения лекарственных средств группы первичных ароматических аминов в печени. Для этого измельченную печень трехкратно обрабатывают раствором хлорной кислоты в концентрации 1-4 н., вытяжки объединяют и определяют содержание исследуемых препаратов фотоэлектроколориметрическим методом.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (1) 4 g P) !! 33/50

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АBTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ П(НТ СССР (21 ) 4395469/28-14 (22) 21.03.88 (46) 15.12.89. Бюл. У 46 (71) Курский государственный медицинский институт (72) А.С. Квач, С.В. Плехов, М,В. 11!евцова, И.В. Вишневский, Н,А. Вощина и В.Я. Александрова (53) 612 ° 015 (088.8) (56) Крамаренко В.Ф. Химико-токсикологический анализ. Киев: Вища школа, 1982, с. 115-121, Изобретение относится к токсикологической химии и может бить использовано при проведении химико-токсикологических и судебно-химических ис-. следований, Целью изобретения является упрощение и повышение чувствительности определения.

Поставленная цель достигается использованием трехкратного настаивания объекта исследования хлорной кислотой в концентрации 1-4 н,, с последующим объединением вытяжек первичных ароматических аминов.

Способ осуществляется следующим образом.

Мелкоизмельченная ткань печени, содержащая исследуемый препарат груп„„SU„„1529118 А 1

2 (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРОБ ДЛЯ

КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТBFHH1-!Х СРЕДСТВ ГРУПГП! ПЕРВИЧН1!Х АРОМАТИЧЕСКИХ AMHHOB В ТКАНИ ПЕЧЕНИ (57) Изобретение относится к токсикологической химии и может быть использовано при проведении химико-токсикологических и судебно-химических исследований. Цель — упрощение и повышен ие чувствительности определения лекарственных средств группы первичных ароматичpских аминов в печени.

Для этого измельченную печень трехкратно обрабатывают раствором хлорной кислоты в концентрации 1-4 н., вытяжки объединяют и определяют со-, держание исследуемых препаратов фотоэлектроколориметрическим методом. пы первичных ароматических аминов, помещают в химический стакан и заливают раствором хлорной кислоты в концентрации 1,0-4,0 н.до полного покрытия твердых частиц объекта и настаивают

2 ч при комнатной температуре, периодически перемешивая содержимое стакана. По истечении указанного срока кислотную вытяжку сливают. Операцию настаивания повторяют дважды, применяя настаивание в течение соответственно 2 и 1 ч. Объединяют полученные вытяжки и измеряют объем полученного извлечения. Осажденные в процессе изолирования хлорной кислотой белки отделяют центрифугированием небольной части вытяжки (8-10 мл)!, Аликвотную часть полученной депроте1529118 инизированной вытяжки используют для определения в ней исследуемых препаратов группы первичных ароматических аминов.

Пример. Свежую печень трупа человека, погибшего в результате травмы, мелко измельчают и по 25 r помещают в химические стаканы. В стаканы прибавляют по 10 мл раствора соответствующего соединения с концентрацией 100 мкг/мл, оставляют на сутки при комнатной температуре периодически помешивая. Параллельно проводят холостые опыты. По истечении 24 ч изолируют исследуемые вещества и подготавливают пробу к анализу описанным способом.

Количественное определение содержания исследуемых препаратов в 20 пробе проводят фотоколориметрическим методом, основанным на реакции взаимодействия диазотированных препаратов с 3-Ы, (-дикарбоксипропилрода— нином. 25

Расчет содержания анализируемых веществ в исследуемых растворах производят по соответствующим калибровочным графикам.

При построении калибровочных графиков в мерные колбы на 25 мл вносят по 0,01; 0,05; О,1; 0,2; 0,3;

0,4 мл стандартного раствора препарата в 1,0 н. соляной кислоте (при проведении исследования на новокаин и новокаинамид в дистиллированной воде ) с концентрацией 100 мкг/мл, после чего в колбы вносят недостающее до 1 мл количество 1 н. соляной кислоты и по 1 мл 0,1% †но родного раствора нитрита натрия.

Через 15 с в колбы добавляют по 1 мл

0,1 -ного спиртового раствора З-о, (-дикарбоксипропилроданина, После тщательного перемешивания общий

45 объем жидкости в колбе доводят до метки смесью 0,05 М раствора тетрабората натрия и 0,1 н. раствора гидроксида натрия (1:2). После перемешивания содержимоro колб производят измерение оптической плотности окрашенных растворов азороданинов с использованием фотоэлектроколориметра

КФК"2 в кювете с толщиной рабочего слоя 50 мм при светофильтре с длиной

aozmt9 490 -50 нм, Светопоглощение окрашенных растворов во всех случаях подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера в пределах концентраций 1-40 мкг препарата в 25 мл конечного объема. В качестве раствора сравнения используют смесь всех перечисленных реактивов.

В таблице приведены препараты группы первичных ароматических аминов в печени человека при обработке ее хлорной кислотой разных концентраций, Таким образом, применение предлагаемого способа за счет использования в качестве изолирующей жидкости хлорной кислоты в концентрации 14 н., исключения процессов экстракции органическими неполярными растворителями, исключения необходимости центрифугировать большие объемы жидкостей, исключения необходимости проведения фильтрования вытяжек позволяет существенно повысить эффектив-. ность изолирования препаратов группы первичных ароматических аминов из тканей биологического происхождения с 0,18-8,50% до 64,26-91,53, что повышает чувствительность определения и позволяет проводить определение минимальных количеств препаратов данной группы в биологических тканях, сократить трудоемкость проведения анализа, уменьшив количество существенных операций с 10 до 5.

Ф о р м у л а и з обретения

Способ подготовки проб для количественного определения лекарственных средств группы первичных ароматических аминов в ткани печени путем измельчения, обработки раствором кислоты, отделения кислотной вытяжки с дальнейшим определением, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью упрощения и повышения чувствительности определения, измельченную ткань трехкратно обрабатывают 1-4 н. раствором хлорной кислоты и вытяжки объединяют.

1529118

Концентрация хлорной кислоты (н, ).

1 Г (Препарат

0,02 0 5 1,0 2,0 4,0

Степень изолирования, Х

86,49

86,18

34,96

56,54

73,15

76,56

91,53

91,14

88,44

90,23

Составитель Н. Литвиненко

Редактор Т. Парфенова Техред М,яндык Корректор Н. КоРоль

Заказ 7634/39 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðîë, ул . Гагарина, 1О1

Стрептоцид

Новокаинамид

Сульфамонометоксин

Сульфалвн

Этазол

Анестезии

Новокаин

67,27

53,93

35,98

48,01

53,71

69,90

55,43

59,08

66,81 ".

60, 51

88,40

64,26

75,87

81,72

72,94

90,88

73,59

75,99

86,09

78,96

90,60

75,22

84,53

90,08

86,00