Способ определения чувствительности гонококков к антибиотику

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при лечении гонореи. Цель изобретения - ускорение способа. От больного гонореей выделяют культуру гонококков и высеивают на плотную среду. Параллельно отбирают пробы крови через 1 ч после введения антибиотика, отделяют сыворотку и готовят ряд разведений с помощью плазмола. Приготовленные разведения сыворотки добавляют к посевам гонококка и инкубируют в течение 5 - 6 ч. После инкубации посевы микроскопируют и при отсутствии роста культуры с определенным разведением сыворотки, содержащей соответствующее количество антибиотика, определяют минимальную подавляющую концентрацию антибиотика и соответственно - бактерицидную активность сыворотки крови. Из получаемых результатов делают вывод об эффективности использованного для лечения антибиотика.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) Sl)5 С 12 (2 1/04 //(С 12 g 1/04, С 12 R I:36) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ размещенные на стерильном предметном стекле. Блоки готовят иэ пластагара. ,После посева микроорганизмов блоки покрывают покровным стеклом.

Параллельно у больных отбирают пробы крови через 60 мин после внут- римышечного или перорального введения одного вида антибиотика.

В подготовленные описанным способом несколько камер пастеровской пипеткой с тонким капилляром вводят методом серийных разведений сыворотку крови больного, содержащую антибиотик и плазмол. Разведение сыворотки крови в первой камере ряда составляет 1:? (0,5 мл плазмола + 0,5 мл сыворотки больного). Число разведеГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЬГИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4486733/31-13 (22) 05 10.88 (46) 23.05.90 Бюл 11 19 (71) Киевский медицинский институт им. акад. А.А. Богомольца, (72) В. Г. Коляденко, В. И. Степаненко, В.Ф.Майданюк, В. Г. Войцеховский и Л.В.Авдеева (53) 576.8 . 093 .1 (088 .8) (56) Овчинников Н.М. и др. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем. — M.: Медицина, 1987 ° c. 30--40. (54) СПОСОБ. ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ГОНОКОККОВ К АНТИБИОТИКУ (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано.при лечении. гонореи. Цель изобретения ускорение способа. От больного гоноИзобретение относится к медицине и может быть использовано при лечении гонореи.

Цель изобретения — ускорение способа °

Способ осуществляют следующим образом.

Исследуемый материал высевают на мясопептонный или кровяной агар.

Полученную чистую культуру суспензируют в физиологическом растворе до концентрации 10 ед. по оптическому стандарту мутности.

Тонким капилляром пастеровской пипетки засевают суспензию аутокуль" туры (О, 15 — 0,25 мм) на квадратные блоки плотной питательной среды, 2 реей выделяют культуру гонококков и высевают на плотную питательную среду. Параллельно отбирают пробы крови через 1 ч после введения антибиотика, отделяют сыворотку и готовят ряд разведений с помощью плазмола. Приготовленные разведения сыворотки добавляют к посевам гонококка и инкубируют в течение 5 - 6 ч. После инкубации посевы микроскопируют и при отсутствии роста культуры с определенным разведением сыворотки, содержащей соответствующее количество антибиотика, определяют минимальную подавляющую концентрацию антибиотика и соответственно бактерицидную активность сыворотки крови. Из получаемых результатов делают вывод об эФФективности использованного для лечения антибиотика °

3 156 ний в ряду определяется фармакокинетическими особенностями антибиотика:

4,8 16,32 и так далее (для аминогликозидов максимальное разведение сы" воротки составляет 1:128). Контрольные камеры содержат питательную среду, в состав которой входят человеческая сыворотка и биогенный стимулятор плазмол в равных обьемных со" отношениях. Камеры в чашках Петри по.! мещают в термостат и культивируют при 37 С. Через 5 - 6 ч камеры вынимают из термостата и благодаря их прозрачности определяют рост гоно кокков в фазовоконтрастном микроско пе. В контрольной камере за это вре мя вырастают микроколонии гонококков., В опытных камерах роста возбудите лей не будет в том случае, если в ,,соответствующих разведениях сыворот: ки крови больного содержится достаточное для ингибации роста количест во антибактериального препарата.

,Наибольшее разведение сыворотки больного, вызывающее задержку роста, является антибактериальным тестом сыворотки (АТС).

При определении антибактериальной активности сыворотки (ААС) у больных

,установлено, что значения титра колеблются от 1:2 до I:128. В результате определения чувствительности к назначаемым антибиотикам оказалось,,что наиболее высокие значения титра сыворотки (1:32 - 1:512) соответствуют чувствительным штаммам. При

,выделении штаммов возбудителей, сред; нечувствительных к вводимому антибиотику, величина титра составляет . 1:4 - 1:16. В случае выделения устойчивых штаммов AAC низкая (1:2) или не выявляется совсем.

Проведенные исследования показывают совпадение показателей AAC c клинической эффективностью проводимой антибиотикотерапии. При ААС, оцениваемой величиной титра 1:2, положительная динамика течения инфекции при начатом лечении пенициллином не выявлена ни у одного из 16 больных различными клиническими формами гонорейной инфекции (свежий острый, свежий подострый, свежий торпидный и хронический гонорейный уретрит).

Не продолжая дальнейшего лечения пенициллином, так как оно было бы неэффективным, этим больным проведена замена пенициллина на другие антибиотики - аминогликозиды широкого антибактериального спектра действия (канамицин, мономицин„гентамицин), к которым отмечена высокая чувствительность выделенных аутоштаммов гонококков.

Пример 1. Больной Т., 32 года, поступил в кожно-венерологическое отделение больницы с диагнозом: свежий торпидный гонорейный уретрит.

При поступлении в стационар больного проведен посев отделяемого из уретры на общепринятые питательные средымясопептонный агар и кровяной агарс целью выделения колоний аутоштамма гонококка. Через 1 сут после клинического и топического обследований пациенту назначено лечение согласно общепринятой схемы лечения. В качестве антибиотика назначен пенициллин, Через 1 ч после первой, инъекции пенициллина (ударная доза 600 тыс.Ell) у больного берут кровь из локтевой вены и центрифугируют. Сыворотку крови, содержащую антибиотик, и заранее приготовленный плазмол пастеровской пипеткой вводят в камеры из пластагара, покрытые предметными стеклами, в которые предварительно засеян суспензированный в физиологическом растворе до концентрации 10 ЕД по оптическому стандарту мутности аутоштамм суточной культуры гонококка больного. Разведение сыворотки крови в первой камере ряда составляет

1:2 (0,5 мл сыворотки больного и

0,5 мл плазмола). Число разведений сыворотки в ряду от 1:2 до 1:128.

Контрольные камеры содержат аутоштамм гонококка и питательную среду из человеческой сыворотки (без антибиотиков) и биостимулятор плазмол в равных объемных соотношениях (1:1).

Все микрокамеры в чашках Петри помещают в термостат и культивируют при

37дС. Через 6 ч камеры вынимают из термостата и исследуют под микроскопом наличие роста микроколоний гонококков во всех разведениях ряда и контроле. При бактериоскопии выявлен рост микроколоний аутоштамма гонококка в контроле, а также во всех разведениях исследуемой сыворотки с антибиотиком пенициллином от 1:128 до

1:2 включительно. Полученные результаты служат основанием для прекращения дальнейшего лечения данного больного пенициллином. Больному наз65892 6 ном данному больному и замены его антибиотиком - гентамицином, чувствительность к которому этого ауто5 штамма гонококка была довольно высокой. Проведенное лечение канамицином позволило добиться полного клинического и этиологического излечения больного.

Способ может быть использован для определения чувствительности к антибиотикам различных микроорганизмов как в процессе лечения, так v для определения минимальной подавляющей концентрации антибиотика методом двукратных разведений в соответствующей питательной среде.

Использование способа позволяет ускорить отбор эффективного антибио20 тика с учетом индивидуальных особенностей больного. Кроме того, способ обладает большой информативностью, так как позволяет наблюдать культуру возбудителя инфекции в микроскопе.

25 Определение чувствительности микропопуляций возбудителей гонореи к антибиотикам позволяет оценивать их гетерогенность по данному свойству, определять количество толерантных к антибиотику особей, характеризовать изменение морфологических и некоторых других свойств изучаемых микроорганизмов.

15 начен антибиотик канамицин, чувстви", тельность к которому гонококков очень высокая (в максимальном разведении 1 64). Результат - полное клиническое и этиологическое излечение больного.

Пример 2. Больной В., 24 года, поступил в кожно-венерологическое отделение больницы с диагнозом: хронический гонорейный уретрит. Из анамнеза установлено, что длительность заболевания составляет 5 мес.

Ранее больной проходил курс лечения антибиотиком. После курса лечения в контрольном бакпосеве обнаружены гонококки. Таким образом, предшествую-. щее лечение было неэффективным, что явилось причиной рецидива инфекции.

При поступлении. больного в стационар проведен бактериологической посев из уретры на питательную среду и через

24 ч в посеве выявлены колонии аутоштамма возбудителя. Пациенту назначено лечение согласно общепринятой схеме. Через 1 ч после первой иньекции пенициллина у больного берут кровь из вены и центрифугируют. К сыворотке крови с антибиотиком добавляют плазмол, после чего смесь пастеровской пипеткой вводят в камеры из пластагара, покрытые предметными стеклами. В камеры предварительно засевают суспензированный в Физиологическом растворе до концентрации

10 ЕД по оптическому стандарту мутности аутоштамм суточной культуры гонококка, выделенный от больного.

Число разведений сыворотки в ряду от 1:2 до 1:128, Опытные и контроль" ные микрокамеры в чашках Петри помещают в термостат и культивируют при

37 С. Через 5 ч камеры вынимают из термостата и проводят бактериоскопическое исследование на наличие роста микроколоний гонококков. Результаты исследований показывают наличие роста микроколоний гонококков в контроле и в -„азведении ряда, начиная с 1:4 и выше. Результаты исследований явились основанием для отмены антибактериальной терапии пенициллиФормула изобретения

Способ определения чувствительности гонококков к антибиотику в процессе антибиотикотерапии больного гонорейной инфекцией путем выделения аутокультуры гонококков, инкубирова" ния последней на плотной питательной среде в присутствии антибиотика и определения чувствительности гонокок45 ков к антибиотику по наличию или отсутствию роста, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения способа, инкубирование проводят в течение 5 - 6 ч в присутствии сыворотки крови больного, содержащей антибиотик, использованный для лечения, . разведенной плазмолом.