Питательная среда для культивирования бактерий рsеudомоnаs fluorescens вкпм-в-4097-продуцента внеклеточного эмульгатора
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и представляет собой новую питательную среду для синтеза с помощью PSEUDOMONAS FLUORESCENS ВКПМ-В-4097 поверхностно-активного вещества-эмульгатора. Цель изобретения - увеличение выхода и активности эмульгатора. Эмульгатор получают на оптимизированной питательной среде, содержащей в качестве источника углерода углеводород или нефть. Выход влажного эмульгатора 46,0 г/л. Эмульгирующая активность продукта определяется по высоте образовавшейся эмульсии и составляет в течение пяти минут 9 см, а в течение суток - 7,5 см.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
Ю.Н ИЮЛЯ
РЕСПУБЛИК (19) (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ фФ ф : ф д р
4iйЦа ф . г NAPCTBEHHblA КОМИТЕТ
ПО ИЗОЬРЕТЕНИЯМ Ы ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21) 4488906/31-13 (22) 28.07.88 (46) 23.05;90. Бюл. N - 19 (71) Институт биохимии им. А.Н.Баха (72) В;И.Маслова, М.М.Якимов и А.М.Безбородов (53) 576.8:661.185 (088 ° 8) (56) Авторское свидетельство СССР
Р 1472496, кл. С 12 N t/20. 1987. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ. СРЕДА ДЛЯ, КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАКТЕРИИ РБЕ1!ВОМОИА$ ИДОВЕ, SCENS ВКПМ В-4097 — ПРОДУЦЕНТА ВНЕ КЛЕТОЧНОГО ЭМУЛЬГАТОРА (57) Изобретение относится к микроI биологии и биотехнологии и представс
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии, а именно к питательной среде для культивирования бактерий Ps fluorescens — продуцента внеклеточного эмульгатора.
Цель изобретения — увеличение выхода и активности эмульгатора.
Сущность изобретения заключается в оптимизации питательной среды для получения нерастворимого эмульгатора с максимальным выходом в результате культивирования бактерий Pseudomonas
fluorescens ВКПМ В-4097.
Предлагаемые интервалы концентраций компонентов питательной среды являются оптимальными, так как при меньших концентрациях уменьшаются
Г51)5 С 12 N 1/20, С 12 Р 1/04 // (С 12 N 1/20, С 12 К 1:39) 2 ляет собой новую питательную среду для синтеза с помощью Pseudomonas
fluorescens ВКПМ В-4097 поверхностноактивного вещества-эмульгатора. Цель изобретечия — увеличение выхода и активности эмульгатора. Эмульгатор получают на оптимизированной питательной среде, содержащей в качестве источника углерода углеводород или нефть. Выход влажного эмульгатора
46,0 г/л. Эмульгирующая активность продукта определяется по высоте образовавшейся эмульсии и составляет в течение пяти минут 9 см, а в течение суток — 7,5 см. выход и активность эмульгатора, а увеличение концентраций не приводит к дальнейшему увеличению выхода и активности эмульгатора, но увеличивает стоимостт среды и может привести к выпадению некоторых солей.
Пример 1 (питательная среда содержит минимальное количество компонентов минеральной среды).
Бактерии Ps.fluorescens ВКПМ
В-4097 выращивают на минеральной среде, содержащей в качестве источника углерода гексадекан. Состав среды, -/л: К.НРО,. 4,2; К!!2РОФ 3,2;
%! ) 80 О 5 ° М! $0, 0 05; СаС)
0,006, МпС1 g О, ООО5 „FeSO 7Н О
0,0002; а.,!!о0, Н 0 О, 0004, 1565885
4 и БО, "5Н О О, 0001; . Н ВО 0 ° 0002, пБО 0,0005 в дистиллированной воде. одержание гексадекана 10 г/л, Н 7 ° 2.
Стерилизацию минеральной среды осуществляют при 0,5 атм 30 мин.
Вносят в среду инокулят (10X) взятый в экспоненциальной фазе роста к гльтуры. !О
Культивирование проводят s аэробP условиях при 28 С:в колбах по
250 мл на качалке, дающей 220 об/мин. ерез 24.ч эмульгатор отделяют от эмульсионного слоя культуральной кости центрифугированием ( (4500 об/мин) при 0 С .в течение ,25 мин. Выход влажного эмульгатора, считают по весу„ который составляет 18,2 г/л. 20
Активность эмульгатора определяют по его способности эмульгировать и-алканы и Локбатанскую нефть (со держит, главным образом, нафтены).
Активность эмульгатора образовы вать эмульсию определяют следующим, образом. В пробирку с,делениями на 25 мл вносят 5 мл 0,2 N трис-НС1, ðÍ 8,0, содержащего 0,1 М8$0 7Н О, ,добавляют 5 мл- смеси алканов (С,, 2,0, 30
С,, 2,0, С 4,0, С ? 2,0) или нефт ь
1 и 100 мг эмульгатора. Смесь интенсивно перемешивают с помощью миксера в течение 30 с.
Эмульгирукщую активность определяют периодическим измерением высоты
;столба образовавшейся эмульсии и выражают в сантиметрах. Она составляла через 5 мин 7 см, через 30 мин
6,5 см, через сутки 5 см. .Пример 2. Питательная среда содержит оптимальное количество компонентов.
Используют среду следующего состава, г/л: К ПРО„4,3; КН Р04 3,4; 45 (NH<) 0,013; ИпС1 0,001, FeSOg 7Н О, 0,0024, Ма Мо04 2Н О 0,002, CuSO « «5H O 0,00015; НзВО 0,00033, ZnSO < 0,0015 в дистиллированной воде. Содержание гексадекана 10 г/л,, рН 7,2. Культивирование и выделение эмульгатора, как в примере 1. Выход 46,0 г/л, активность змульгатора через 5 мин 9 см, через сутки 7,5 см. Пример 3. Питательная среда содержит максимальное количество компонентов. Используют среду следующего состава, г/л: К НР01 4,4, КН РО4 3,5; (NH+) SO 3,5; ?18SO< 0,5; СаС1 0,052; ИпС1g 0,015, FeSOg 7H O 0,0028, ? !а ?1оо . 2Н 0 0,003; CuSO i «5Н О О, 00025, Нз ВОз 0,00045, ZnSO< 0,0025 в дистиллированной воде, нефть 20, рН 7,2. Выход 34,2 г/л, активность эмульгатора через 5 мин 8,6 см, через сутки 7,0 см. Таким образом, предлагаемая питательная среда с использованием в качестве субстрата гексадекана позволяет увеличить выход эмульгатора и активность по сравнению с известной средой в 3 и 1,5 раза соответственно. Формула изобретения Питательная среда для культивирования бактерий Pseudomonas fluorescens ВКПИ В-4097 — продуцента внеклеточного эмульгатора, содержащая углеводороды в качестве источника углерода, ИВБО, К ПРО, (NH+) S04 КН РО, СаС1, ?4пС1, ГеБО+ 7Н О, Na Èo0 2Н 0, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что„ с целью увеличения выхода и активности эмульгатора, она дополнительно содержит CuSO 5Н О, Н ВО,, ZnSO при следующем соотношении компонентов, г/л: углеводороды 10,0-20,0 К,НРО, 4, 2-4,4 КН РО 3,2-3,5 (ИН „) БО 0,5-3,5 ИВБО, 0,05-0,5 СаС1 0,006-0,052 и С1 О, 0005-0, 015 РеБО 71! ?О 0,0002-0,0028 Иа Моо 21! О 0,0004-0,003 CuSO 511 0 0,000 1-0,00025 3 3 0,0002-0,00045 ZnSO 0,0005-0,0025 Дистиллированная вода Ос тая ьное
