Способ культивирования лейкоцитов свиньи

 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к культивированию клеток животных, необходимых для производства вирусных вакцин, моноклональных антител, биологически активных веществ, проведения диагностических исследований. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. Способ включает засев суспензии лейкоцитов свиньи на питательную среду с добавлением 15% сыворотки крупного рогатого скота и последующим инкубированием культур до образования монослоя, причем в культивируемую среду добавляют 20-250 мг/л фитогормонов, например индолилуксусную или гибберелловую кислоту. Выход лейкоцитов увеличивается в 6-8 раз по сравнению с прототипом.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (191 (И) 2 А1 (51)5 С 12 N 5/00

- 2ЕЫ ;, «%(ТЕНТ1 - ТГ

БИЬЛ116

1.. Я3 j л

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPbfl ÈßM

ПРИ ГКНТ СССР

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (2 1) 4420223/30-13 (22) 03.05.88 (46) 07.07.90. Бюл. Р 25 (75) И.И.Гаврилюк (53) 578.085.23(088,8) (56) Справочник ветеринарного лаборанта/Под ред. В.Я.Антонова. — M.:

Колос, 1981, с. 99. (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ СВИНЬИ (57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно к культивированию клеток животных, необходимых для производства вирусных вакцин, моноклоИзобретение относится к биотехнологии и имеет отношение к культивированию клеток. животных, необходимых для производства вирусных вакцин, моноклональных антител, биологически активных веществ, проведения диагностических исследований.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.

Пример 1. Во флаконы с питательной средой Р 199 и 157 сыворотки крупного рогатого скота (КРС) после добавления антибиотиков иэ расчета пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин

100 мг/л пипеткой стерильно вносят индолилуксусную или гибберелловую кислоту 20 мг/л. Клетки лейкоцитов подсвинков в возрасте 3 мес суспен- . дируют в приготовленной таким образом среде, доводя их концентрацию до 3 млн кл/мл. 1 мл суспензии клеток пипеткой при соблюдении условий асеп.2 нальных антител, биологически активных веществ, проведения диагностических исследований. Цель иэобретения— повышение выхода целевого продукта.

Способ включает засев суспензии лейкоцитов свиньи на питательную среду с добавлением 15Х сыворотки крупного рогатого скота и последующим инкубированием культур до образования монослоя, причем в культивируемую среду добавляют 20-250 мг/л фитогормонов, например индолилуксусную или гибберелловую кислоту. Выход лейкоцитов увеличивается в 6-8 раз по сравнению с прототипом. тики вносят в бактериологические пробирки, Пробирки укладывают в штатив

P под углом 30-40 и помещают в термостат при 37 С. Через 3 сут культивирования формируется монослой клеток . типичной морфологии. Численность клеток определяют в камере Горяева.

Количество клеток лейкоцитов при использовании питательной среды с

20 мг/мл индолилуксусной илн гибберелловой кислоты составляет соответственно 4,81-5,10 10 и 5,15-5,71 х х 10 кл/мл, в то время как в контроле 3,50-4, 10 10 кл/мл (при посевной дозе клеток 3,0-3,5 млн кл/мл).

Пример 2. Во флаконы со сре- . дой Р 199 и 15Х сыворотки KPC после добавления антибиотиков из расчета пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин

100 мкг/мл пипеткой вносят индолилуксусную или гибберелловую кислоту

150 мг/л. Клетки лейкоцитов подсвин1576562

Формула изобретения

Способ культивирования лейкоцитов свиньи, включающий засев клеточной суспензии на питательную среду с добавлением сыворотки крупного рогатого скота и последующим инкубированием культур до формирования монослоя, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в культивируемую среду добавляют индолилуксусную или гибберелловую кислоту в концентрации 20- .

250 мг/л среды..

Составитель АЛаныкин

Редактор Н.Рогулич Техред Л.Сердюкова

Корректор

А.Обручар

r Г

° «й 4 «»

Заказ 1830 Тираж 484 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 ков в возрасте 3 мес суспендируют в приготовленной таким образом среде, доведя их концентрациюдо 3млн кл/мл.

По 1 мл суспензии клеток пипет5 кой при соблюдении условий асептики вносят в бактериологические про.бирки. Пробирки укладывают в штатив под углом 30-40 и помещают в термостат при 37 С. Через 3 сут культивирования формируется монослой клеток типичной морфологии. Численность клеток определяют в камере. Горяева.

Количество клеток лейкоцитов при использовании питательной среды с индолилуксусной или гибберелловой кислотой составляет соответственно

27,00 — 28,15.10 и 20,05 - 21,10х

«10 по сравнению с контролем 3,504,10 ° 10 кл/мл (при посевной дозе клеток 3-3,5 млн кл/мл).

Пример 3. Опыт проводят в соответствии с примерами 1 и 2, но в питательную среду вносят 250 мг/л индолилук;сусной или гибберелловой кислоты. В этих условиях количество клеток лей коцитов при использовании питательной среды с индолилуксусной или гибберелловой кислотой составляет соответственно 5,33-5 41.10 и

6 10 6 34- 10 кл/мл по сравнению контролем 3,50-4,10 "10 кл/мл (при посевной дозе клеток 3-3,5 млн кл/мл) .

Способ позволяет значительно повысить стимуляцию роста клеток лейкоцитов свиньи на питательной среде с применением фитогормонов. Количество клеток культуры при добавлении фитогормонов увеличивается в 6-8 раз.

Стимулирование роста клеток некоторых очень важных клеток животного организма может быть использовано также в диагностических исследованиях.