Способ получения препарата вакционного штамма вируса табачной мозаики

 

Изобретение относится к способам производства в научных и практических целях. В частности способ относится к производству препаратов вакуумных штаммов вируса табачной мозаики (ВТМ), которые предназначены для защиты растений от патогенных штаммов данного вируса. Целью изобретения является повышение выхода конечного продукта. Способ включает последовательное заражение штаммов вируса табачной мозаики V-69 растений табака - гибрида селекции М.Ф.Терновского NICOTIANA TABACUM X NIGLUTINOSA и томата, выращивание их, отбор бессимптомных растений, получение из них сока с последующим выделением и очисткой путем осаждения сернокислым аммонием с последующим нанесением осадка на бумажный фильтр и вымыванием вируса водой. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4317002/30-13 (22) 30 ° 07.87 (46) 30;07.90. Бюл. К 28 (71) Институт общей генетики им. Н.И.Вавилова АН СССР (72) Э.Н.Андреева, Н.Г.Вострова, Л.И.Иэвекова, Т.C,Ïoäúÿïoëüñêàÿ и А.И.Чивилева (53) 576.858(088.8) (56) Якуткина Т .А. Методы получения вакцинных препаратов. Сб. научи. трудов. Биологические методы защиты растений от вирусных и бактериальных заболеваний, ВИЗР, 1986, с ° 11-18.

Mass purification and testing procedures of M-11-16 for use in commercial tomato crops А.Tn.Rast

"Variability of tobacco mosaic virus

in relation to control of tomato

mosaic inalasheruse tomato crops.

Изобретение относится к способам производства вирусов в научных и практических целях, в частности к производству препаратов вакциннь1х штаммов вируса табачной мозаики (ВТМ), которые предназначены для защиты рас тений от патогенных штаммов данного вируса.

Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта.

„„SU„„15 1 2 А1 (51)5.А 01 N 63/00, С 12 N 7/00

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ВАКЦИННОГО ШТАММА ВИРУСА ТАБАЧНОЙ МО-.

ЗАИКИ (57) Изобретение относится к способам производства в научных и практических целях. В частности способ относится к производству препаратов вакуумных штаммов вируса табачной мозаики (ВТМ), которые предназначены для защиты растений от патогенных штаммов данного вируса. Целью изобретения является йовьпиение выхода конечного продукта. Способ включает последовательное заражение штаммов . вируса табачной мозаики V-69 растений табака — гибрида селекции

М.Ф.Терновского Nicotiana tabacum x х Niglutinosa и томата, выращивание их, отбор бессимптомных растений, получение из них сока с последующим выделением и очисткой путем осаждения сернокислым аммонием с последующим нанесением осадка на бумажный, фильтр и вымыванием вируса водой.

3 табл.

Для этого табак сорта Самсун заражают однонекрозными иэолятами исходного препарата вакцинного штамма

V-69 и AT-16.

Однонекрозные изоляты получают по-: й» сле инокуляции отчлененных листьев гибрида селекции М.Ф.Терновского препаратом вакцины в концентрации

0 0005 мкг/мл. Получение единичных некрозов на одном листе гибрида яв1581327 ляется показателем предельной инфек ционности исходного препарата.

Через 3-4 недели с температурой о

20-25 С после накопления вируса в

Э

5 растениях, осторожно отбраковывают растения, проявившие резкие симптомы. Этот этап, являясь этапом накопления вируса для нового препарата вакцины, одновременно используется как биологический контроль исходного препарата, при этом относительное число бессимптомных растений является показателем чистоты исходной партии вакцины и генетической стабильности вакцинйого штамма. Вакцину считают пригодной для использования, если число патогенных изолятов не превышает 0,3% для вируса штамма

V-69 и 1,6% для вируса штамма AT-16.

Листья бессимптомных растений собирают и используют для получения. препарата вакцины.

Выделение вируса в предлагаемом способе осуществляют по упрощенной 25 методике высаливания вируса сернокислым аммонием с использованием бумажных фильтров, Промороженные листья измельчают с помощью бытовой мясорубки, сок отжимают через двойной слой марли.

В сок добавляют сернокислый аммоний. до конечной концентрации 20% и всю смесь наносят на бумажный фильтр в стеклянной воронке для осажгения на нем вируса. Отмывку осадка вируса

35 осуществляют на этом же фильтре

17%-ным раствором сернокислого аммония, а растворение вируса с этого фильтра — водопроводной водой. 4О Растворенный вирус собирают в мерные цилиндры и снова осаждают в

20%-ном растворе сернокислого аммония. Осадок вируса уплотняется при выстаивании, и его концентрируют сли- 45 ванием надосадочной жидкости.

Препарат сохраняют до получения результата биологического контроля, который, в свою очередь, является, этапом накопления следующей партии вакцины.

Иэ 1 кг листовой массы получают

700-800 мг вируса, Препарат в 20%-ном растворе сернокислого аммония ампулируют, сохра-i няют и транспортируют. Хранится пре- ( парат в холодильнике при 2-7 С, при транспортировке допускается хранение

1Вариант

Количество мозаичных растений (% от общего числа зараженных растений) ПатогенПатоген- Патогенные штам ные штам мы 0 мы 1-й группы . группы ные штаммы 2-й группы

100 100

100

Патоген

Ч-69 +

Патоген

14,2

14,6

8,1

Все контрольные растения, зараженные патогенными штаммами, проявили резкие симптомы уже через 10-12 дней после инокуляции. Все незараженные растения остались здоровыми. Растения, зараженные вакцинным штаммом

Ч-69 сохранились бессимптомными.

В опыте вакцинирующий эффект штамма

V-69 проявляется в сдерживании развития мозаичного заболевания отдельных штаммов на 10-84%.

Как видно из данных табл.1 через

1 5 мес. число растений, проявивших резкие симптомы, снижается под действием вакцинного штамма и составляет

8, 1-14, 6%.

В производственных условиях при естественном распространении мозаичного заболевания на посадках томата о при температуре от -5 до +30 С в пределах 1-2 мес. без потери исходной инфекционности.

Пример. В условиях экспериментальной теплицы проводят испытания вакцинирующего эффекта штамма

V-69 против 14 патогенных штаммов

ВТМ, относящихся к трем генетическим группам (для растения томата) по классификации Пэлхэм и различающихся по патогенности. 100 сеянцев томата в фазе семядольных листочков инокулируют вакцинным штаммом V-69, затем спустя 10 дней проводят вторичную суперинокуляцию патогенными штаммами

BTM. Контролями служат 3 группы сеянцев томата: 1 группа — растения, эараженнь1е только вакцинным штаммом;

2 — зараженные каждым иа патогенных штаммов; 3 — здоровые, не зараженные вирусом. В табл. 1 приведены результаты учета числа мозаичных растений через 1,5 мес. после инокуляции растений патогенными штаммами.

Таблица 1

15813.2 7 ния урожая томата.

Табл и на 3

Хозяйство

Плов(аль, га

YpQxllA кгlм Прибавка

ХРОнан

t оиьгг конт- 3

Оныт контРоль

РОЛЬ с/х комбинат

"Иосконский

Киепская овсе(ноя

Фабрика бнльиисскнй тсиличнмй комбинат

2,00 2,00 8,32

6,77

23,0

0,80 0,80 1."., 60 10, 00 2,30 1,00 1?,10 9,80

26 0

23,6

Формула изобретения

Сроки учета Число мозаичных растений в 7 от общего числа растений пыт Контроль

Высадка 0

Через 1 месяц 1,0.

1,5 2,0

2 3

3 10

4 21

Конец оборота 30

100.

100

Составитель И.Тареева

Техред Л.Олийнык Корректор А. Обручар

Редактор И.Сегляник

Заказ 2046 Тираж 452 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГЕНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/ 5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðoä, ул. Гагарина,101 вакцинирующий эффект от обработки (опрыскивания) вакциной определяется при сравнении скорости распространения вредоносных форм BTM на вакцинированных и контрольных посадках.

Вакцинацию растений препаратом, полученным по данному способу, проводят в стадии семядолей, перед пикировкой; высадку рассады -осуществляют через 1 мес. после вакцинации..

В табл. ? приведены результаты учета числа мозаичных растений на вакцинированных и.контрольных посадках томата в производственных испытаниях в весенне-летнем севообороте на площади 2 гектара опыта и 2 гектара контроля (по 50000 растений).

В контроле нарастание числа мозаичных растений идет неуклонно и через 3 мес. посадка полностью поражается мозаичным заболеванием BTM.

В опыте проявление мозаики сильно подавлено, достигая в конце оборота пораженности не более, чем у 307. растений. В случаях проявления — мозаика в опыте выражена значительно мягче, чем в контроле.

Таблица 2

Активное сдерживание вирусного заболевания (число больных растений, острота симптомов) в течение длительного времени (практически в течение всего периода выращивания) создает условия для формирования и сахране20

В табл. 3 отражен эффект вакцины из штамма V-69 на урожайность томатов.

Прибавка урожая создает экономический эффект порядка 10000 руб с гектара при себестоимости продукции

70 коп за 1 кг.

Способ получения препарата вакциннога штамма вируса табачной мозаики в включающий последовательное заражение слабопатогенным вирусом табачной мозаики растений табака и томата, 35 выращивание их, отбор бессимптомных растений, получение из них сока с последующим выделением и очисткой, отличающийся тем, чта, с целью повышения выхода целевого

4О продукта иэ штаммов используют штамм

V-69, из растений табака — гибрид селекции M.Ô.Tåðíoâñêîão NicotiaIIa

tabacum x NiplutiIIosa, а выделение и очистку осуществляют путем асажде45 ния сернокислым аммонием с последующим нанесением осадка на бумажный фильтр и вымыванием вируса водой.