Питательная среда для выделения фитопатогенных грибов из семян тритикале
Изобретение относится к фитопатологии, в частности к питательным средам для выделения грибной инфекции из семян зерновых культур, а именно тритикале. Целью изобретения является повышение достоверности определения степени инфицирования семян. Среда содержит, г/л: агар-агар 18,0-22,0, капсикозид 0,001-0,1, разбавленное до 7°Б пивное сусло до 1 л. Среда позволяет увеличить выход колоний фитопатогенных грибов из стерилизованных семян тритикале. 2 табл.
союз советсних
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (19) (И) (б1) 4 С 12 N 1/14, А 01 N 63/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Агар-агар
Капсикозид
Пивное сусло, разбавленное дистиллированной водой до 7оБ До 1 л
Для выявления оптимального состава среды, обеспечивающей наибольший процент выхода колоний грибов, было приготовлено пять смесей ингредиентов, отличающихся содержанием капсиозида, а также взяты известная среа и среды, содержащие структурный аналог — томатозид в различных концентрациях ингредиентов.
18 — 22
0,001-0, 1
Полученные результаты по применению различных по составу питательных сред для определения степени
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM
ПРИ ГННТ СССР
1 (21) 4383883/31-13 (22) 25.01.88 (46) 07. 10.89, Бюл. У 37 (71) Институт экологической генетики АН МССР и Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений (72) Г.А.Лупашку, В.И.Морарь, Н.Н ° Балашова, Л.С.Корецкая, П.К.Кинтя и М,А.Зарубина (53) 576.8:632.981(088 ° 8) (56) Chem-Ber. 1975, v. 108, р. 265-272.
Методы экспериментальной микологии. Справочник. — Киев, 1982, с. 1,06-107.
Изобретение относится к фитопатологии, в частности к новым питательным средам для выделения грибной инфекции из семян зерновых культур, а именно тритикале.
Цель изобретения — повышение достоверности определения степени инфицирования семян тритикале грибной инфекцией.
В известную среду, включающую агар-агар, пивное сусло, дистиллированную воду, вводится природный стероидный гликозид фуростанолового ряда — капсикозид, представляющий собой пентаозид,(25К)-5J;фуростан-Ы, 3L, 22,(, 26-тетраила, обладающий стимулирующим действием, при следующем соотношении компонентов, г/л:
2 (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ
ФИТОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ ИЗ СЕМЯН
ТРИТИКАЛЕ (57) Изобретение относится к фитопатологии, в частности к питательным средам для выделения грибной инфекции из семян зерновых культур, а именно тритикале. Целью изобретения является повьппение достоверности определения степени инфицирования семян. Среда содержит, г/л: агар-агар
18,0-22,0, капсикозид 0,001-0,1, о разбавленное до 7 Б пивное сусло— до 1 л. Среда позволяет увеличить выход колоний фитопатогенных грибов из стерилизованных семян тритикале.
2 табл.
3 151302 зараженности семян тритикале приведены в табл. 1 и 2.
Как видно из табл. 1, содержание капсикозида в среде в концентрации
0,01 г на 1 л среды позволяет увеличить выход колоний в сравнении с известной средой в 5,3 раза или на
26Х, а по сравнению со структурным 10 аналогом — томатозидом в 1,9 раза или на 157., что позволяет максимально выявить количество колоний грибов и тем самым получить наиболее достоверные данные о степени зара- 15 женности семян.
Пример. Пивное сусло разбавляют дистиллированной водой в отношении 1:3 (т.е. до получения 7 Б пивного сусла по ареометру Баллинга, 20 при этом рН равен 5). Растворяют
0,01 г капсикозида. Этим раствором заливают 20,0 г агара и доводят объем до 1 л. Смесь подогревают, в горячем виде разливают в колбы 25 и стерилизуют в автоклаве при 0,8 атм в течение 30 мин.
В стерильном боксе приготовленную таким образом среду разливают в горячем виде в стерильные чашки Петри 30 по 10 мл в каждую, Семена дезинфицируют следующим образом: после 2-минутной обработки 96 этиловым спиро том семена выдерживают в 0,57-ном растворе перманганата калия в течение 20 мин. После трех смен (по
5 мин) стерильной воды семена сушат между двумя стерильными листами фильтровальной бумаги, фламбируют в пламени горелки и раскладывают их на застывшей среде.
В опыте использованы семена районированного сорта тритикале Амфидиплоид 206. Повторность опыта — четырехкратная, по 25 семян в каждом опыте. Подсчет выросших колоний начинают через три дня.
Окончательные данные, представленные в табл. 1, приведены согласно полученным результатам на седьАгар-агар
Капсикозид
Пивное сусло
7 b в дистило ° лированной воде До1л
На данной среде было выделено
32 колонии следующих видов грибов:
А. alternata . 4
А. consort.iale 3
F. ozysporum 3
F. gibbosum 5
F. graminearum 7
F. solani 3
F. moniliforme 6
F. culmorum 1
20,0
0,01
Формула изобретения
Питательная среда для выделения фитопатогенных грибов из семян тритикале, содержащая пивное сусло и агар-агар, отличающаяся тем, что, с целью повышения достоверности степени инфицирования семян, среда дополнительно содержит капсикозид, представляющий собой пентаозид (25R)-5о -фуростан-2, 3Р, 22,, 26-тетраила, при следующем соотношении компонентов, г/л:
Агар-агар 18-22
Указанный
0,001-0,1
До 1л капсикозид
Пивное сусло
7 Б
8 4 мой день исследования, после которого выделение новых колоний не наблюдается.
На седьмой день проводят изоляцию грибов в пробирки со скошенным суслом-агаром. После 3-недельного культивирования при 22 С проводят идентификацию грибов по определителям Пидопличко и Билай.
Установлен следующий оптимальный состав среды для выявления внутрен ней грибной инфекции семян тритикале, г/л:
Таблиц
1513028
Ингредиенты среды, г/л
Ф п/п
Количество
Количество изолятов изученных зерен
100
1
1
1
1
2
2
2 3
6 6,0 .3,5
100
6 6,0+1,5
100
17 17,0+5,0
100
2
1
2
2
1 .1
2
4
1
3
3
11 11,0+4,7
23 23,0+4, 1
100
32 32,0+5,9
Агар-агар 18,0
Пивное сусло, разбавленное дистиллированной водой до 7 Б до 1 л (известная среда) Агар-агар 20,0
Пивное сусло
7 Б до 1 л (известная среда)
Агар-агар 22,0
Пивное сусло
7Бдо1л
Агар-агар 20,0
Томатозид 0,01
Пивное сусло
7Б До1л (структурный аналог) 5 Агар-агар 20,0 100
Капсикоэид 1,0
Пивное сусло
7Бдо!л
Агар-агар 20,0
Капсикозид 0,1
Пивное сусло
7Бдо1л
7 Агар-агар 20,0 100
Капсикозид 0,01
Пивное сусло
7Бдо1л
Из них проросло колоний
mT Ж, X+ m
6 6,0"1,2*
Идентифицированы виды грибов
А1гernaria alternata (Fr.) Keisle
А. consortiale (Thuem) Hughes
Fusarium oxysporum (Schlecht.)
Shya et Hans
F. gxbbosum App.
et Mr. emena.Bilai
F. graminearum
Schvabe
А. Alternata
А. consortiale
F. ozysporum
F. gibbosum
F. graminearum
А. а1гernata
F. ozysporum
F. gibbosum
F. graminearum
A. а1гernat.а
А. consortiale
F. oxysporum
F. gibbosum
F. graminearum
F. solani (Narc.)
Арр. et. Mr.
F. moniliforme
Shela
F. culmorum (W.G.Sm.) Басс.
А. alternata
А. consortiale
F. oxysporum
F. gibbosum
F. graminearum
F. solani
F. moniliforme
F. culmorum
А. Alternata
А. consortiale
F. oxysporum
F. gibbosum
F ° graminearum
F. solani
F. moniliforme
F. culmorum
А. Alternata
А. consortiale oxysporum . — -Ф
F. gibbosum
1513028
Продолжение табл. 1
1 № Ингредиенты п/п среды, г/л
Иэ них проросло колоний
Количество
Идентифицированы виды грибов
Количество изолятов изученных зерен шт. 7, X+ ш, F
F.
F.
F.
А.
А;
3 Агар-агар 20,0 100
Капсикозид 0,001
Пивное сусло
7Бдо1л
23 23,0+1,0**
graminearum
moniliaorme
culmorum
alternat.a
F, F.
А, Агар-агар 20,0 100
Капсикозид 0,0005
Пивное сусло
7Бдо1л
11 11,0+1,0
А.
consortiale
F. oxysporum
F. gibbosum
F °
gramxnearum
moniliforme при уровне значи*
Различия относительно известной среды существенны мости 0,05
А*
Различия относительно известной среды существенны при уровне значимости 0,01
Таблица 2
Количество Из них проросло изучен- колоний
Идентифицированы Количество ,виды грибов изолятов № Ингредиенты и/и среды, г/л ных зерен шт. 7, Х+ ш.
Агар-агар 18
Капсикозид 0,01
Пивное сусло7Б в дистиллированной воде . до 1 л
100
2 Агар-агар 20 100
Капсикозид 0,01
Пивное суоло7Бв дистиллированной воде до 1 л
31 31,0+6,0
32 32,0"5,9
А.
А.
Я
Р
Я
Р
F.
А.
А.
Р
F.
F.
graminearum
solani
moniliforme
culmotum
alternata
consortiale
oxysporum
gibbosum
solani
alternata
consortiale
oxysporum
gibbosum
graminearum
solani
monilifîãøå
culmorum
alternata
consortiale
oxysporum
gibbosum
graminearum
solani
moniliforme
culmorum
2
2
3
2
4
3
5
1
3
5
3 б
3.
1
2
4
10! 513028
Количество изолятов
У п/п
7, Х+ш — „
alternata
consortiale
oxysporum
gibbosum
graminearum
solani
moniliforme
culmorum
alternata
consortiale
100
А.
А.
F °
F.
F.
F
100
А.
А.
oxysporum
gibbosum
graminearum
solani
moniliforme
culmorum
alternata
consortiale
F.
100
А.
А.
F.
F
F.
F.
А.
100
А.
F.
F.
F.
Я
А.
4
4
3
А.
F °
F °
F.
F.
23,0+1 0
alternata
consortiale
oxysporum
gibbosum
graminearum
solani
moniliforme
А.
А.
F
F
4
2
Ингредиенты Количество среды, г/л изученных зерен
Агар-агар 22
Капсиковид 0,01
Пивное сусло 7 Б в дистиллированной воде до 1 л
Агар-агар 18
Капсикозид 0,01
Пивное сусло 6 Б в дистиллированной воде до 1 л
Агар-агар 20
Капсикоэид 0,1
Пивное сусло 7 Б в дистиллированной воде до 1 л
Агар-агар 22
Капсикозид 0,1
Пивное сусло 8 Б в дистиллированной воде до 1 л
7 Агар-агар 18 100
Капсикозид 0,001.
Пивное сусло 6 Б в дистиллированной воде до 1 л
8 Агар-агар 20 100
Капсикозид 0,001
Пивное сусло 7 Б в дистиллированной воде до 1 л
Из них проросло шт. (32 32,0+6,0
23 23,0+4,5
23 23,0+4, 1
23 23,0+4,3
22 22,0+1, 2
Продолжение табл. 2
Идентифицированы виды грибов охуарогцш
gibbosum
graminearum
solani шопь.liforme
culmorum
alternata
consortiale
oxysporum
gibbosum
graminearum
solani
moniliforme
culmorum а1сernata
consortiale
oxysporum
gibbosum
graminearum
solani
moniliforme
culmorum
3
6
4
1
3 .3
2
3
2 ф
2
4
2
3
3
1
3
12
1513028
Продолжение табл. 2
Идентифицированы виды грибов
У Ингр едиенты и/п среды, г/л
Количество Из них проросло
Количество изолятов изученных.зерен шт. Ж» Х ш — „
23, 23,0+1,5
Составитель Т.Полянская
Техред Л.Олийнык Корректор С.Черни
Редактор В.Петраш
Заказ 6043/27 Тираж 501 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР
113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат Патент, r,yæãîðîä, ул. Гагарин
11 It
Г а 101
9 Агар-агар 22 100
Капсикозид 0,001
Пивное сус.ло 8 Б в дисо тиллированной воде до 1 л
F. culmorum
А. alternate.a
А. conaortiale, F ° ozysporum
F. gibbosum
F. graminearum
F, solani
F. moniliforme
Р. culmorum
2
4
3
