Способ приготовления актинолизата

 

Изобретение относится к микологии и может быть использовано для получения лечебных препаратов при актиномикозе. Целью изобретения является повышение активности продукта.Цельный актинолизат получают путем двухмесячного культивирования аэробных лизирующихся актиномицетов на мясопептонном бульоне. Фильтруют через мембраны, задерживающие продукты с мол.м.более 15000 Д. Удаляют таким образом из препарата наиболее высокомолекулярные балластные компоненты и снижают общее содержание белка после фильтрации на 30%. Животным с экспериментальной актиномикотической инжекцией на высоте развития процесса вводят в течение двух недель низкомолекулярную фракцию актинолизата с последующим изучением величины очага поражения, характера воспалительной реакции, числа фагоцитирующих клеток. Параллельно аналогичные исследования проводят на контрольной группе животных, получающих цельный актинолизат. Уменьшение размеров воспалительного очага, регрессивный характер воспаления и повышение количества фагоцитирующих лучистые грибы клеток подтверждают стимулирование фагоцитоза при использовании препарата. Это может быть использовано для повышения терапевтической эффективности актинолизата при лечении больных актиномикозом - тяжелого, хронического нагноительного процесса, длительно текущего и трудно поддающегося лечению. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК щ) 5 А 61 К 35/66

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4456819/30-13 (22) 07.07.88 (46) 15.08.90. Бюл. Р 30 (71) Институт медицинской наразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского (72). Н.К. Бебрис, Т. Г. Сутеева и Т.П. Егорова (53) 576.8.097(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 81396, кл. А 61 К 35/70, 1948. (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ АКТИНОЛИЗАТА (57) Изобретение относится к микологии и может быть использовано для получения лечебных препаратов при актиномикозе. Целью изобретения является повышение активности продукта.

Цельный актинолизат получают путем двухмесячного культивирования аэробных лизирующихся актиномицетов на мясопептонном бульоне. Фильтруют через мембраны, задерживающие продукты с мол.м.более 15000 D.Óäàëaþò таким образом из препарата наиболее

Изобретение относится .к микологии и может быть использовано для получения лечебных препаратов при актиномикозе °

Целью изобретения является повышение активности продукта.

Указанная цель достигается тем, что актинолизат фильтруют через мембраны, задерживающие продукты с мол.м. более 15000 D, что позволяет .удалить из препарата высокомолекуляр„„SU„, 1584952 А 1 высокомолекулярные балластные KoMIIQ ненты и снижают общее содержание белка после фильтрации на 30K. Животным с экспериментальной актиномикотической инъекцией на высоте развития процесса вводят в течение двух недель низкомолекулярную фракцию актинолизата с последующим изучением величины очага поражения, характера воспалительной реакции, числа фагоцитирующих клеток. Параллельно аналогичные исследования проводят на контрольной группе животных, получающих цельный актинолизат. Уменьшение размеров воспалительного очага, регрессивный характер воспаления и повышение количества фагоцитирующих лучистые грибы клеток поцтверждают стимулирование фагоцитоза при использовании препарата. Это может быть использовано для повышения терапевтической эффективности актинолиэата при лечении больных актиномикозом — тяжелого, хронического нагноительного процесса, длительно текущего и трудно поддающегося лечению. 2 табл. ные балластные компоненты и снизить

1 общее содержание белка на 307.

Пример 1. 100 мл актинолизата помещают в установку для фильтрации МФ-02 емкостью 200 мл. Испо льзуют мембрану Рипор-4-64, задерживающую вещества с мол.м. более

15000 D. Полученную фракцию стерильно разливают в ампуль и хранят прн температуре 0-30 С.

1584952

Интенсивность патологического процесса (в баллах) при лечении

I фракцией II фракцией актинолизата актинолизата

Контроль

4,0+ 0,41

Цельным актинолизатом

1,10 + 0,29 3,46+ 0,63

2,63 t 0,47

Интенсивность патологического процесса оценивают по баллам.

Прогрессирующая стадия развития процесса. Многокамерная гранулема, активно развивающиеся друзы, гигантские клетки отсутствуют.

Прогрессирующая стадия развития процесса. Множественные гранулемы с жизнеспособными друзами, появление гигантских клеток на периферии очага.

Прогрессирующая стадия развития процесса. Единичные гранулемы с жизнеспособными друзами актиномицетов, единичные гигантские клетки на периферии.

Пограничная стадия между прогрессирующим процессом и регрессом гранулем. Множественные гранулемы с начинающейся гибелью возбудителя, на периферии гигантские клетки начальной стадией фагоцитоза, появление клеток с завершенным фагоцитозом.

Регрессивная стадия развития гранулем. Единичные гранулемы с погибшим возбудителем, гигантские клетки проникают в центр гранулем, фагоцитоз завершенный.

Регресс гранулем. Гранулемы состоят иэ гигантских клеток, друзы фрагментированы, полностью фагоцитированы многоядерными гигантскими клетками.

Отсутствие патологии. Соединительнотканный рубец на месте бывшей гранулеьщ или полное отсутствие воспалительного процесса. баллов.

5 баллов.

4 балла.

3 балла.

2 балла.

1 балл.

0 баллов.

Пример 2. В сравнении с прототипом проверяют терапевтическую эффективность низко- (с мол.м. до

15000 Р) и высокомолекулярной

° ° °

Ic мол.м. 15000-25000 П) фракций актинолиэата. Испытание эффективности

Действия препаратов проводят следующим образом. Морским свинкам массой 200,0-220,0 г с эксперименталь+IM актиномикоэом правого бедра на

3 сут после заражения вводят в одном лучае цельный актинолизат, а в друПредставленные в табл. 1 данные патоморфологических изменений в очаге воспаления показывают, что наиболее активный фагоцитоз в гранулеме достигается при использовании низко- 5 молекулярной фракции I. У всех животных этой группы отсутствует активный актиномикотический воспалительный процесс и наблюдается регресс и рубцевание гранулемы.

Отличие в терапевтической эффективности I фракции по отношению к цельному актинолизату достоверно эна— чимо (P (0,05). У группы животных, гом — ниэкомолекулярную фракцию (1 фракция), в третьем — высокомолекулярную фракцию (фракция II) в мышцы левого бедра в дозе по О, 1 см .

После четырех инъекций с интервалами в 3 дня измеряют величину очага поражения, патоморфологическим способом изучают картину воспаления и подсЧи— тывают фагоцитирующие клетки в очаге воспаления. Результаты испытания эффективности действия актинолизата представлены в табл. 1.

Та блица 1 леченных фракцией II обогащенной высокомолекулярными компонентами с мол.м. 15000-25000 D, воспалительный процесс близок по характеру к процессу у животных контрольный, нелеченной группы (Р > 0, 05) . Эти данные свидетельствуют о том, что высокомолекулярные компоненты актинолизата не только не стимулируют фагоцитоз в актиномикотической гранулеме, но и тормозят этот процесс.

Пример 3. Проведена сравнительная оценка эффективности действия цельного актинолизата и его ниэкомо1584952

Таблица 2

Низ комолекулярная фракция актинолизата, 14 сут после начала лечения

Параметры процесса

Цельный актинолизат, 14 сут после начала лечения

0,8xf,0-0,5х0,7 см

Величина инфильтрата

Прогрессирующий характер воспаления

Регрессирующий характер воспаления

Выздоровление

Количество гигантских

О, 5хО, 6-0, 2хО, 3 см

7 животных

20 животных

16 клеток, участвующих в фагоцитозе лучистых грибов

20-40

80 †1

Составитель Г. Соболева

Редактор Ю. Середа Техред М.Ходанич Корректор С . Ше вкун

Заказ 2285 Тираж 546 Подписное

ВНИИ11И Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно †издательск комбинат "Патент", r.Ужгород, уд. Гагарина,101 лекулярной фракции, полученной по примеру 1. Данные получены на лабораторных животных (морских свинках), зараженных смесью двух культур аэробных лучистых грибов — возбудителей актиномикоза, выделенных иэ патологического материала от больных актиномикозом. Через 7 дней после заражения на высоте развития актиномикоти10 ческой инфекции одной группе животных вводят цельный актинолизат (контроль), другой — ниэкомолекулярную фракцию актинолизата.

Через 7 дней после начала введения 15 препарата проверяют наличие и величиИэ данных табл. 2 следует, что применение ниэкомолекулярной фракции актинолиэата (мол.м. более 15000 D), полученной при фильтрации цельноro актинолизата через мембранные фильтры, стимулирует фагоцитоз, что выражается в изменении количества фагоцитирующих клеток 80-120 по сравнению с 2-40 в прототипе, уменьшает процесс инфильтрации и ускоряет выздоровление. ну инфигьтрата и через 2 недели животных усыпляют эфиром. Патологический материал помещают в 107-ный раствор формалина, заливают в парафин и изготовляют серию срезов, которые окрашивают гематоксилином и эоэином.

В табл. 2 представлены сравнительные данные изучения патоморфологических изменений в очаге воспаления, а также приведены сравнительные результаты фагоцитарной активности препарата -по способу-прототипу и по предлагаемому способу.

Формула изобретения

Способ приготовления актинолизата, включающий культивирование аэробных лизирующихся актиномицетов на мясопептонном бульоне в течение двух месяцев, отделение культуральной жидкости и последующую стерилизацию, о т л ич а ю.шийся тем,что,с целью повышения активности продукта, после стерилизации культуральную жидкость дополнительно очищают от высокомолекулярных фракций с мол.м. 15000-25000 D.