Способ определения геометрических (син-анти-)изомеров 2-(2- амино-1,3-тиазол-4-ил)-2-алкоксиминоуксусных кислот и их производных

 

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения сини анти-форм соединений цефалосперинового ряда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Целью изобретения является повышение точности определения. При ВЭЖХ пробы смеси используют в качестве подвижной фазы воду, содержащую органический модификатор в количестве 11-33 об. % и меньшую PH=2,2-6,1. В качестве модификатора используют или ацетонитрил, или этанол, или их смесь. Сорбент силасорб С 8 или С 18. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИМЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„. SU „„1589205 (55)5 С 01 М 30/22

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГХНТ СССР

К А ВТОРСКОМУ СВИ4ЕТЕЛЬСТВУ

5 (21) 4406306/23-25 (22) 22.02.88 (46) 30 ° 08.90. Бюл. 5 32 (71) Пензенский филиал Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков (72) О.Я.Беляева, С.В.Саратовцев, С.M.Горбунова, Г.И.Тарасова, С.В.Ииляева, И.Б.Второе, А.В.Михалев, А.А.Келаев и В.Л.Егоров (53) 543 ° 3.544(088.8) (56) J. Liquid Chromatogr. 1984, 1, Н 12, р. 2483-2491.

Антибиотики. 1987, 1 6, с. 439443. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕОМЕТРИЧЕС"

КИХ (СИН-АНТИ-) ИЗОМЕРОВ 2-(2-АМИНОИзобретение относится к аналити" ческой химии, а именно к способам определения геометрических изомеров

2-(2-амино-1,3-тиазол-4-ил)-2-алкоксиминоуксусных кислот и их производных методом обращенно-фазной жидкостной хроматографии

0 и с - с (>) н,-ннi II

S. .zoR гДе R, — ОН, OC,Н, 0Na, Cl, " H3

R,-сн,, — с соос(снз),, н

С 3

1,3-ТИАЗОЛ-4-ИЛ).-2-АЛКОКС ИМИНОУКСУСНЫХ КИСЛОТ И ИХ ПРОИЗВОЛННХ (57) Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения син- и анти-форм соединений цефалосперинового ряда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭФАХ). Целью изобретения является повышение точности определения. При ВЭЖХ пробы смеси используют в качестве подвижной фазы воду, содержащую органический модификатор в количестве 11 - 33 об.3 и меньшую рН = 2,2 - 6,1..В качестве модификатора используют или ацетонитрил, или этанол, или их смесь., Сорбент силасорб С> или Гц . 1 табл.

tl

Rg-H, — с-(c AH))g, схсн си может использоваться в химических и биохимических лабораториях.

Цель изобретения - повышение точности определения.

Способ осуществляется следующим образом.

Навеску образца (0,1 r) помещают в мерную колбу вместимостью

10 мл, добавляют 2 мл 0,2 Н раствора бикарбоната натрия и после полного растворения пробы доводят объем до метки. Аликвотную часть (6 мкл) полученного раствора вводят в поток подвижной фазы, в качестве которой

1589205 используют воду, содержащуЮ 11

33 об.3 органического модификатора ацетонитрила, или этанола, или их смеси, и имеющую значение водородного показателя 2,2-6,1 рН, устанавливаемое 0,1N раствором соляной кислоты. Детектирование компонентов, элюированных в потоке подвижной Фазы из колонки (62х2 мм), заполненной сорбентом Силасорб Су или С (7,5 мкл), осуществляют спектрофото" метрическим детектором при длине волны 230-240 нм.

Расчет массовых долей анти- и

15 син-изомеров проводят по Формуле

h а с

А =

h а, К

20 где А - массовая доля анти- или синизомера, 7. ;

h,„h — высоты пиков для анализируе1" мой пробы и образца, содер" жащего анти- или син-изомера, мм; а,а - массы анализируемой пробы и образца анти- или син-изомер с — массовая доля основного вещества в образце анти-изоме.ра или син-изомера, 3

К - коэффициент, учитывающий разведение образца анти- или син-изомера.

Прямолинейная зависимость высоты пика определяемого изомера от его концентрации лежит в интервалах массовых долей от 0,05 до 23 для.изомеров анти-конфигурации и в интервалах массовых ролей от 0,005 до 0,2i для зомеров син-конфигурации.

Объемы удерживания изомерных соединений, имеющих общую формулу (1), в зависимости от вида радикалов R

К2, КЗ, входящих в состав молекуль1, заключены в интервалах 450-1445 мкл

45 при расходе подвижной фазы 100 мкл/

/мин и комнатной температуре.

Пример 1. Определение геометрических изомеров соединений общей формулы (1), где R < - OH, С1

R — СН, R — С1СН CO.

В мернуа колбу вместимостью 10 мл вносят 0,1 г технической 2-аминотивэолимметоксиминуксусной кислоты, добавляют 2 мл 0,2N раствора бикарбоната натрия до полного растворения пробы и доводят объем до метки дистиллированной водой (раствор A) . Дозатором вводят в колонку, заполненную сорбентом Силасорб С>, 6 мкл раствора А. Подвижная фаза содержит

15 об.3 этанола и имеет рН 2,5. Измеряют высоту пика с объемом удерживания 960 мкл. Параллельно при тех же условиях хроматографируют 6 мкл раствора образца анти-изомера

2-ХАТИУК, приготовленного путем растворения 0,1 r образца анти-изомера в 0,2N растворе бикарбонатнатрия в мерной колбе на l0 мл и разбавленного затем водой в соотношении 1:200, и измеряют высоту пика с объемом удерживания 960 мкл .1 мл раствора А пипеткой вместимостью 1 мл переносят в мерную колбу на 10 мл, доводят объем до метки дистиллированной водой (раствор Б). В описанных условиях хроматографируют 2 мкл раствора Б, измеряют высоту пика с объемом удерживания 240 мкл. Параллельно в тех же условиях хроматографируют 2 мкл раствора очищенной пробы син"изомера

2-ХАТИУК, приготовленного растворением 0,1 r очищенной пробы син-изомера в 0,2N растворе бикарбоната натрия в мерной колбе на 10 мл с последующим разбавлением полученного раствора в сотношении 1:10, измеряют высоту пика с объемом удерживания

240 мкл. Установлена массовая доля анти-изомера 0,83 и син-изомера 95,7ь.

Пример 2. Определение геометрических иэомеров соединений общей формулы (1), где R — ОС Н

СН3

К, — СН„С вЂ” C00C(CH ) -Н; К,—

СН

Н, (С Н ) > -С, на примере этилового эфира 2-ХАТМУК.

В мерную колбу вместимостью 10 мл вносят 0,1 r технической пробы этилового эфира 2-ХАТИУК (R 1 — ОС Н

Rz — CH>,. R > — Н), добавляют ацетонитрил до полного растворения пробы, доводят объем до метки ацетонитрилом и получают раствор А. В колонку, заполненную сорбентом Силасорб С, вводят 2 мкл раствора А, элюируют

301-ной подвижной Фазой, содержащей

301 ацетонитрила и имеющей значение рН 3,5, и измеряют высоту пика с объемом удерживания 1260 мкл.

Параллельно в тех же условиях хроматографируют 2 мкл раствора образца анти-изомера этилового эфира

158920 з

С(С,Н ) Ъ

В мерную колбу вместимостью 10 мл вносят 0,1 r технической пробы

2-ХАТМУК (R, — OH, R,— CH, R, - — H)

I и готовят раствор А аналогично примеру 1, используя 0,05N раствор бикарбоната натрия. Вводят в колонку, заполненную сорбентом Силасорб С <<, 2 мкл раствора А и элюируют водой, в которой модификатором (12 об.3) является смесь этанола и ацетонитрила с объемными долями 5 и 7 соответственно. Подвижная Фаза имеет рН 5,8.

Измеряют высоту пика с объемом удерживания 1167 мкл. Параллельно в тех же условиях хроматографируют 2 мкл раствора образца анти-изомера

2-ХАТМУК, приготовленного аналогично примеру 1, используя растворитель

0,05М НаНСО

1 мл раствора А пипеткой вмести" мостью 1 мл переносят в мерную колбу на 10 мл и доводят объем до метки дистиллированной водой, получают раствор В. В описанных условиях хроматографируют 2 мкл раствора Б и измеряют высоту пика с объемом удержи1

2-ХАТМУК, приготовленного путем растворения 0,1 г образца анти-изомера в ацетонитриле в мерной колбе на 10 мл с последующим разбавлением водой в соотношении 1:200, измеряют высоту пика с объемом удерживания

1260 мкл. 1 мл раствора А пипеткой . на 1 мл переносят в мерную колбу (10 мл) и доводят объем до метки 10 ацетонитрилом, получая раствор Б.

Хроматографируют 2 мкл раствора Б, измеряют высоту пика с объемом удерживания 1410 мкл. Параллельно в тех же условиях хроматографируют 2 мкл !5 раствора очищенной пробы син-изомера этилового эфира 2-ХАТМУК, приготовленного путем растворения 0,1 г очищенной пробы син-изомера эфира

2-ХАТМУК в ацетонитриле в мерной колбе (10 мл) с последующим разбавлением полученного раствора в соотношении 1:10, и измеряют высоту пика с объемом удерживания 1410 мкл.

Пример 3. Определение геометрических изомеров соединений общей формулы (1). где R „ — OH, ONa, СйЬ

К СН, С СООС(СН ), К Н, СН 30

5 6 вания 460 мкл, параллельно в тех же

1 условиях хроматографируют 2 мкл раст-вора очищенной пробы син-изомера

2-ХАТМУК. приготовленного по описанной схеме.

Пример 4. В мерную колбу вместимостью 100 мл пипеткой на 1 мл вносят 0,5 мл реакционной массы процесса получения этилового эфира

R з С" з

R — Н), объем до метки доводят ацетонитрилом (раствор А). В колонку, заполненную сорбентом Силасорб С, вводят поочередно по 2 мкл реакцйонной массы и раствора А, элюируют

27 об.3 ацетонитрила рН 3,8, измеряют высоты пиков с объемами удерживания 1260 мкл (при вводе реакционной массы) и 1410 мкл (при вводе раствора А). Параллельно в тех же условиях хроматографируют по 2 мкл растворов син- и анти-изомеров, приготовленных согласно примеру 2, и измеряют высоты пиков с объемом удерживания 1260 и 1410 мкл.

Установлена массовая доля в пробе

16 син-изомера.

Пример ы 5-17. Определение син- и анти-изомеров производят при различных долях модификатора и ве-, личине значения рН в подвижной фазе.

Результаты представлены в таблице.

Формула изобретения

Ф

Способ определения геометрических (син-анти-)изомеров 2-(2-амино-1,3тиазол-4-ил)-2-алкоксиминоуксусных кислот и их производных с помощью обращенно-фазной жидкостной хроматографии путем хроматографирования анализируемой пробы в потоке подвижной фазы на основе воды, содержащей органический модификатор и имеющей фиксированное значение рН, на колонке с силикагелем, модифицированным октильными группами, и детектирования разделенных компонентов спекто" фотометрическим детектором, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности определения, под" вижная фаза на основе воды содержит

11-33 об.3 органического модификатора, в качестве которого используют и (или) ацетонитрил, и (или) этанол, или их смесь при значении рН 2,2"6,1 °

1589205 сч

CV сЧ со а м л аоо

cIl CO «««« а сч сч 11(ч

1 сч с0 а co - асч

О « ««« л м а соам со

lA м

+ м сч л м а

5 сС

Cl, 8 о

l» о о х

О о и

tf, х о

l с а

I о о

z 1Ф Э

1- =3 с

z бz

X о !.

Э сС с

Cl !

X с х о о

X I(С(Э

1 Г сс> сХ с

X а(»

z c о о

t- X

Э ((t ..7 б1 сХ С Ъ

I с о

X (((Iм х о 1

« хо

I I

ICI х

« хо!! о хо ч бс

vx о

° I «-( хо о

I X

6 бЕ о 6-6

Эа о

1» (5 х с» о

z ((( х иб сб х о

I V G с6 к

Ю

« х о

C бс а

Э о с х с(х (о

ovo ф хк оо

Э

z х

X с сО х

t О сч - » (1а а лщ - м м

О1 CJl 1 —CO л

« л о о

9 о о

Ооооо

«а а а аа

О1 О1 о о о о

« а о

О1»! I ((l

z. а l а э ( (X % 1

1 1

I 84 t (I! « t

I .О (0 1 х

1 Ol (D 1

I 1- 1

1 S 3 I. и о о 1 (.х с t

I I- Ф 1 о х t

1 I

1 1

1 I

I 1

1 1

1 1 а 1

1 !

I 1 I I! 1 rtl I х! 1 X !

1 I +%I I

I 1 CClg I

1 1 Z I

Э «1

Я 1 C Э,б

1 ltt I 1. -а !

Вб ОО!

1 сб-1

I C 1 1

I Ф I I а

М 1 О

zt б» !

I Ю 1 Ф !

1 CZ I X I о z с &! I С): 1

I 1 О

I I E 1

I 1

» 1

1 !

1 I

I !

1 I

I t! 1

1 1

I 1

I 1 ссб 1

1 I

1 1

I I

I t

1 l!

I I

I 1

I 1! I

I I

1 Ф 1

1 1

1 1

I !

1 1

1 I

1 I

1 1

I I

1» 1

I t(C 1

1 Ь

1 I

1 1

1 I I л 1

1 1. 1

1 Х бС б! ФЪ

Ct ((t м а

t 1

1 1

1 1 о 1 х 1

I Э I

1 сХ I

1 X ачР I

I (t(l

1 Х (1 !

1 t

I t о I

I X 1

l Э 1

I CC 1! e 1

1 Ю I (ОЪ l

z !

z ! 1 съ сх сч а о м о л - л

««Щ

«

С О СО М О! (1

l ( (!

I со алло л

«« °

»-МNСЧ l

1 1

1 аоэ а сч со

««

menñ÷ сч сч (l!

1

1 « I

« «» «

l сч е м ло асо сч м caì

t (I с 1

z z 1 а а 1 б- 1

z X 1

z с о э о 1 О

% z

Э l Q (((а о= (» t ((t t- I l СЪ !

1 (1 (ЭЪ (Ю 1 м 1

1 х l ч 1

1 o o I

«-(1

u u

tO 1 t

° fl 1 х 1 о 1! с(о хох=

uoo l u !

° u 1

I (о I (с(l х t о 1

- lCI

° 1 1 х о с и

tO l (O(l!

1!

z z

z z ххххх (.Э (б « сХ l (1

1 о I ао» l л !. (° М (ОЪ Ol Ch (l (t

1 п (п I

« l а (1 1 О1 l

l ( (о сч сл а аул (