Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх



Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх
Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате методом вэжх

 


Владельцы патента RU 2476873:

Открытое акционерное общество "Нижегородский химико-фармацевтический завод" (RU)

Предлагаемое изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других исследованиях для определения эстрогена и декспантенола в лекарственных препаратах. Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате включает извлечение эстрогена и декспантенола из анализируемого лекарственного препарата. Также способ включает хроматографирование извлеченных эстрогена и декспантенола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с разделением на колонке С18 размером 50×2,0 мм, заполненной носителем с зернением 2,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной носителем с зернением 5 мкм, с использованием в качестве подвижных фаз смеси 0,05% раствора кислоты ортофосфорной (рН 2,4) с ацетонитрилом для хроматографии в соотношении от 90:10 до 95:5 в режиме линейного градиента на хроматографе с использованием ультрафиолетового детектора, после чего на основании расчетных формул определяют содержание эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате. Техническим результатом изобретения является повышение определения содержания эстрогена и декспантенола в лекарственном препарате. 1 з.п. ф-лы, 16 ил., 4 табл., 8 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других исследованиях для определения эстрогена и декспантенола в лекарственных препаратах.

В фармацевтической промышленности продолжает развиваться тенденция к производству лекарственных препаратов, содержащих несколько действующих веществ. Преимущество таких лекарственных препаратов заключается в том, что они вызывают значительный лечебный эффект при отсутствии или минимуме отрицательных влияний на организм. Это свойство обусловлено введением в препарат малых доз отдельных ингредиентов. Проблема обеспечения контроля качества таких препаратов связана, с одной стороны, с малыми дозами, с другой, - с различной химической природой входящих ингредиентов. Решить данную проблему можно с помощью эффективных способов определения количественного состава. К таким способам относится метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Известен способ определения декспантенола в лекарственных препаратах методом ВЭЖХ в изократическом режиме с использованием хроматографической колонки размером 250×4,0 мм, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, со стационарной фазой С4, в качестве подвижной фазы используют смесь 0,01 М раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом в соотношении 90:10 (ФСП 8444-07 ЛСР-001794/08-170308).

Известен способ определения декспантенола в лекарственных препаратах методом ВЭЖХ в изократическом режиме с использованием хроматографической колонки размером 150×4,6 мм, заполненной носителем с размером частиц 5 мкм, со стационарной фазой С18, в качестве подвижной фазы используют смесь фосфатного буфера (0,01 М раствор калия фосфата однозамещенного с рН 2,8) с метанолом в соотношении 60:40 (производитель препарата АО «Ядран» Галенский Лабораторий, Хорватия).

Известен способ определения эстрогенов, в частности эстриола, методом ВЭЖХ в изократическом режиме с использованием хроматографической колонки C8 размером 150×4,6 мм, заполненной носителем с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используется смесь ацетонитрил:метанол:вода в соотношении 35:15:45 (Фармакопея США, 29 изд.).

Известен способ определения эстрогенов, в частности эстрадиола и этилэстрадиола, методом ВЭЖХ в режиме градиентного элюирования с использованием хроматографической колонки C18 размером 150×4,6 мм, в качестве подвижных фаз используется смесь вода:ацетонитрил:ортофосфорная кислота в соотношении от 60:40:0,25 до 100:0,25 ацетонитрил:ортофосфорная кислота (Каталог ЭЛСИКО «Применение колонок для хроматографии», www.HPLC.ru).

Известные способы хорошо себя зарекомендовали и пригодны для качественного и количественного определения декспантенола или эстрогена в однокомпонентных лекарственных препаратах. Однако ни один из известных способов не позволяет количественно определить декспантенол и эстроген в двухкомпонентных лекарственных препаратах.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа определения декспантенола и эстрогена в составе двухкомпонентного лекарственного препарата.

Поставленная задача решается предлагаемым способом определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате, включающим извлечение эстрогена и декспантенола из анализируемого лекарственного препарата, хроматографирование извлеченных эстрогена и декспантенола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с разделением на колонке С18 размером 50×2,0 мм, заполненной носителем с зернением 2,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной носителем зернением 5,0 мкм, с использованием в качестве подвижных фаз смеси 0,05% раствора кислоты ортофосфорной (рН 2,4) с ацетонитрилом для хроматографии в соотношении от 90:10 до 95:5 и ацетонитрила в режиме линейного градиента на хроматографе с использованием ультрафиолетового детектора, после чего на основании расчетных формул определяют содержание эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в создании эффективного способа, позволяющего с высокой точностью определить содержание эстрогена и декспантенола в лекарственном препарате. Кроме того, данный способ прост в исполнении и экономичен.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Раствор испытуемого препарата и раствор стандартного образца (СО) последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе фирмы Waters, США, с УФ-детектором при длинах волн 206 нм и 280 нм и хроматографической колонкой С18 размером 50×2,0 мм, заполненной обращенно-фазным носителем с зернением 2,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной обращенно-фазным носителем зернением 5,0 мкм, в режиме линейного градиента с использованием в качестве подвижной фазы (ПФ):

- смеси 0,05% раствора кислоты ортофосфорной рН 2,4 с ацетонитрилом для хроматографии в соотношении от 90:10 до 95:5 - фаза А;

- ацетонитрил для хроматографии - фаза В,

получая не менее трех хроматограмм каждого раствора. Находят площади пиков определяемых веществ на хроматограммах испытуемого и стандартного растворов и по формуле рассчитывают их содержание в анализируемом препарате.

Примеры конкретного применения предлагаемого способа

Количественное определение декспантенола и эстрогена-эстриола в лекарственном препарате, выполненном в виде суппозиториев.

Пример 1

Для приготовления испытуемого раствора один суппозиторий, предварительно измельченный и взвешенный с точностью до 0,01 г, растворяют в 50 мл смеси 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане при температуре 35-45°С в течение 10 мин, затем охлаждают, доводят объем раствора той же смесью до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата (испытуемый раствор 1).

5 мл испытуемого раствора 1 помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата (испытуемый раствор 2).

Для количественного определения эстриола используют испытуемый раствор 1 для декспантенола раствор 2.

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) эстриола берут около 0,05 г (точная навеска) его СО, растворяют в смеси 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (3:2) в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора той же смесью до метки и перемешивают (раствор А).

Для приготовления раствора стандартного образца (СО) декспантенола берут около 0,05 г (точная навеска) его СО, растворяют в смеси 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) в мерной колбе вместимостью 50 мл, доводят объем раствора той же смесью до метки и перемешивают (раствор Б).

1 мл раствора А и 10 мл раствора Б помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата (раствор В).

По 40,0 мкл испытуемых растворов 1 и 2 и раствора В СО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем Puro-spher® STAR RP-18e с размером частиц 5 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве ПФ смеси фазы А (с рН 2,4) и фазы В (ацетонитрил для хроматографии). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время, мин Длина волны, нм Фаза А, % Фаза В, %
0 206 100 0
4,5 280 100 0
12,0 280 30 70

Скорость потока подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны УФ-детектора - 206 нм для декспантенола; 280 нм для эстриола.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом лекарственном препарате по формуле:

Для эстриола

для декспантенола

где Sк и Sст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и СО соответственно;

mст, mс и mн - масса стандарта определяемого вещества в растворе СО, средняя масса суппозитория и масса навески суппозитория, взятой для приготовления испытуемого раствора, соответственно в граммах.

Хроматограммы СО и испытуемого раствора суппозиториев, содержащих декспантенол и эстриол, с использованием колонки 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем Purospher® STAR RP-18e с размером частиц 5 мкм представлены на фиг.1, 2 и 3.

Пример 2

Приготовление испытуемого раствора 1, растворов А и Б СО осуществляется, как в примере 1.

3 мл испытуемого раствора 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) до метки. Перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата (испытуемый раствор 3).

Для количественного определения эстриола используют испытуемый раствор 1, для декспантенола - испытуемый раствор 3.

Для приготовления раствора СО эстриола и декспантенола берут 1 мл раствора А и 3 мл раствора Б, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) до метки. Перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата (раствор Г).

По 10,0 мкл испытуемых растворов 1 и 3 и раствора Г СО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 50×2,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-UltraHT Pro С18 с размером частиц 2,0 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве ПФ смеси фазы А (с рН 2,4) и фазы В (ацетонитрил для хроматографии). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время, мин Длина волны, нм Фаза А, % Фаза В, %
0 206 100 0
1,0 280 - -
2,2 280 50 50

Скорость потока подвижной фазы 0,6 мл/мин. Длина волны УФ-детектора - 206 нм для декспантенола; 280 нм для эстриола.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом лекарственном препарате по формуле:

Для эстриола

для декспантенола

где Sк и Sст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и СО соответственно;

mст, mс и mн - масса стандарта определяемого вещества в растворе СО, средняя масса суппозитория и масса навески суппозитория, взятой для приготовления испытуемого раствора, соответственно в граммах.

Хроматограммы СО и испытуемого раствора суппозиториев, содержащих декспантенол и эстриол, с использованием колонки 50×2,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-UltraHT Pro С18 с размером частиц 2,0 мкм представлены на фиг.4, 5 и 6.

Количественное определение декспантенола и эстрогена-эстриола в лекарственном препарате, выполненном в виде геля

Пример 3

Для приготовления испытуемого раствора навеску геля массой около 1,0 г, взвешенную с точностью до 0,01 г, помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют пипеткой 20 мл смеси раствора кальция хлорида с ацетонитрилом (90:10), перемешивают до растворения основы и фильтруют через фильтр «синяя лента», отбрасывая первые порции фильтрата.

5 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр (GHP, 0,45 мкм, P/N WAT200514 или аналогичный), отбрасывая первые порции фильтрата (испытуемый раствор 1).

5 мл испытуемого раствора 1 помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр (GHP, 0,45 мкм, P/N WAT200514 или аналогичный), отбрасывая первые порции фильтрата (испытуемый раствор 2).

Для количественного определения эстриола используют испытуемый раствор 1, для декспантенола испытуемый раствор 2.

Около 0,05 г (точная навеска) СО эстриола растворяют в смеси 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (3:2) в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора той же смесью до метки и перемешивают (раствор А).

Около 0,05 г (точная навеска) СО декспантенола растворяют в смеси 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) в мерной колбе вместимостью 50 мл, доводят объем раствора той же смесью 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) до метки и перемешивают (раствор Б).

2 мл раствора А и 10 мл раствора Б помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр (GHP, 0,45 мкм, P/N WAT200514 или аналогичный), отбрасывая первые порции (около 10 мл) фильтрата (раствор В).

По 40,0 мкл испытуемых растворов 1 и 2 и раствора В СО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем Puro-spher® STAR RP-18e с размером частиц 5 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве ПФ смеси фазы А (с рН 2,4) и фазы В (ацетонитрил для хроматографии). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время, мин Длина волны, нм Фаза А, % Фаза В, %
0 206 100 0
4,5 280 100 0
12,0 280 30 70

Скорость потока подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны УФ-детектора - 206 нм для декспантенола; 280 нм - для эстриола.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом лекарственном препарате по формуле:

Для эстриола

для декспантенола

где Sк и Sст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и СО соответственно;

mст и mн - масса стандарта определяемого вещества в растворе СО и навески геля, взятой для приготовления испытуемого раствора, соответственно в граммах.

Хроматограммы СО и испытуемого раствора геля, содержащих декспантенол и эстриол с использованием колонки 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем Purospher® STAR RP-18e с размером частиц 5 мкм представлены на фиг.7, 8 и 9.

Пример 4

Приготовление испытуемого раствора 1, растворов А и Б СО осуществляется, как в примере 3.

6 мл испытуемого раствора 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр (GHP, 0,45 мкм, P/N WAT200514 или аналогичный), отбрасывая первые порции фильтрата (испытуемый раствор 3).

2 мл раствора А и 3 мл раствора Б помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора смесью 0,05% раствора ортофосфорной кислоты с ацетонитрилом (90:10) до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр (GHP, 0,45 мкм, P/N WAT200514 или аналогичный), отбрасывая первые порции (около 10 мл) фильтрата (раствор Г).

По 10,0 мкл испытуемых растворов 1 и 3 и раствора Г СО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 50×2,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-UltraHT Pro С18 с размером частиц 2,0 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве ПФ смеси фазы А (с рН 2,4) и фазы В (ацетонитрил для хроматографии). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время, мин Длина волны, нм Фаза А, % Фаза В, %
0 206 100 0
1,0 280 - -
2,2 280 50 50

Скорость потока подвижной фазы 0,6 мл/мин. Длина волны УФ-детектора - 206 нм для декспантенола; 280 нм для эстриола.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом лекарственном препарате по формуле:

Для эстриола

для декспантенола

где Sк и Sст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и СО соответственно;

mст и mн - масса стандарта определяемого вещества в растворе СО и навески геля, взятой для приготовления испытуемого раствора, соответственно в граммах.

Хроматограммы СО и испытуемого раствора геля, содержащих декспантенол и эстроген (эстриол), с использованием колонки 50×2,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-UltraHT Pro С18 с размером частиц 2,0 мкм представлены на фиг.10, 11 и 12.

Количественное определение декспантенола и эстрогена-эстрона в лекарственном препарате, выполненном в виде суппозиториев или геля

Пример 5

Приготовление растворов испытуемых и СО проводят, как в примерах 1 и 3.

По 40,0 мкл испытуемых растворов 1 и 2 и раствора В СО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем Puro-spher® STAR RP-18e с размером частиц 5,0 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве ПФ смеси фазы А (с рН 2,4) и фазы В (ацетонитрил для хроматографии). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время, мин Длина волны, нм Фаза А, % Фаза В, %
0 206 100 0
4,5 280 100 0
14,0 280 0 100

Скорость потока подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны УФ-детектора - 206 нм для декспантенола; 280 нм для эстрона.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом лекарственном препарате по формулам, описанным в примерах 1 и 3.

Хроматограмма раствора, содержащего СО декспантенола и эстрогена (эстрон), с использованием колонки 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем Purospher® STAR RP-18e с размером частиц 5,0 мкм представлена на фиг.13.

Пример 6

Приготовление растворов испытуемых и СО проводят, как в примерах 2 и 4.

По 10,0 мкл испытуемых растворов и раствора СО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 50×2,0 мм с обращено-фазным носителем YMC-UltraHT Pro C18 с размером частиц 2,0 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве ПФ смеси фазы А (с pH 2,4) и фазы В (ацетонитрил для хроматографии). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время, мин Длина волны, нм Фаза А, % Фаза В, %
0 206 100 0
1,0 280 - -
2,5 280 30 70

Скорость потока подвижной фазы 0,6 мл/мин. Длина волны УФ-детектора - 206 нм для декспантенола; 280 нм для эстрона.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом лекарственном препарате по формулам, описанным в примерах 2 и 4.

Хроматограмма раствора, содержащего СО декспантенола и эстрогена (эстрон), с использованием колонки 50×2,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-UltraHT Pro C18 с размером частиц 2,0 мкм представлена на фиг.14.

Количественное определение декспантенола и эстрогена-эстрадиола в лекарственном препарате, выполненном в виде суппозиториев и геля

Пример 7

Приготовление растворов испытуемых и СО проводят, как в примерах 1 и 3.

По 40,0 мкл испытуемых растворов 1 и 2 и раствора В СО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем Puro-spher® STAR RP-18e с размером частиц 5,0 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве ПФ смеси фазы А (с рН 2,4) и фазы В (ацетонитрил для хроматографии). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время, мин Длина волны, нм Фаза А, % Фаза В, %
0 206 100 0
4,5 280 100 0
14,0 280 0 100

Скорость потока подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны УФ-детектора - 206 нм для декспантенола; 280 нм для эстрадиола.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом лекарственном препарате по формулам, описанным в примерах 1 и 3.

Хроматограмма раствора, содержащего СО декспантенола и эстрогена (эстрадиол), с использованием колонки 150×4,6 мм с обращенно-фазным носителем Purospher® STAR RP-18e с размером частиц 5,0 мкм представлена на фиг.15.

Пример 8

Приготовление растворов испытуемых и СО проводят, как в примерах 2 и 4.

По 10,0 мкл испытуемых растворов и раствора СО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 50×2,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-UltraHT Pro C18 с размером частиц 2,0 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве ПФ смеси фазы А (с рН 2,4) и фазы В (ацетонитрил для хроматографии). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время, мин Длина волны, нм Фаза А, % Фаза В, %
0 206 100 0
1,0 280 - -
2,5 280 30 70

Скорость потока подвижной фазы 0,6 мл/мин. Длина волны УФ-детектора - 206 нм для декспантенола; 280 нм для эстрадиола.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом лекарственном препарате по формулам, описанным в примерах 2 и 4.

Хроматограмма раствора, содержащего СО декспантенола и эстрогена (эстрадиол), с использованием колонки 50×2,0 мм с обращенно-фазным носителем YMC-UltraHT Pro С18 с размером частиц 2,0 мкм представлена на фиг.16.

Статистическую обработку результатов, полученных при использовании предлагаемого способа, проводили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи СССР, XI изд.

Таблица 1
Результаты испытаний суппозиториев с эстриолом и декспантенолом (пример 1)
Компоненты Содержание в одном суппозитории, мг (n=9; Р=0,95)
Норма Хср S2 S ΔХ ε, %
Эстриол 0,45-0,55 0,489 0,01336×10-2 0,01156 0,00965 1,97
Декспантенол 90,0-110,0 100,20 2,136 1,462 1,22 1,22
Таблица 2
Результаты испытаний суппозиториев с эстриолом и декспантенолом (пример 2)
Компоненты Содержание в одном суппозитории, мг (n=6; Р=0,95)
Норма Хср S2 S ΔХ ε, %
Эстриол 0,45-0,55 0,484 0,2787×10-4 0,00528 0,00607 1,25
Декспантенол 90,0-110,0 100,20 0,19842 0,44544 0,512 0,51
Таблица 3
Результаты испытаний геля с эстриолом и декспантенолом (пример 3)
Компоненты Содержание в одном суппозитории, мг (n=6; Р=0,95)
Норма Хср S2 S ΔХ ε, %
Эстриол 0,95-1,05 0,986 0,012375×10-2 0,011124 0,0101 1,02
Декспантенол 47,5-52,5 49,95 0,59937 0,774193 0,7035 1,41
Таблица 4
Результаты испытаний геля с эстриолом и декспантенолом (пример 4)
Компоненты Содержание в одном суппозитории, мг (n=6; Р=0,95)
Норма X S2 S ΔХ ε, %
Эстриол 0,95-1,05 0,977 0,012292×10-2 0,011087 0,0101 1,03
Декспантенол 47,5-52,5 49,13 0,19917 0,44628 0,4055 0,83

Как видно из полученных результатов, предлагаемый способ позволяет с высокой точностью определить содержание эстрогена и декспантенола в лекарственном препарате.

1. Способ определения содержания эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате, включающий извлечение эстрогена и декспантенола из анализируемого лекарственного препарата, хроматографирование извлеченных эстрогена и декспантенола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с разделением на колонке С18 размером 50×2,0 мм, заполненной носителем с зернением 2,0 мкм, или размером 150×4,6 мм, заполненной носителем с зернением 5 мкм, с использованием в качестве подвижных фаз смесь 0,05%-ного раствора кислоты ортофосфорной (рН 2,4) с ацетонитрилом для хроматографии в соотношении от 90:10 до 95:5, в режиме линейного градиента на хроматографе с использованием ультрафиолетового детектора, после чего на основании расчетных формул определяют содержание эстрогена и декспантенола в двухкомпонентном лекарственном препарате.

2. Способ по п.1, где носитель представляет собой обращенно-фазовый носитель.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других исследованиях для определения троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственных препаратах.

Изобретение относится к устройствам подачи жидкости, а именно к насосам, применяемым для подачи жидкости в жидкостной хроматографии. .

Изобретение относится к высокоэффективной жидкостной хроматографии, может быть использовано при анализах больных в процессе лечения. .

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения сини анти-форм соединений цефалосперинового ряда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к количестве1П1ому определению 3,4-бензо(а) пирена, 7,I2-диметилбензантрацена, 20-метилхолантрена (I). .
Наверх