Патент ссср 160618

 

Союз Советских

Социллистических

Ркпу блик

QIINCAH NE

ИЗОВРКХКНИЯ к ьвтовскомт свиьатиластвУ № 160618

Класс

42l, 3;

МПК

О 01п

Заявлено 17.XI I.1962 (№ 808746/31-16) Гос дмственны н комитет по лелле

ИЗОБРЕТЕННЙ 11 ОТКРЫТИ1т

СССР

Опубликовано 1964. Бюллетень № 4

УДК

Подпасная группа № 50

М. Ф. Гулый и P. Г. Дегтярь

СПОСОБ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЬ!

В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

Предмет изобретения

Известны способы ферментативного определения глюкозы в биологических жидкостях, например крови, с использованием сухих очищенных препаратов глюкооксидазы.

Указанные способы предусматривают применение пероксидазы, полученной из хрена, Процесс выделения пероксидазы при этом очень трудоемок и требует переработки большого количества сырья, имеющегося в достаточном количестве лишь в определенные сезоны года.

В предлагаемом изобретении в качестве источника пероксидазы используют гемоглобин крупного рогатого скота, являющийся доступным и весьма просто получаемым в промышленном масштабе препаратом.

Для определения содержания глюкозы в крови в соответствии с предлагаемым способом в центрифужной пробирке смешивают

1,1 мл раствора 0,9%-ного раствора хлористого натрия, 0,4 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка и 0,4 мл 0,3 н. раствора едкого натра. К смеси добавляют 0,1 л1л крови и центрифугируют при 3000 — 4000 об)мин в течение

5 мин. К 1 мл надосадочной жидкости приливают 3 мл реактива для определения глюкозы и смесь осторожно перемешивают. Развивающуюся синюю окраску колориметрируют с красным светофильтром через 35 яин после добавления реактива. Количество глюкозы рассчитывают по стандартной кривой, которую строят для каждого опыта. Колориметрирование проб осуществляют против контроля.

Для построения стандартной кривой осуществляют те же операции, но вместо крови берут стандартные растворы глюкозы, приготовленные на насыщенном водном растворе бензойной кислоты и содержащие 50, 100 и

1о0 мг % Глюкозы.

При приготовлении реактива для определения глюкозы ферментативным методом к

90 л л 0,25-М ацетатного буферного раствора (рН=4,8) добавляют 2 л1г сухого препарата глюкозооксидазы и 8 мг сухого препарата кристаллического гемоглобина крупного рогатого скота. Смесь перемешивают, приливают 1 мл 1%-ного раствора о-толидина в абсолютированном спирте и доводят объем до

100 л1я 0,25-М ацетатным буферным раствором. Реактив готовят за 1 — 2 час до употребления и хранят на холоду в темных закрыты.; склянках не более 2 суток.

Способ ферментативного определения гснокозы в биологических жидкостях, например крови, отличающийся тем, что в качестве источника пероксидазы используют гемоглобин крупного рогатого скота.