Способ диагностики аутоиммунных заболеваний

 

Изобретение относится к медицине , а именно к иммунологии. Пелью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что лимфоциты крови облучают в течение 2-5 мин светом длиной волны 265-300 нм. Диагностику заболевания проводят по затуханию фосфоресценции мембраны клеток , которое позволяет оценить их дефектность . При снижении фосфоресценции до 30% и более от нормы диагностируют заболевание.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСА ЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ТКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСНОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ (51)5 G 01 N "/?" (21) 4447494/14 (22) 24.06.88 (46) 23.0?.91. Бюл. Р 7 .(71) Институт фотобиологии АН БССР и Минский государственный медиФ цинский институт (72) F..C.Лобанок, В.N.Èàæóëü, С.В.Конев, Г.П.Матвейков и Е.С.Калия (53) 616-0.89. 9 (088.8) (56) Добрецов Г.F.. и др. Измерения в мембранах лимфоцитов при бронхиальной астме. — Иммунология, 1981, б, 68.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Пелью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Из периферической крови выделяют лимфоциты на градиенте фиколл-верографин. Клетки дважды отмывают изотоническим раствором или средой 199 и готовят их взвесь с концентрацией

4-6 ° 10 кл./мл. Полученную взвесь

6 лимфоцитов инкубируют 45 мин при 37 С.

По окончании времени инкубации клетки ресуспендируют и переносят в кювету в объеме 0,4 мл. После удаления кислорода из суспензии лимфоцитов в образце возбуждают триптофановую фосфоресценцию путем облучения в течение 3-5 с ультрафиолетовым светом спектрального диапазона 2652 (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АУТОИММУННЫХ

ЗАБОЛЕВАНИЙ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Пелью является повышение точности способа.

Пель достигается тем, что лимфоциты крови облучают в течение 2-5 мин светом длиной волны 265-300 нм. Диаг.ностику заболевания проводят по затуханию фосфоресценции мембраны клеток, которое позволяет оценить их де" .фектность. При снижении AochnpecUeHции до 30Х и более от нормы диагностируют заболевание.

300 нм и после прекращения облучения регистрируют кинетику затухания Ас:форесценции в цифровой или аналого вой формах, т.е. определяют время жизни быстрого компонента фосфоресценции и на основании полученных результатов судят о наличии дефектности мембран лимфоцитов.

При этом возбуждается триптофановая фосфоресценция при комнатной тем пературе, обусловленная излучательной дезактивацией элек1 ронно-возбужденных триплетных состояний триптофановых остатков белков ° Кинетическая кривая затухания исследуемых образцов в пределах двух порядков интенсивности имеет биэкспоненциальный характер (т.е. представляет собой сумму двух экспонентов) и определяется соотношением

1629787

t t

I(t) = I е — — +? е -— л у где I — интегральная интенсивность свечения в.любой момент 5 времени после прекращения возбуждения

I и c — соответственно начальная

0 интенсивность и время жизни быстрого компонента свечения и м- начальная интенсивность и

Л м время жизни медленного компонента свечения„ е — основание натурального логарифма; и и ь — соответствуют промежуткам

Я времени, в течение которого начальная интегральная интенсивность быстрого и медленного компонентов соответственно уменьшается в е (2,72 раз).

При уменьшении времени жизни быстрого компонента более чем на 55 мс или на 30,5Х нормы судят о. наличии нарушения структурного состояния мембран- клеток.

Пример 1. Больная. Жалобы при поступлении: постоянные ноющие боли в суставах, боли в области сердца, одышка при физической нагрузке, общая слабость, выпадение волос, головные боли.

Больна в течение 2,5 лет, после 35 переохлаждения появились боли и отечность в коленнйх суставах, затем присоединились боли в других суставах и мышцах, отмечает повышение температуры до 38 С, потерю в весе. Поставлен диагноз СКВ.

При объективном осмотре: кожные покровы чистые, бледной окраски. Суставы внешние не изменены, движения в полном объеме болезненные. Дыхание в легких везикулярное. Тоны сердца приглушены, систолический шум над всеми точками, ритм правильньп1, пульс 78 у 1. в мин, АП 110/70 мм рт.ст.

Живот мягкий, безболезненный, печень 50 и селезенка не увеличены. Видимых отеков нет.

Анализ крови: Нв 108 г/л, лейкоциты 4,1«10 1 /л: С 51Х, П 6Х., Л 28Х, M 9X., Э 5Х, СОЭ 35 мм/ч. Общий белок

78 г/л, Kg глобулины 9 ЗХ, II - 28 6Х, СРП 1+, нейреминовая кислота

29,4 ммоль/л, 1,Я клетки единичные в препарате; уровень антител к ДНК (реакция Фарра) — 15 мкг/мл, уровень комплемента 38,8 СН О. Реакции на

РФ вЂ” отрицательные. Иммунные комплексы 260 ед.опт.пл. ?8Г 24,8 г/л, I@M 2,3 г/л, I8A 4,9 г/л, Т-лимфоциты 39 ; В-лимфоциты 12Х, "null" лимфоциты 49Х; Т-супрессоры 7Х," .Т-хелперы 31Х.

Анализ мочи: Уд.вес 1012, .белок

1-3

0,3 г/л, сахар — нет, L, пло2-5 ский эпителийДиагноз: СКВ, активная фаза, II ст. активности,,хроническое течение, люпус-нефрит, полиартрилгия, сиокардиострофия, Н<.

Из стабилизированной крови больного CKH в градиенте плотности фикоол-верографина выделены лимфоциты и дважды отмыты средой Хенкса. Приготовлена их взвесь с концентрацией

6 ° 10 клеток/мл. Клетки инкубировали б

45 мин при 37 С, затем ресуспендировали, в объеме 0,4 мл переносили в еварцевую кювету и после удаления кислорода измеряли время жизни быстрого компонента ТФКТ лимфоцитов. При этом ьу.равнялось 93 мс, т. е. степень снижения от контроля составляла 87 мс или 48Х, что свидетельствует .о дефектности мембран лимфоцитов обследованной больной.

У данной больной наблюдаются значительные отклонения от нормы подав-, ляющего большинства иммунологических параметров, в том числе показателей клеточного звена иммунной системы, свидетельствующих о патологических изменениях иммунокомпетентных клеток.

Таким образом, предлагаемый спо- .. соб позволяет повысить точность и информативность выявления дефектности мембран лимфопитов при иммунопатологических заболеваниях. Более высокая точность способа обусловлена возможностью исследования нативного состояния мембран интактных клеток, так как роль мембранного зонда играет природная аминокислота триптофан, входящая в состав мембранных белков.

Предлагаемый способ позволяет исключить ряд дополнительных процедур: введение дефицитных, дорогостоящих зондов, дополнительньп учет светорассеяния образцов клеток, введение поправки на флуоресценцию несвязан162978 ного с мембраной зонда, сложный математический расчет.

Способ диагностики аутоиммунных заболеваний, путем исследования мембран лимфоцитов, облучение их ультрафиолетовым светом и диагностики заболевания по наличию клеток с

Составитель Л.Стебаева

Техред N.Äèäûê Корр е кт ор М; Шар оши

P еда к т ор А. 1 1анд ор

Заказ 433 Тираж 389 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

Формула изобретения .5

6 дефектными мембранами, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, облучение проводят в течение 2-5 мин, при зтом для облучения используют свет длиной волны 265-300 нм, а дефектность мембран определяют по скорости затухания фосфоресценции и при снижении дефектности мембран до 307 и более диагностируют заболевание.