Способ получения антивирусных полипептидных комплексов

 

Изобретение относится к бнохимни и может быть использовано при изучении биохимических процессов, обуславливающих антивирусную резистентность клетки. Целью изобретения является упрощение способа и увеличение антивирусной активности,. Для этого фракционируют клеточный экстракт , извлекаемый из клеток посредством обработки последних слабой кислотой и нагреванием. Способ позволяет получать полипелтидные комплексы как из инфицированных, так и нативных клетоКо Потучаемые комплексы обладают выраженной активностью в отношении вирусов гриппа и ВЭЛ.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧ ЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (1Э) (11) А1 (1)5 А 61 К 17/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 4477365/13 (22) 24.08.88 (46) 15.03.91. Бюл. Р 10 (71) Белорусский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии (72) 10.Е.Клингер (53) 576.8.094.29(088.8)

:(56) Гаузе Г.Ф. Лекции по антибиоти. ° кам, М., 1949, с. 123. !!апот В.С. Нуклеазы, М.: Медицина, 1968. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИВИРУСНЫХ

ПОЛИПЕПТИДНЫХ КОМПЛЕКСОВ (57) Изобретение относится к биохиИзобретение относится к биохимии и может быть использовано при изучении биохимических процессов, обуславливающих антивирусную резистентность клетки.

Целью изобретения является упрощение способа и увеличение антивирусной активности.

Для этого клеточный экстракт получают кислотной обработкой ткани и нагреванием, после чего клеточньп. экстракт защелачивают до рН 11,011,5, с помощью !!а СО, нейтрализуют НС1 и вновь защелачивают NaOH до рН 11,0-11,5. Конечный продукт получают из надосадка после фракционнрования этанолом путем упаривлния и закисления.

Пример 1 ° 10 флаконов с монослоем фибробллстов эмбрионов кур (ФЭК), содержащих 5 млн клеток и

5 мл подлерживлпi(ей среди N 199, дважды заморажи»»4 т и разморлживают, мии и может быть использовано при изучении биохимических процессов, обуславливающих антивирусную резистентность клетки, 1!елью изс бретения является упрощение способа и увеличение антивирусной активности.- Для это1о фракционируют клеточньп экстракт, извлекаемый из клеток посредством обработки последних слабой кислотой и нагреванием. Способ позволяет получать полипептидные комплексы как из инфицированных, так и нативных клеток. Получаемые. комплексы обладлнт выраженной активностью в отношении вирусов гриппа и B3J1 ° после чего клеточную суспензию объединяют. Гомогенат злкисляют 2 н. С

НС1 до рН 2 Ir нагревают 5 мин на кипящей водяной бане, охлаждают и центрифугируют при 5000 об/мин 20 мин.

Осадок отбрасывают, а клеточный экстракт доводят 207-кнn1 Na>(:0> до рН 11,0-11,5. Виплвппгй осадок удаляют центрифугировлнием при 5000 об/мин

20 мин. Супернатант сливают и нейтра- Ьа) лируют 5 í. НС1, после чего опять защелачивлют 5 и. 11аОН до рН 11,011,5. К 65 мл полученного раствора приливают двойной объем (130 мп) этанола и оставляют в холодильнике при 4 С на 14 ч. Выпавппгй осадок удаляют центрифугпрованием при 5000 об/мин,фЬ

20 мин, после чего раствор нейтрализуют 2 н. НС1 и образовавшиеся

200 мл раствора упаривают до 10 мп, концентрируя его таким образом 20 раз.

Далее раствор подкисляют до рН 2 с помощью 2 н. НС1 и вьп1авший осадок

I 6342Â3

Формула изобретения

Гоставитель И. Тареева

Техред Л.Олийнык Корректор С.Черни

I r; f f1 I Т О13 Н . Г O p 13 а Т

712 Тираж 447 Подписное

i Ill!ill!:1 I осудар(тff нного комитета по изобретениям и Открытиям при ГКНТ СССР

1 3(>3, 1lоскпа, Ж вЂ” 35, Раушская цаб., д. 4/5 .!> .1>з зсдс>веццо-и эд;f T >ьский комбинат Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101

»тдсляют це>> грцфуг>>poваt>!!Сь1 при

5000 Обэ/f(>t«, Надосадочцу>о жидкость слц>>ают, а ос >дnк растворл!от в 0,025 М

IIII!(-(3yf»ape рн 8,5 >i испо;11,зу!от для

1!с с,itn;tnDrq ff>tf I.

Образец хроматографпруют ца пласI II I!fI?I "Г>>луфоц" !3 разделя>ошей систе.>с Il-6óòoцол:уксусная кислота:вода (/.: 1: 2) с Ifpost!3!!elf>te 17-ным нпнгидри1О

Хроматогра11>ия показьп>ает, что ,>з с ц с ос J olfT пз пяти полицептидов соотlloтс.тву>о>>О>".1!! 1 Ф: О, 25; О, 20;

О !6 !,, !2 000.

И 3! f хр»;.. этограф эц> образца ца сефа-

15 денс с 1 -50 ус ацаlэлпВа>от > что Он вы r 1 I > I,JI! I J I J i к О.! 1 С Dfnll ° 1 !а С ° 3 О О О Од+

1!J(JJJ, I . IЭ f !13 (Р К>1, 3 If TII 13 >IP?f C I>f t?(С ВО>>С ГВ

20 ,J у t(1!tffoãn .13 .П>пептидцого комплекса ! о>:ткоць>, со;>ержаг>пе 1 млц клет ок

> сi I(1;нося r yc гриГ!па 1 1 / J(os tock/

/ /7 1 (Il:p,.! 1 ) 13 дозе 0,0001 TII(IС>КП 1!1>уГу>Э СЕРИЮ КЛЕТОК ИН4>ицыiJJ1р уcoif !>енесу эльc>.0I о эццефало- 25 !! i(..! i I f1;in f;3дей (ВЭЛ-230) с такой же

>ц жсст>;Оцц»сть>о, что и гирус гриппа °

I1 о>ц>тные Образцы вносят препарат в i(1o .. ? ?>г ца флакон. Эта доза це т»кс!! >ц!111 .>11!! клеток, В контрольные ,эбэ(эа.э>В I црс11:>рат це 1>носят. Учет титр эц 33ifp с . в осущ(с TI>ëÿ!(T! по цитопати 3сi I;o 1", <,(- IСT>311ю (111111),, !О, 1;113 Пе f!! Iс 131 II; ". С(1 I р>! ПП(1 СО СТЭВЛЯ (т,О 11 П!."„/?л, а вируса ВЭЛ

3, О 11, I I!. I,, /мл.

lI р и м е р 2. Осуществл>пот полу J i . t1 1 (3 111 Т> f131 t P $C Ц (Э Г О П ОЛИ П (. П Т > >Д Ц О Г 0 .;(!Яfltoкс.i из If!f3!J>tif>IPoffatf!f(i?(клеток., . з! этого моно(..1»й к.teTn!(ФЭК ицфици40 руют вирусом ВЭЛ множественностью

О, 1 ТН>1/клетка, Через 1 сут после

>и!фицировацпя клетки обрабатывают аналогично примеру 1. Полученный препарат представлен шестью полипептидами с РФ 0,25; 0,20; 0,16; 0,12;

0,10; 0,00.

Хроь!атоградэия препарата на сефадексе Г-50 показывает, что его мол. мас„ составляет 33000 1000 Д, Препарат аналогично примеру 1 выходит одним пиком.

Антивирусное действие препарата, полученного из инфицированных клеток, устанавливается аналогично примеру 1, В этом случае препарат подавляет раз» множецие вируса гриппа на 3,5 1д

ТЦД /кп, а вируса ВЭЛ на 6,0 1g

ТИД 0/мл .

Способ получения антивирусных полипептидных комплексов, заключающийся в получешш клеточного экстракта кислотной обработкой ткани с последующим фракциоцировацпем этанолом и вьделением целевого продукта, о т л и ч а

>о шийся тем, что, С целью упрощения способа и увеличения антивирусной активности, клеточный экстракт получают из фибробластов эмбрионов кур, кислотную обработку осуществляют цагревацием при рН 1-3, после чего клеточный экстракт защелачивают Иа СО з до рН 11, 0-11, 5, нейтрализуют кислотой и вновь защелачивают до рН 11,011,5, а целевой продукт вьделяют из надосадка путем упаривания и закисления .