Противоаллергический препарат

 

Использование: медицина, фармакология . Сущность изобретения: гексапептид формулы Тир-Д-Ала-Фен-ЛейТлю-ОН применяется в качестве противоаллергического препарата. Препарат обладает более высокой эффективностью. 3 табл.

„„ЯЦ„„2000119 C (я)л А 61 К 37/02

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам

„- Ок „ „

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, „ ". в",.

К ЛАТЕНТУ (54) ПРОТИВОАЛЛЕРГИЧЕСКИИ ПРЕПАРАТ (57) Использование: медицина. фармакология.

Сущность изобретения; гексапептид формулы Тир-Д-Ала-Фен-Лей-Глю-ОН применяется в качестве противоаллергического препарата. Препарат обладает более высокой эффективностью. 3 табл.

К)

О

О

О

О

Г) (21) 4953730/14 (22) 14,06.91 (46) 07.09.93. Бюл, М 33 — 36 (71) Институт питания AMH СССР, Всесоюзный научный центр экспертизы лекарственных средств (72) Мазо В.К., Кржечковская B,В., Марокко

И.Н., Виноградов В.А., Полонский В.М. (73) Полонский В.М.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лекарственным средствам, применяемым в аллергологии, и может найти применение для лечения и профилактики аллергических реакций.

Проблема разработки новых эффективных лекарственных средств для лечения и профилактики аллергических заболеваний, в частности пищевых аллергий, продолжает оставаться достаточно актуальной. В настоящее время отмечается устойчивая тенденция к повышению частоты аллергических заболеваний, различными формами которых страдает до 25 (, населения. При этом наблюдается и усилие тяжести аллергических реакций, которые становятся поливалентными (Маслинский Ц. Патогенеэ аллергических процессов в клинике и эксперименте. М.; Медицина, 1979, с. 132 — 140;

Лопаткин Н,А.. Лопухин Ю.M. Эфферентные методы в медицине. М.: Медицина, 1988, с.

6-21). Повышение частоты и усилению тяжести пищевых аллергий способствует широкое применение всевозможных химических веществ в сельском хозяйстве и пищевой промышленности, нивелировка сезонных и климатогеографических особенностей пита. ния различных групп населения, а также недостаток белковых пищевых продуктов в рационе у 757; населения во всем мире (Маслинский Ц. Патогенез аллергических процессов в клинике и эксперименте. — М.:

Медицина, 1979, с. 132 — 40; Покровский А.

Метаболические аспекты фармакологии и токсикологии пищи, — М.: 1979, с. 183;

Дж..Дик. Иммунологические аспекты инфекционных заболеваний. — М,: Медицина, 1982, с,574).

В настоящее время для лечения различных аллергических заболеваний широко применяются различные антигистаминные препараты, Типичным представителем этого класса лекарственных средств является супрастин (гидрохлорид N-диметиламинозтил-N-(парахлорбенэил)-аминопиридина), Супростин характеризуется не только антигистаминными свойствами, но применяется также в острых случаях анафилактических реакций. Высшие дозы супрастина для взрослых при применении внутрь составляют: разовая — 25 мг, суточная — 75 мг, в отдельных случаях — до 150 мг. При внутримышечном применении разовая и суточная дозы супрастина составляют 20 и 40 мг со2000119

Данный препарат является синтетическим аналогом эндогенных опиоидных пептидов. Представители этого класса соединений обладают выраженным иммуномоделирующим действием (Morley J.Å.et

al., Neuropeptides: conductors of the immune

orchestra, Ие Scl, 1987, ч.41. р. 527-544).

В то же время в доступной литературе отсутствуют сведения об использовании эндогенных опиоидных пептидов и их синтетических аналогов в качестве

55 ч ответственно (Машковский М.Д. Лекарственные средства. — М.: Медицина, 1984, ч,1, с.307 — 320; Клюев М,А. Лекарственные средства, применяемые в медицинской практике о СССР. — М.: Медицина. 1989, с. 369). По сравнению с другими противоаллергическими препаратами (димедрол, дипразин, таоегил и т.д.) супрастин отличается меньшим спектром побочных реакций и противопоказаний. В то же время оказываемый супрастином седатионый эффект, проявляющийся в сонливости и общей слабости, сграничивает его использование у пиц, профессиональная деятельность которых требует быстрой доигательной и психической реакции.

Необходимо отметить, что среди многочисленных препаратов, используемых для лечения аллергических заболеваний, отсутствуют лекарственные средства, являющие- 20 ся производными и аналога ли эндогенных биологических активных соединений.

Целью изобретения является создание препарата для печения и профилактики (в виде пищевой добавки) оллергических реак- 25 ций, обладающего повышенной активностью, низкой токсичностью и не вызывающего нежелательных побочных реакций.

Поставленная цель достигается приме- 30 нением в качестве средства для подавления аллергических реакций гексапептида Т!прД-Ала-Гли-Фен-Лей-Глю-ОН.

Синтез предлагаемого препарата производился из двух фрагментов, полученных 35 методом последовательного наращивания вминокислотной цепи. Препарат представляет собой nopollloK белого цвета, хорошо растворимый в дистиллированной воде, физиологическом растворе, спирте и не рас- 40 творимый в эфире, этилацетате. бенэоле, гексане. Применение препарата не сопровождалось изменениями в клеточном соста-ве крови. основных гемодинамических показателях и поведении эксперименталь- 45 ных животных. При изучении острой токсичности препарата ЛД50 составляет 250 мг/кг. противоаплергических лекарственных препаратов, Изучение противоаллергического действия заявляемого препарата в сравнении с супрастином было проведено на 659 морских свинках самцах с массой тела 250-300 г. Пищевую сенсибилизацию животных осуществляли с помощью мегода, разработанного в институте питания АМН СССР (Шатерникоо В.A., Морокко И.Н., Пятницкий

Н.Н. и др, Экспериментальное воспроизведение пищевой анафилаксии. Вопросы питания, 1982, 1+ 2, с. 27-31). 8 качестве пищевых аллергенов использовали куриный ооальбумин (OBA) иги цельное пастеризованное коровье молоко (ЦПКМ). Сенсибилиэацию животных с помощью ОВА (50 мг) или

ЦПКМ (3 мл) проводили в течение 3 дней.

Через 7 дней состояние сенсибилизации у животнь,х оценивали путем воспроизведения активного анафилактического шока (ААШ), который вызывали внутривенным введением разрешающей дозы гомологичного белка: 5 мг QBA о 0,5 мл физиологического раствора или 0,5 мл ЦПКМ, содержащего 7 мг белка, ЦПКМ предварительноо цетрифугировали и для внутривенного введения испольэовали его фракцию. свободную от липидоо и клеточных элементов. Тяжесть AALU оценивали по уровню летальности и числу животных с судорожными проявлениями, а также по величине анафилактическго индекса (Welgle W., Cochrane

C„Dixon F„Anaphyiactogenlc properties of

soluble antigen-antibody complexes ln the

qulnea-pigs and rabbits, Л lmmonology, 1960, ч.85, р. 469-477), Предлагаемый препарат (10 и 100 мкг/кг) или супрастин (100 и 1000 мкг/кг) вводили морским свинкам ежедневно внутрибрюшинно в течение трех дней в физиологическом растворе или внутрь в физиологическом растворе или ЦПКМ также в течение трех дней. При выборе доз супрастина исходили из того, что доза 100 мкг/кг близка к его максимальной разовой дозе для человека.

В связи с тем, что гистамин является основным медиатором аллергических реакций немедленного типа и воспаления (Wahn

U., Hlstamln als Mediator der allerglschen

Reaktlon, Allergologlc. 1985, bd, 5, s.47-50), оценивали, кроме того, влияние препарата и супрастина на чувствительность к гистамину, с целью чего предварительно определяли ЛД50 гистамина по форМуле

Г.H,Ïåðøèía (Кудрин А.Н.. Пономарева Г.Т.

Применение математики в экспериментальной и клинической медицине. — М,: Медицина, 1967, c,312). В этом эксперименте

2000119

45

55 исследуемые препараты также вводились внутрибрюшинно и внутрь в течение трех дней до гистамина.

Изучение влияния предлагаемого препарата и супрастина на развитие пищевых аллергических реакций было проведено в двух сериях экспериментов. В первой серии препараты вводились одновременно c проведением пероральной сенсибилизации

ОВА и ЦПКМ. Во второй серии препараты вводились уже после окончания введения аллергонов сенсибилиэированным живоTHblM в течение трех дней перед воспроизведением ААШ.

Во всех экспериментах контрольным группам животного вместо предлагаемого препарата и супрастина внутрибрюшинно или внутрь вводились физиологический раствор или ЦПКМ.

Определение достоверности различий между группами по тяжести ААШ и гистаминового шока проводили по методу углового преобразования Фишера (Гублер Е,В. Вычислительные методы анализа и распознавание патологических процессов. — М..

Наука, 1978, 365 стр.), В табл. 1 представлены данные о влиянии предлагаемого препарата и супрастина, применяемых в период сенсибилизации, на развитие тяжести пищевых аллергических реакций, вызываемых ОВА и ЦПКМ, При сенсибилизации ОВА одновременное внутрибрюшинное введение предлагаемого препарата приводило к зависимому от дозы снижению летальности и частоты судорожных проявлений при ААШ. Уже в дозе 10 мкгl кг препарат достоверно снижал частоту судорожных проявлений (с 82,2 до

62,57ь). В дозе 100 мкг/кг препарат вызывал выраженное и статистически значимое снижение летальности (в 3,2 раза) и частоты судорожных проявлений ААШ (в 2,2 раза).

При этом анафилактичекий индекс снижался на 46,7, Супрастин в 10 раз более высокой дозы также достоверно снижал летальность и частоту судорожных проявлений ААШ. Однако если по влиянию на летальность (снижение в 2,9 раза) эффективность супрастина приближалась к эффективности предлагаемого препарата, то по влиянию на частоту судорожных проявлений супрастин значительно уступал последнему. При этом анафилактический индекс снижался под влиянием супрастина в дозе 1000 мкгlкг лишь на 27,47;. При использовании супрастина в дозе 100 мкг/кг он снижал анафилактический индекс всего на 17 (,, т,е. еще более резко уступал по эффективности предлагаемому препарату.

Добавление препарата в ЦПКМ эначитель5

35 но ослабляло выраженность аллергических реакций при сенсибилизации последним.

При этом уже в дозе 10 мкг/кг препарат достоверно снижал частоту судорожных проявлений ААШ, В дозе 100 мкг/кг заявляемый гексапептид снижал летальность и частоту судорожных проявлений в 2,2 и 2,5 раза соответственно.

В табл. 2 представлены данные о влиянии предлагаемого препарата и супрастина, применяемых после окончания сенсибилиэации, на развитие тяжести пищевой аллергической реакции, вызываемой ОВА.

В. этих экспериментальных условиях препарат обладал выраженным противоаллергическим действием как при внутрибрюшинном, так и при пероральном введении.

При внутрибрюшинном введении препарат уже в дозе 10 мкг/кг обладал выраженным противосудорожным действием, хотя вызываемое им снижение летальности при ААШ не являлось статистически значимым. В дозе 100 мкг/кг препарат при внутрибрюшинном введении достоверно снижал как летальность, так и часготу судорожных проявлений (в 2,4 и 2,1 раз соответственно). При пероральном введении препарат не влиял на тяжесть ААШ в том случае, если он вводился в физиологическом растворе. В то же время при пероральном введении в ЦПКМ препарат оказывал даже более выраженное нротивоаллергическое действие, чем при внутрибрюшинном введении. При этом он снижал летальность и частоту судорожных проявлений ААШ в 3,2 и 3,4 раза соответственно, а анафилактический индекс на

63,27;. Одно ЦПКМ даже несколько увеличивает частоту судорожных проявлений ААШ при вызываемой ОВА сенсибилизации. В отличие от предлагаемого препарата супрастин в этих экспериментальных условиях усиливает тяжесть проявлений ААШ как при внутрибрюшинном, так и при пероральном в веден ии.

В табл. 3 представлены данные о влиянии предлагаемого препарата и супрастина на чувствительность морских свинок к гистаминовому шоку, вызываемому внутривенным введением ЛД50 гистамина.

При введении внутрибрюшинно препарата в дозах 10 и f090 мкг/кг вызвал достоверное снижение летальности и ри введении животным ЛД50 гистамина. При внутрибрюшинном введении не отмечено зависимость антигистаминного эффекта препарата от дозы, Максимальный эффект наблюдался при введении препарата в дозе 10 мкг/кг, в которой его терапевтическая эффективность была сходна с эффективностью супрастина в дозе 1000 мкг/кг, т.е. предлагаемый пре2000119

Тв0лицв 1 различие с кггнгроалнгами гр1гпггвлги P < 0.05 "р к 0.01 парат был в 100 раз активнее супрастина, При пероральном введении супрастин не оказывал антигистаминного действия. В то же время предлагаемый препарат в дозе

100 мкг/кг при пероральном введении в цПКМ снижал уровень летальности более чем в 2 рава; При пероральном введении в физиологическом растворе препарат не обладал антигистаминной активностью. Однако ЦПКМ также не влияло на тяжесть вызываемого гистамином шока.

Таким образом, предлагаемый препарат вызывает выраженное повышение толерантности животных к AALU и гистамину.

Прортивоаллергическое действие препарата проявлялось как при его одновременном введении с аллергенами, так и при введении уже на фоне развившейся сенсибилизации.

При одновременном введении с аллергенами препарат и супрастин сходным образом преотвращали летальность при AAW. но по активности он в этом случае приблизительно в 10 раз превосходил супрастин. Кроме того, по сравнению с супрастином препарат значительно более эффективно блокировал развитие судорожных проявлений AALU. В экспериментальной модели гистаминового шока препарат в 10-100 раз превосходил супрастин по активности. В отличие от супрастина. который не оказывал терапевтического действия в условиях уже развившейся сенсибилизации, предлагаемый препарат и в этих условиях обладал высокой противоаллергической активностью. Важнейшим до5 стоинством препарата является его высокая противоаллергическая эффективность при пероральном введении в молоке, что позволяет существенным образом расширить возможности его применения.

10 Результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод, что предлагаемый препарат может быть успешно применен для лечения и профилактики (в виде пищевой добавки) аллергических реакций, 15 прежде всего пищевого генеза. Разовая доза препарата может составлять 1-10 мг. Для инъекционного введения препарат может выпускаться в ампулах и флаконах. где в качестве растворителя могут быть испольэо20 ваны дистиллированная вода. Физиологический раствор или 5 -ный раствор глюкозы, Для перорального применения препарат может выпускаться в таблетках или капсулах, в которых в качестве наполни25 теля возможно использование сухого молока или его ингредиентов.

Формула изобретения

Применение гексапептида формулы

Тир-Д-Ала-Гли-Фен-Лей-Глю-ОН в качестве

30 противоаллергического препарата.

2000119 аэличие с контрольной группой: * P < 0,05; * Р < 0,01 взличие с контрольными группами: *Р < 0.05; **Р <001

Таблица 2

Таблица 3