Способ получения каллусной ткани бегонии краснолистной
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию растительных тканей, и может применяться в садоводстве и фармакологии. Целью изобретения является повышение интенсивности каллусообразования. Способ состоит в том, что листовые сегменты бегонии краснолистной культивируют в темноте на жидкой модифицированной питательной среде Мурасиге-скуга с использованием мостиков из обездоленных фильтров. 1 табл. 1 з.п.ф-лы.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
tst)s С 12 N 5/04
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
170 (21) 4651436/13 (22) 20,02.89 (46) 23.07.91. Бюл. ¹ 27 (71) Центральный ботанический сад
АН БССР (72) С,В. Горленко, Л.В. Фролова и В.А. Тимофеева (53) 578,085.23 (088.8) (56) Takayama S, et а1, Factors affecting
differentiation growth in vitro and a
masspropagatlon scheme for Begonia x .hiemalis. — Sc. hortic., 1982, v.16, т.1, р. 65-75, Изобретение относится к биотехнологии, в частности к технологии выращивания пересадочных культур растительных тканей и может быть использовано в сельском хозяйстве, в час-.ности цветоводстве закрытого грунта и медицинской промышленности.
Целью изобретения является повышение интенсивности каллусообразования.
Способ состоит в том, что стерильные эксплантаты молодых листьев бегонии краснолистной помещаются на мостики из обеззоленного фильтра, помещенного концами в модифицированную жидкую питательную среду; минеральные соли и микроэлементы по Мурасиге и Скугу, витамины, мг/л: пиридоксин 0,1; тиамин 0,1, никотиновая кислота
0,5; инозитол 40; сахароза 3%; 6-БАП 1;
2,4-Д 1; с последующей инкубацией при
25 С в условиях непрерывной темноты.
Пример 1. В качестве эксплантатов используют сегменты молодых листьев бегонии, содержащие паренхиму, проводящие ткани и камбий, которые показали в ходе изучения способности эксплантатов различ;„,5U„„1664841 А1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАЛЛУСНОЙ
ТКАНИ БЕГОНИИ КРАСНОЛИСТНОЙ (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию растительных тканей, и может применяться в садоводстве и фармакологии. Целью изобретения является повышение интенсивности каллусообраэования. Способ состоит в том, что листовые сегменты бегонии краснолистной культивируют в темноте на жидкой модифицированной питательной среде Мурасиге-Скуга с использованием мостиков из обездоленных фильтров. 1 з.п.ф-лы, 1 табл. ного происхождения высокую эффективность каллусообразованичя (90%). Оптимальный вариант размера листового эксплантата 1,0х1,0 см (эффектиность каллусообраэования 90%), Стерилизацию тканей проводят 0,1%-ным раствором диацида в течение 30 мин с последующим 5-кратным промыванием в стерильной дистиллированной воде (выход стерильных эксплантатов
82-87%). Индукцию каллуса листовых эксплантатов проводят на модифицированной питательной среде следующего состава, мг/л:
Макроэлементы: натрий фосфорнокислый однозамещенный 170 азотнокислый аммоний 1650 кальций хлористый 440 калий азотнокислый 1900 магний сернокислый 370 калий фосфорнокислый однозамещенный железо сернокислое закисное 27,8
1664841
40
2 ЕДТА 37,3
Микроэлементы: борная кислота 6,2 марганец сернокислый 22,3 цинк сернокислый 8,6 калий иодистый 0,83 хлорид кобальта 0,025 купорос медный 0,025 натрий молибденовокислый 0,25
Витамины: пиридоксин 0,1 тиамин 0,1 никотиновая кислота 0,5 инозитол 40 сахароза 30000
6-БАП 1
2,4-Д 1
В тщательно вымытую и высушенную посуду (химические пробирки) с фильтровальными мостиками разливают по 150 мл питательной среды. Пробирки закрывают ватно-марлевыми пробками, автоклавируют в автоклаве для уничтожения микроорганизмов при 0,7 — 0,8 атм 15 мин. Бокс стерилизуют бактерицидными лампами.
Инструменты стерилизуют в суховоздушном шкафу при 180 С, завернутые в бумагу
Крафт. Также стерилизуют чашки Петри. В боксе перед началом работы инструменты опускают в спирт и обжигают в пламени спиртовки. Стерильные листовые эксплантаты помещают на фильтровальные мостики в пробирки, Пробирки содержат в термостате при 25 С в условиях непрерывной темноты. Спустя 15 дней на эксплантатах отмечается индукция каллусной ткани. Через две недели каллусную ткань вместе с первичным эксплантатом пассируют на агаризованную питательную среду для дальнейшего культивирования.
Пример ы 2 12. Получение ткани проводят аналогично примеру 1, различиями являются модификации питательных сред.
Результаты испытания 12 модификаций питательных сред на основе среды Мурасиге и Скуга представлены в таблице 1, Образование каллуса отмечают по краям всего периметра высечки эксплантата, в местах поранения мезофилла. Каллус, разрастаясь, покрывает весь эксплантат (варианты 1 и 3). Интенсивность роста каллуса высокая на средах 1/2 и 3/2, на остальных средах ниже, Не отмечено избирательного отношения к сахарам. Каллус хорошо образуется на средах, содержащих как сахарозу, так и глюкозу. Добавки 6-БАП и 2,4-Д являются более действенными, чем 6-БАП и а- НУК. В то время как в вариантах 1 и 3 с 6-БАП и 2,4-Д каллус образуется на первом этапе недифференцированным и только спустя 30 дней начинается ризогенез; в вариантах 2 и 4 сочетания 6-БАП с а - НУК количество эксплантатов, образовавших каллус и дающих сразу же ризогенез, превысит 90%, Предлагаемый способ позволяет сократить срок калусогенеза; жидкая модифицированная питательная среда 15 дней; агаризованная модифицированная питательная среда 30 дней, по сравнению с известной агаризованной питательной средой
Мурасиге и Скуга 38 дней. Повышается эффективность каллусообразования эксплантатами, % эксплантатов, образовавших каллус, жидкая модифицированная питательная среда (в условиях непрерывной темноты) 91,5; агаризованная модифицированная питательная среда (в условиях 24часового фотопериода) 5,0, по сравнению с известной агаризованной питательной средой Мурасиге и Скуга в условиях 24-часового фотопериода (2%), Кроме того, улучшаются качественные характеристики каллусообразования, %: жидкая модифицированная питательная среда: обильных 18,5 хороших 29,6 средних 28.5 агаризованная модифицированная питательная среда: обильных 0 хороших 33,3 средних 37,0
В известной агаризованной питательной среде Мурасиге и Скуга по мере образования каллусной ткани происходит быстрая пролиферация.
Формула изобретения
1. Способ получения каллусной ткани бегонии краснолистной, включающий культивирование стерильных эксплантатов на питательной среде, приготовленной на основе среды Мурасиге-Скуга, в темноте, о тличающийся тем,что,сцельюповышения интенсивности каллусообразования, культивирование проводят в жидкой питательной среде на основе среды МурасигеСкуга с использованием мостиков из обеззоленного фильтра в присутствии пиридоксина в количестве 0,1 мг/л, тиамина
0,1 мг/л; никотиновой кислоты 0 5 мг/л, инозитола 40.0 мг/л, 6-бензиламинопурина 1,0 мг/л, натриевой соли дихлорфенилуксусной кислоты 1,0 мг/л, при содержании сахарозы 30000 мг/л среды.
166484 1
Минеральные соли и элементы по Мурасиге и Скугу
Витамины, мг/л: пиридоксин О, 1 тиамин О, 1 никотиновая кислота 0 5
1/2
Минеральные соли и элементы по Мурасиге и Скугу
+++++
BHTBMBHbl р мг /Л пиридоксин 0,1 тиамин 0,1 никотиновая кислота 0 5 инозитол 40 сахароза 30000
6-БАП
2,4-Д 1
1/3 Минеральные соли и элементы по Мурасиге и Скугу
++++
Витамины мг/л» пиридоксин 0,1 тиамин 0,1 никотиновая кислота 0 5
2/1
Минеральные соли и элементы по Мурасиге и Скугу
++.+
Витамины, мг/л: пиродоксин 0,1 тиамин 0,1
2.Способпоп1, отл ичающийся тем, что, в качестве зксплантатов используинозитол 40 сахароза 30000
6-БАП 0 5
2,4-Д 0,5 инозитол 40 сахароза 30000
6-БАП 1,5
2,4-Д 1,5 ют сегменты молодых листьев размером
1,0х1,0 см, 1664841 никотиновая кислота 0,5 инозитол 40 сахароза 30000
6-БАП 0,5 мг/л
А-НУК 1 мг/л
Минеральные соли и элементы по Мурасиге и Скугу
2/2
++++ пиридоксин 0,1 тиамин 0,1 никотиновая кислота 0,5 иноэитол 40 сахароза 30000
6-БАП 1 ф-НУК 2
2/Э
Минеральные соли и элементы по Мурасиге и Скугу тиамин 0,1 никотиновая кислота 0,5
6-БАП 1,5
4,-НУК 310
Минеральные соли и элементы по Мурасиге и Скугу
Витамины, мг/л: пиридоксин 0,1 тиамин 0,1 никотиновая кислота 0,5 инозитол 40 сахароза 15000 глюкоза 15000
6-БАП 0,5
2,4-Д 0,5
Витамины, мг/л:
Витамины, мг/л: пиридоксин 0,1 инозитол 40 сахароза 30000
Продолжение таблицы
1664841
Минеральные соли и элементы по Мурасиге и Скугу
3/2 тиамин 0,1 никотиновая кислота 0 5 инозитол 40 сахароза 15000 глюкоза 15000
6-БАП 1
4-Д 1
3/3
Минеральные соли и элементы по Мурасиге и Скугу пиридоксин 0,1 тиамин 0,1 никотиновая кислота 0,5 инозитол 40 сахароза 15000 глюкоза 15000
6-БАП 1,5
2,4-Д 1,5
4/1
Минеральные соли и элементы по Мурасиге и .Скугу пиридоксин 0,1 . тиамин 0 р 1 никотиновая: кислота 0,5 инозитол 40
6-БАП 0.,5 сА-НУК 1
Минеральные соли и элементы по Мурасиге и Скугу
4/2
++++
Витамины, мг/л: пиридоксин 0,1
Витамины, мг/л:
Витамины, мг/л: сахароза 15000 глюкоза 15000
Витамины, мг/л: пирндок сии О, 1
Продолжение таблицы
1664841
Продолжение таблицы тиамин Ор 1 никотиновая кислота 0 5 инозитол 40 сахароза 15000
6-БАП 1
0(-НУК 2
Минеральные соли и элементы по Мурасиге и Скугу
4/3
Витамины, мг/л: пиридоксин 0 1 пиридоксин 0,1 никотиновая кислота 0 5 инозитол 40 сахароза 15000 глюкоза 15000
6-БАП 1,5
0(-НУК 3,0
Составитель В.Демкин
Техред М.Моргентал Корректор М.Кучерявая
Редактор Н.Рогулич
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Заказ 2366 Тираж 372 Подписное
ВЙИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушскея наб., 4/5
