Способ микроклонального размножения абрикоса

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для ускоренного получения большого количества генетически однородного посадочного материала абрикоса. Целью изобретения является ускорение размножения и снижение уровня бактериального заражения. Способ заключается в том, что введение в культуру проводят путем стерилизации побегов, полученных из почек, взятых весной непосредственно от взрослого плодоносящего дерева. Культивирование проводят в несколько этапов на модифицированной фитогормонами среде Мурасиге-Скуга. 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

Г

1, 1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4617607/13 (22) 07.12,88 (46) 23.07.91, Бюл, ¹ 27 (71) Институт физиологии растений им.

К.А.Тимирязева и Главный ботанический сад АН СССР (12) Л.А.Крамаренко и Н.В.Катаева (53) 578.085.23(088.8) (56) Jona Snirs, In vitro proporgation of

Canionpricot.-Hort Scionce, 1984, 19(2), р.229 †2, (54) СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РА3МНОЖЕНИЯ АБРИКОСА

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к методам микроклонального размножения растений, и может быть использовано для клонального микрорэзмножения и ускоренного получения большого количества генетически однородного посадочного материала абрикоса.

Цель изобретения — ускорение размножения и снижение уровня бактериэльного заражения, Способ осуществляют следующим образом.

Весной срезают однолетние черенки иэ различных частей кроны пдлодоносящего дерева и помещают в сосуды с водой. Через месяц вегетэтивные почки распускаются и образуют побеги длиной 1-3 см. Верхушки побегов. состоящие из конуса нарастания и

2-4 пар примордиальных листьев, изолируют и предварительно стерилизуют 70 -ным этанолом в течение 1 мин, после чего проводят стерилизацию в 0,1 $-ном растворе диацида. В табл, 1 приведен состав питательных сред (рН 5.8) для способа клональногоми кроразмноженияабрикоса. По„„5U„„1664201 А1 (я)я А 01 Н 4/00, С 12 N 5/04 (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для ускоренного получения большого количества генетически однородного посадочного материала абрикоса. Целью изобретения является ускорение размножения и снижение уровня бактериального заражения, Способ заключается в том, что введение в культуру проводят путем стерилизации побегов, полученных из почек, взятых весной непосредственно от взрослого плодоносящего дерева. Культивирование проводят в несколько этапов на модифицированной фитогормонами среде Мурасиге — Скуга. 4 табл. сле 3-кратной промывки в стерильной дистиллированной воде апексы побегов помещают на среду 1 (табл.1), затем полученный материал культивируют на среде 2 и прово- и

l дят укоренение нэ среде 3 с последующим переносом на безгормональную среду Мурасиге-Скупа. Полученные растения адапти- а руют к условиям открытого грунта путем О подращивания в стерильной почве, после 0 чего получают посадочный материал, пригодный для выращивания в нестерильных условиях.

П р и е р 1. Апексы побегов длиной 4-5 мм стерилизют 1 мин в 70-градусном этиловом спирте и 20 мин в 0,1 -ном растворе диацида, трижды промывают стерильной водой и помещают на питательную среду 1, содержащую, мг/л:

Минеральные соли по прописи MS

Тиамин HCI 1

Никотиновая кислота ПиридЬксин НО

Иноэит 50

Глицин 10

БАП 1

1664201

15

40

50

ИУК 0,1

ПВП, г/л 10

Сахароза, г/л 30

Агар, г/л 7 рН среды 5,8.

Для получения 100%-ной стерильности испытывают разное время выдерживания апексов в 0,1%-ном растворе диацида, результаты представлены в табл.2.

Из табл.2 видно, что время 20 мин является оптимальным. При такой экспозиции получают 100% -ную стерильность при полной жизнеспособности эксплантов, Пример 2. На первом этапе культивирования в пиаттельную среду 1, приготовленную на основе прописи MS, кроме общепринятых концентраций витаминов (тиамин, никотиновая кислота, пиридоксин — по 1 мг/л) вводят дополнительные вещества, повышающие выживаемость эксплантов, мг/л; инозит 50; глицин

10 и ИУК0,1.

Для стимулирования пролиферации пазушных меристем в состав среды для размножения (2) вводят БАП в различных концентрациях.

В табл, 3 показано влияние цитоктинина (EAll) на микроразмножение абрикоса.

Из табл. 3 видно, что полное отсутствие в среде цитокинина является нежелательным, так как приводит к некрозу верхушек побегов и затем к гибели всех эксплантов.

Культивирование можно производить, при концентрации БАП в среде 0,1 и 1 мг/л в зависимости от поставленной цели: для размножения материала и быстрого получения большого количества микропобегов следует использовать цитокинин в концентрации 1 мг/л. Перед укоренением целесообразнее снизить концентрацию БАП в 10 раз (0,1 мг/л) для восстановления апйкального доминирования, приводящего к росту побегов в длину.

Пример 3. Для индукции ризогенеза побеги культивируют на среде 3, содержащей половину нормы минеральных солей по прописи MS,тиамин, никотиновую кислоту и пиридоксин — по 1 мг/л, ауксин (ИМК) и сахарозу в различных концентрациях.

Результаты приведены в табл.4.

Из табл.4 видно, что лучшим для укоренения является вариант 9, в котором побеги выдерживают на среде с 1 мг/л ИМК в темноте 10 дней, а затем пересаживают на безгормональную среду. Оптимальная концентрация сахарозы 3 (30 г/л). Культивирование на безгормональной среде проводят в условиях освещения.

Применение предлагаемого способа в биотехнологии по сравнению с известным способом дает следующие преимущества: сокращение на 1 год сроков получения посадочного материала за счет упрощения и уменьшения трудоемкости стадии введения в культуру, а также снижение заражения бактериальными и грибными инфекциями на первом этапе культивирования за счет использования апексов растущих побегов.

Формула изобретения

Способ микроклонального размножения абрикоса, включающий стерилизацию эксплантатов, введение их в культуру, предварительное культивирование, пролиферацию пазушных меристем до получения микропобегов, их последующее укоренение и адаптацию к условиям открытого грунта, отличающийся тем, что, с целью ускорения размножения и снижения уровня бактериального заражения, в качестве эксплантатов используют апексы побегов, полученных из распустившихся почек срезанных черенков, стерилизацию проводят последовательно в 70%-ном этаноле и в

0,1%-ном растворе диацида, предварительное культивирование проводят на питательной среде Мурасиге-Скуга в присутствии 1 мг/л тиамина, 1 мг/л никотиновой кислоты, 1 мг/л пиридоксйна НС1, 50 мг/л инозита, 10 мг/л глицина,.1 мг/л с-бензиламинопурина при содержании сахарозы 30 г/л и агара

7 г/л, профилерацию меристем проводят на среде Мурасиге-Скуга в присутствии 1 мг/л тиамина, 1 мг/л никотиновой кислоты, 1 мг/л пиридоксина HCI, 1 мг/л бензиламинопурина при содержании сахарозы 30 г/л и агата 7 г/л, укоренение проводят в течение

10 дней в темноте на питательной среде

Мурасиге-Скуга, содержащей интегредиенты в количестве 1/2 набора по прописи в присутствии 1 мг/л тиамина, 1 мг/л никотиновой кислоты, 1 мг/л пиридоксина НС, 1 мг/л индолилмасляной кислоты при содержании сахарозы 30 г/л и агара 7 г/л, затем полученный растительный материал переносят на безгормональную среду в условия освещения, а адаптацию полученных растений осуществляют путем подращивания в стерильной почве.

1664201

Таблица 1

Со е жаниеинг е иентов, мг/л, в с е е

Ингредиенты

1/2 нормы

Полная норма Полная норма

1

1

30 г/л

7 г/л

30 г/л

7 г/л

Таблица 2

Таблица 3

*Кропределяется количеством вновь образованных побегов на один первоначальный побег.

Минеральные соли по прописи Мурасиге-Скуга

Тиамин

Никотиновая кислота

Пи ридоксин H Cl

Индолил-3-уксусная кислота(ИУК) 6-Бензиламинопурин(БАП) Инозит

Индолил-масляная кислота(ИМК

Глицин

Сахарова

Ага

1

0,1

5 ,10

30 г/л

7 г/л

1664201

Таблица 4

Составитель В.Демкин

Техред М.Моргентал Корректор Э.Лончакова

Редактор Н.Тупица

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 2334 Тираж 367 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5