Способ диагностики аутоиммунного поражения печени

 

Изобретение относится к медицине, конкретно к гепатологии. Целью изобретения является повышение точности диагностики аутоиммунного поражения печени у больных механической желтухой. Цель достигается тем, что исследуют контактное взаимодействие лимфоцитов с макрофагами , которые получают путем культивирования моноцитов на стеклянной поверхности в течение 1,5 ч при 37°С в атмосфере 5%- ного содержания СО в присутствии водносолевого антигена ткани аутологичной печени в концентрации 40 мкг бепка на 1 мл культуральной жидкости, и оценку функционального состояния клеток проводят по количеству контактных розеток макрофагов и лимфоцитов, и при его знлченим равном индексу макрофагов от 1,12 дс 1 78 или содержащего взаимодействующих макрофа ов от 38 до 62%, диагностируют аутоиммунное поражение печени у ботьных, Положительный эффект способа заключается в повышении точности диагностики с 77,8 до 92,5%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4652751/14 (22) 21.02.89 (46) 07.11.91. Бюл. ¹ 41 (71) Луганский медицинский институт (72) В.И.Авершин (53) 615.375(088,8) (56) Чернушенко Е.Ф., Когосова Л.С. Иммунологические исследования в клинике, — Киев, Здоров я, 1978. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АУТОИММУННОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ (57) Изобретение относится к медицине. конкретно к гепатологии, Целью изобретения является повышение точности диагностики аутоиммунного поражения печени у больных механической желтухой. Цель достигается тем, что исследуют контактное

Изобретение относится к медицине, конкретно к гепатологии.

Цель изобретения — повышение точности диагностики аутоиммунного поражения печени у больных механической желтухой.

Способ осуществляется следующим образом.

Забор венозной крови в количестве 5 мл осуществляют из локтевой вены. кровь помещают в силиконизированную пробирку с несколькими каплями гепарина. Взвесь монануклеарных клеток (лимфоцитов и моноцитов), выделенных из данной крови центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина, доводят до концентрации 5х10 кл/мл средой 199 с добавлением сыворотки АВ группы. Полученную взвесь клеток в количестве 1 мл наносят на хорошо обезжиренное предметное стекло, „,5U, „1689856 Al взаимодействие лимфоцитов с макрофагами, которые получают путем культивирования моноцитов на стеклянной поверхности в течение 1,5 ч при 37 С в атмосфере 5 ьного содержания СО2 в присутствии водносолевого антигена ткани аутологичной печени в концентрации 40 мкг белка на 1 мл, культуральной жидкости, и оценку функционального состояния клеток проводят по количеству контактных розеток макрофагов и лимфоцитов, и при его значении. равном индексу макрофагов от 1,12 дс 1.78 или содержащего взаимодействующих макрофагoB GT 38 до 62, диэгHocTvlp) !GT аутоиммунное поражение печени у больных, Положительный эффект способа заключается в повышении точности диагностики с 77,8 до 92,5; .

S зту же каплю добавляют зодно-солевой антиген ткани аутологичной печени из расчета 40 мкг белка на 1 мл культуральной жидкости, Стекло инкубируют в течение 1,5 ч при

37 С в термостате в атмосфере 5;ь-ного содержания СО2. Неприлипшие клетки после инкубации удаляют следующим образом; переворачивают стекло, делая "рисячую каплю", и оставляют стекло в таком положении в течение 10 мин при комнатной температуре, Каплю отсасываюг фильтровальной бумагой, стекло дополнительно промывают средой 199. На полученный монослой макрофагов наносят 1 мл взвеси аутологичных лимфоцитов из пробиркГл со средой 199 с добавлением сыворотки АВ группы. Стекло повторно инкубируют при

37 С в термостате в атмосфере 5 ;-ного содержания СО2 в течение 1 ч. После инку1689856 бирования взвесь неприлипших клеток удаляют по той же методике, стекло дополнительно промывают 1 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида.

Препарат фиксируют 1ф-ным раствором глютаратальдегида на фосфатном буфере и окрашивают по методу Гимзе-Романовского, Окрашенный препарат просматривают под большим увеличением с масляной иммерсией, подсчитывая количество макрофагов, образовавших контактные "розетки" с лимфоцитами.

Для количественной оценки эффективности образования комплексов макрофаг— лимфоцит используются следующие показатели: индекс макрофагов (ИМ) — количество лимфоцитов, фиксированных к одному макрофагу; процентное содержание взаимодействующих макрофагов (M+),. образовавших контактные комплексы с лимфоцитами.

Возрастание показателя ИМ до 1,12—

1,78 и показателя М+ до 38-627 является специфическим для аутоиммунного поражения ткани печени.

Разработанный способ диагностики аутоиммунного поражения печени отличается следующим.

В предлагаемом способе используется исследование контактного взаимодействия между лимфоцитами и макрофагами, трансформировавшимися иэ моноцитов периферической крови в результате их предварительного инкубирования в присутствии водно-солевого антигена ткани аутологичной печени.

По сравнению с известным, разработанный способ обладает более высокой специфичностью и эффективностью диагностики аутоиммунного поражения ткани печени.

По разработанному способу обследова. но 42 больных, из них 14 больных с хроническим неосложненным калькулеэным холециститом и 28 больных с хроническим холестатическим гепатитом, обусловленным длительной хронической обтурацией внепеченочных желчных путей. С целью контроля диагностической эффективности разработанного способа в этих же группах больных и в те же сроки исследована РБТЛ в присутствии водно-солевого антигена ткани аутологичной печени по общепринятой методике и проведено гистологическое исследование интраоперационных биоптатов ткани печени.

Анализ полученных данных показал.

В группе больных с хроническим неосложненным калькулезным холециститом фаг — лимфоцит в присутствии аутоантигена были минимальны (РБТЛ от 22,3 до 22,47,, 5 ИМп 0 43, М+,нт 10,6 +1,448;ь) в течение .всего периода наблюдения, что доказывает отсутствие у этих больных аутоиммунных процессов, направленных против ткани аутологичной печени. Гистологическое исс1Q ледование интраоперационных биоптатов ткани печени также не показало наличия аутоиммунной гепатопатии у этих больных, 20

g ФЪ

50 показатели РБТЛ с аутоантигеном и показатели контактного взаимодействия макроВ группе больных с хроническим холестатическим гепатитом выявлены качественно иные изменения; показатели контактного взаимодействия ма крофагв лимфоцит у 25 из 28 больных были значительно повышены (ИМ,„, 1,382+0,164, М+

49,6,31ь) в течение всего периода наблюдения, У трех больных из этой группы эти показатели достоверно не отличались (р > 0,05) от таковых при неосложненном хроническом холецистите. Значительное повышение показателей РБТЛ (до 41,7й

+4,83/) отмечено у 21 из 28 обследованных в данной rpynne, у остальных 7 больных показатели РБТЛ достоверно не отличались (р > 0,05) от показателей контрольной группы..Гистологическое исследование биоптатов ткани печени у всех 28 больных выявило однотипные изменения; резко выраженную белковую и жировую дистрофию гепатоцитов, в различной степени выраженный перипортальный и диффузный фиброэ, признаки портального и перипортального гепатита, начинающегося цирроза печени со специфической диффузной и перипортальной инфильтрацией лимфоидными клетками, Эти изменения убедительно доказывают наличие у всех обследованных больных этой группы аутоиммунных процессов„направленных против ткани аутологичной печени.

Таким образом, диагностическая эффективность РБТЛ составила 77,8, использование предлагаемого способа диагностики позволило повысить частоту выявления аутоиммунных процессов, направленных против ткани аутологичной печени до 92,5 .

Пример 1. Больной Антощенко В.Я„

52 лет, находился на стационарном лечении в клинике хирургических болезней Ворошиловградской областной клинической больницы с 11,04.87 r. по 02,05,87 r, Клинический диагноз: желчекаменная болезнь, хронический холецистит, холедохолитиэз. Переме1689856 жающаяся механическая желтуха. Хронический холестатической гепатит.

Операция 16.04.87 г.: холецистэктомия, холедохолитотомия, трансдуоденальная транспапиллярная холедоходуоденостомия, дренирование холедоха по Пиковскому, биопсия печени.

Показатели РБТЛ с аутоантигеном от

20Я, до 21 (достоверно не отличаются от показателей РБТЛ у больных с хроническим неосложенным калькулеэным холециститом).

Показатели контактного взаимодействия по разработанному способу: ИМ 1,54—

1,32 М+ 40 — 44 .

Заключение гистологического исследования биоптата печени; хронический активный холестатический гепатит с признаками аутоиммунной агрессии.

Также установлено. что при наличии у больных аутоиммунного поражения ткани печени возможно снижение показателя ИМ до значений, достоверно не отличавшихся от показателей группы.

Пример 2. Больной Царевский В,Н., 47 лет, находился на стационарном лечении в хирургическом отделении Ворошиловградской областной клинической больницы с 12.01.88 г. по 04.02.88 г. Клинический диагноз: желчекаменная болезнь, хронический холецистит, холедохолитиаэ, стеноз большого дуоденального сосочка И степени, Перемежающаяся механическая желтуха.

Хронический холестатический гепатит.

Операция 16.01,88 г,: холецистэктомия, холедохолитотомия, трансдуоденальная транспапиллярная холедоходуоденостомия, дренирование холедоха по Пиковскому, биопсия печени.

Показатели РБТЛ с аутоантигеном составили 37 и 42 .

Показатели контактного взаимодействия: ИМ 0,62-0,58, что достоверно не отличается от показателей контрольной группы, М+ 40 и 48, что соответствует данным, характерным для аутоиммунных гепатопаTNA.

Заключение гистологического исследования: перипортальный фиброз, хронический холестатический гепатит с признаками аутоиммунной агрессии.

Пример 3. Больная Мисина И.Г„42 лет, находилась на стационарном лечении в клинике хирургических болезней Ворошиловградской областной клинической больницы с 04.08.88 r. по 28.08.88 г.

Клинический диагноз: желчекаменная болезнь, хронический холецистит, стеноз большого дуоденального сосочка Н степени, перемежающаяся механическая желтуха, хронический холестатический гепатит.

Операция 08.08.88 r,: холецистэктомия, трансдуоденальная транспапиллярная

5 холедоходуоденостомия, дренирование холедоха по Пиковскому, биопсия печени.

Показатели РБТЛ с аутоантигеном составили от 44 до 48, М+ от 10 до 12, что достоверно не отличается от показателей

10 практически здоровых лиц. ИМ от 1,32 до

1,43, что характерно для аутоиммунного lloражения ткани печени.

Заключение гистологического исследования: хронический холестатический гепа15 тит с признаками аутоиммунной агрессии, диффузный и перипортальный фиброз.

Приведенные наблюдения доказывают целесообразность использования в диагностике аутоиммунного поражения печени

20 двух показателей контактного взаимодействия, индекса макрофагов и процента взаимодействующих макрофагов.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики аутоиммунного поражения тка25 ни печени обладает существенно более высокой диагностической достоверностью, чем известный. Анализ полученных данных и приведенные наблюдения доказывают целесообразность использования в предлага30 емом способе одновременно двух показателей: индекса макрофагов и процент взаимодействующих макрофагов.

Формула изобретения

Способ диагностики аутоиммунного поражения печени путем культивирования клеток крови в присутствии водно-солевого тканевого антигена печени и оценки их фун-, 40 кционального состояния, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повыш ния точности диагностики у больных механической желтухой, проводят исследование контактного взаимодействия аутологичных макрофагов и

45 лимфоцитов путем культивирования в питательной среде моноцитов на стеклянной поверхности в течение 1,5 ч при 37 С в атмосфере с 5 -ным содержанием углекислого газа в присутствии водно-солевого

50 антигена ткани аутологичной печени в концентрации 40 мкг белка на 1 мл культуральной жидкости с последующим отмыванием и нанесением на образовавшийся монослой равного объема взвеси аутологичных лим55 фоцитов, далее смесь клеток культивируют в течение 1 ч, промывают, фиксируют, окрашивают и подсчитывают среднее количество фиксированных на макрофаге лимфоцитов и процентное содержание макрофагов с фиксированными на них лимфо168985б

Составитель П.Бонарцев

Техред М,Моргентan Корректор С.Чсрни

Редактор Е,Папп

Заказ 381Î Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретенивм и открыпгивм при -М-1Т :.ССР

113035, Москва, Ж-35, Рауш|.;:а-я наб., 4/5

Производственно-издательский комбинаг "Патент", г. Ужгород, ул,Гагар ьча. j()1 цитами и при значении указанных показате- диагностируют аутоиммунное поражение лей соответственно 1, l2-1,78 или 38 — 52$ - печени у данных больных,