Способ хроматографического анализа биологически активных веществ
Изобретение касается жидкостной хроматографии и может быть использовано в медицине и фармацевтике для проведения качественного и количественного анализов сложных смесей биологически активных природных соединений, применяемых в качестве лекарственных средств, преимущественно наркотиков. Цель изобретения - повышение достоверности определения наркотических веществ в биологических жидкостях при проведении химико-токсикологической экспертизы. Для этого хроматографирование обрабатываемой анализируемой смеси проводят на пластинах с силикагелем и с модифицированным силикагелем и применяют в качестве подвижной фазы для пластин с модифицированным еиликагелем 1,0-1,5 М раствор хлорида натрия в смеси CaHsOH-HaO при объемном соотношении компонентов 80:20 (определение гашиша) и 0,1-0,3%-ный раствор диэтиламина в смеси C2HsOH-H20 при объемном соотношении компонентов 70:30 (определение алкалоидов группы опия и метадона). 3 з.п.ф-лы, 3 табл. СО с
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4728037/25 (22) 13.07.89 (46) 23.11.91, Бюл. N 43 (71) Всесоюзный научно-исследовательский и конструкторский институт хроматографии (72) M.H.Ермолова, С.И.Никуличева, С.К.Еремин, Б.Н.Изотов, О.Б.Дорогокупец, Э.С.Дроздов и В.Д,Красиков (53) 543,544 (088.8) (56) Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. — M.: Мир, 1981, ч. 1, с.434-438.
Egll R. Comarison of silica-gel and
reversed-phase TLC and LC in the testing of
drugs. — J. Chromatogr, 1984, ч.291. р,249-256. (54) СПОСОБ ХРОМАТОГРАФИЧ ЕСКОГО
АНАЛИЗА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ
ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение касается жидкостной хроматографии и может быть использовано в медицине и фармацевтике для проведения качественного и количественного анализов
Изобретение относится к анализу биологически активных веществ, в частности к хроматографическому анализу наркотиков в тонком слое сорбента, и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для определения микроколичества сложных многокомпонентных смесей с целью достоверного подтверждения позитивных результатов.
Цель изобретения — повышение селективности и достоверности результатов хроматографического анализа биологически активных веществ, преимущественно нар котиков, при их определении в бдиологических жидкостях.
„„SU ÄÄ 1693539 А1
Пробы анализируемых веществ наносят на хроматографическую пластину с готовым слоем силикагеля и на пластину со слоем модифицированного силикагеля, элюируют смесью органических растворителей в камере с насыщением, пластины осматривают в
УФ-свете, обрабатывают цветореагентом и идентифицируют анализируемые вещества по значениям R<, причем для пластин с немодифицированным силикагелем используют неполярные системы растворителей, в для пластин с модифицированным силикагелем - полярные системы этанол-вода при объемном соотношении компонентов
1693539
3
55 (70-80):(20-30), содержащие I,0-1,5М хлорида натрия (при определении гашиша или
0,1-0,3 (диэтилэмина прй определении алкалоидов группы опия и метадона), Пример 1, На линию старта (1,5 см от края) пластины Силуфол УФ:.254 (силикагель) наносят 10 мкл спиртового стандартного раствора каннабиноидов (гашиш), пробы анализируемых веществ. и проводят элюирование восходящим методом в системе петролейный эфир,40-70 С) — диэтиловый эфир в соотношении компонентов
80:20. По окончании злюирования (фронт элюента не доходит до края пластины 1 см) пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе 5 мин и после высушивания опрыскивают 0,5 -ным водным раствором прочного синего Б. На пластине наблюдаются красные, оранжевые и фиолетовые пятна i-.à светло-коричневом фоне. Величины значений R< разделяемых компонентов гашив.а приведены в табл. 1. Затем на стеклянную или типа Силуфол пластину c: модифицированным силикагелем(к силикагелю привиты алкилсилильные группы Ср) наносят по
10 мкл стандартного раствора каннабиноидов, проб тех же анализируемых веществ образцов и пластину помещают в камеру, содержащую 1М раствор хлорида на грия в смеси этанол-вода (80:20).
После хроматографического разделения пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе в течение 20 мин и опрыскивают
0,5 -ным раствором проччого синего Б. На пластине наблюда отся красные, оранжевые и фиолетовые пятна на светло-коричневом фоне (табл, 1).
Изменение порядка выхода Л -тетрагидроканнабинола, обладающего психотропными свойствами, позволяе: идентифицировать его с большей достоверностью.
Пример 2. На линию старта пластинь, типа Силуфол УФ-254 (силикагель) наносят по 10 мкл одновременно стандартные хлорофомные растворы алкалоидов группы опия (морфин, кодеин), исследуемые пробы и хроматографируют в системе этилацетат— метанол — аммиак (90:10;5). После хроматографического разделения пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе и затем просматривают в УФ-свате, измеряют величину Rr пятен и проявляют реактивом Марки. Затем на стеклянную или типа Силуфол пластину с привитой алкилсилильной фазой
С2 наносят одновременно по 10 мкл хлороформных стандартных растворов морфина и кодеина и тех же самых исследуемых проб, Хроматографируют в системе зтанал — вода (70:30), содержащей 0,1 g, об. диэтиламина.
После хроматографирования пластину вынимают из камеры, сушат на воздухе 20 мин и просматривают в УФ-свете, фиксируя значения Rg,и проявляют реактивом Марки, Данные по разделению анализируемых апкалоидов опия представлены в табл. 2.
Пример 3, На линию старта пластины типа Силуфол (силикагель) наносят хлороформные растворы метадона, исследуемые пробы и храматографируют в системе толуол — ацетон — зтанол — аммиак (45:45;7,5:7,5).
После разделения пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе, просматривают в
УФ-свете, измеряют величины Rf пятен и проявляют 5 -ным раствором ванадата аммония. Затем на стеклянную или типа Силуфол пластину с привитой фазой С2 наносят по 10 мкл хл.>роформных стандартных растворов метадона и проб тех же самых исследуемых веществ. Хроматографируют в системе этанол — вода (70:30), содержащей
0,3 диэтиламина. После хроматографирования пластину вынимают из камеры, сушат на воздухе s течение 20 мин, просматривают в УФ-свете, фиксируя значения Rg, и проявляют 5; -ным раствором ванадата аммония, Резульгаты а;.ализа представлены в табл, 3, Формула изобретения
1. Способ хрсматографического анализа биологически активных веществ, включаощий разделение проб анализируемых веществ на хроматографической пластине с силикагелем и на хроматографической пластине с абращеннофазовым сорбентом, обработку хрсматограмм цветореагентом и идентификацию веществ по их величинам хроматографической подвижности, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения достоверности результатов анализа при определении наркотиков в биопробах, разделение пробы вещества на пластине с обращеннофазовым сорбентом проводят с применением в качестве подвижной фазы полярной смеси растворителей этанол-вода с добавкой органического основания или неорганической соли при содержании этанола в смеси 70-80 об, Д, а идентификацию осуществляют путем сравнения величин хроматографической подвижности анализируемого вещества на пластинах обоих типов.
2, Способ по и, 1, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности определения основных компонентов гашиша, в качестве добавки используют хлорид натрия с концентрацией 1,0- !,5M в смеси, 1693539
Таблица 1
Таблица 2
Таблица 3
Соединения
Значения Rg
Силикагель
Модифицированный силикагель
Мета он
Сине- иолетовая
0,80
0,50
Составитель В. Агинский
Редактор М. Бланар Техред М.Морге нтал Корректор С. Черни
Заказ 4075 Тираж. Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101
3. Способ по п.1, отл ича ю щи йс я тем, что. с целью повышения достоверности определения алкалоидов группы опия и метадона, s качестве добавки используют диэтиламин.
4. Способ по и, 1, отличающийся тем, что в качестве обращен нофазового сор- бента используют силикагель с привитой фазой С2.
Окраска пятен, выявленных проявляющим реактивом
