Способ получения эмбриоидогенных каллусных культур сорго

 

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано для ускоренного размножения ценных сортов и гибридов сорго, в работах по генной и клеточной инженерии, в исследованиях по экспериментальному мутагенезу , генетике и физиологии морфогенеза, в генетике и селекции сорго Целью изобретения является повышение выхода эмбриоидогенного каллуса. Изобретение предусматривает введение в питательную среду в начегтве физиогсрмонной добавки комбииа чии , м L-пролинз. З табл

Г:ОН»З СОНГ IСКИХ

СОЦИЛЛИС1И ГСКИХ

Р1- СИVГЛИК

ГОСУДАРСТВЕ И1ЫЙ КОРИТЕ Т

Г10 ИЗОВРЕ Т1 11ИЯМ И 01КР1з!ТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4725267/13 (22) 11 08,89 (4б) 07.11.91. Бюл, М 41 (71) Н аучно-п роиз водствен ное обьедин ение

"Элита Поволжья (72) Л.А.Эльконин, P.Ô.Ëîïóøàèñêàÿ и

А. Г.Ишин (53) 578.085,23(088.8) (5б) Авторское свидетельство СССР

М 1107799, кл. А 01 Н 3/00, 1984.

,54,: СГlOC0; ПГ1 1ЪЧБНИ 1 ЭМБР14ОИДОГ Г Н г1 Б Х КА/1 Ю С ;1Б1л КУЛ Ь Г Р 1Р 0

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и мcêBi быть использованоо для ускорpí I îго размножения ценны х cо гп о R и ги б ридо в сорго, в работах по ге; н..й и клег»чной инженерии. в исследован,, по экспери,;-.;:Тальному мутагенезу ге, Ргике и физиологии морфогенеза, в генетике и селзкц;л сорго. лью изобретения -.âãëå-.ся повышение PbP:::ода эмбриоидо, енного каллуса, Способ бсг;стол.: в то . 1то в изолированных культурах о;Ь раа- белую матовую

,,i:,ii;-.. »бладэющу о 1овып. е «ными эибриоидогенными петен :,лями, л пересаживают ее дгя размножения на среду, содержащую

2,4-Д и комбинацию амлноклслот — аспграгин и -пролин при этом лучший эффект достигзют тогда, когда 1-аспарагин и L-пролин вводят в концентрации по 500 — 3000 мг/л.

В изолированных культурах сорго приcYãcòâYþT разные типы образований, обладэк щие различннк;и морфогенетическими

»5U 1688807 Al

rsi>s А 01 Н 4/00, С 12 N 5/04 (57) Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано для ускоренного размножения ценных сортов и гибридов сорго, в работах по генной и клеточной инженерии, B исследованиях по экспериментальному мутагенеэу, генетике и физиологии морфогенеэа, в генетике и селекции сорго, Целью изобретения является повышение выхода эмбриоидогенного каллуса, Изобретение предусматривае- введение в питательную среду в качестве физиогсрмонной добавки комбина ил L-асг:арагина и L-npan va. 3 табл. потенциями: желтая бугристая ткань, обладающая ризогенными потенциями, очаги морфогенеза, способные к регенерации растений, преимуществечно по пути органогенеза, рыхлая и слизистая ткани, некро тизирующие при пересадках. Но только белая матовая ткань обладает способноcibfG к массовому формированию эмбриоидов. Добавка к среде с 2,4-Д только аспаоа..ина. или только пролина стимулирует индукцию змбриоидогенеза, но не столь эффективно как комбинация обеих этих аминок с-.от. котсоая дает максимальный результат, Кроме того, на среде, содержащей комбинацию аминокислот, наблюдается значительно менее интенсивно выделение токсического пигмента, характерного для культуры тканей сорго.

Способ осуществляют следующим образом.

Изолированные культуры сорго получают от незрелых (17 — 20 дней после опыле1688807

5MT, /p, в зависимости ат i- àëè":,я а.:=;; од культур с

Н 1*; ;r P " .—

О/О

35,3

51,0

13,7

13?

"0,0р и м е ч а н и е. *Р 0,01 в сравнении с соответствующими показателям1:; на д >у11„", средах, БМТ вЂ” белая матовая ткань.

НИЯ) И ЭРЕЛЫХ ЗаРОДЫ111ЕИтфРаГМЕНтОВ,МОЛОдых (свернутых в трубку) листо1ков или метелок на экспериментально подобранных средах, содержащих макро-и микроэлементы. например по MS или N 6, витамины, сахарозу 30000 мг, мезоинозит 100 м", 2.4-Д

1 25 мг и 6 БАП 01 1 0 мг/на 1 л среды (6-БАП исключают из среды при культивировании незрелых зародышей).

Формирующиеся культуры состоят иэ разных морфофиэиологических типов образований: желтой бугристой ризогенной ткани, рыхлой серой ткани, белых или полупрозрачных блестящих образова»ий (OM), белой матовой ткани(БМТ), В дальнейшем для получения эмбриоидогенных культур отбирают БМТ и пересаживают ее для размножения на среду вышеуказанного состава (MS или N 6), в которой цитокинин

6-БАП заменяют определенным сочетанием аминокислот: L-аспарагином (500 — 3000 мг/л) и L-пролином (500 — 3000 мг/л). На этой среде происходит интенсивная пролиферация БМТ. Для получения растений эмбриоиды, формирующиеся из БМТ, пересаживают на среду исходного состава, отличающуюся отсутствием 2,4-Д, но добавкой кинетина или 6-БАП (0,5 — 1,0 мг/л).

Пример 1. Незрелые зародыши сорго сорта Желтозерное 10, одного иэ самых адаптированных к условиям ПОе10л>кья, Bbl саживают на среду. содержащую макро- и микроэлементы по г1 6, сахарозу 30000 мг, мезоиноэит 100 мг В1 0,5 мг, аспарагин 200 мг, пролин 1000,мг на 1 л, Из 38 зародышей

14 дают культуры, содержащие желтую бугристую ткань и белую матовую змбриоидогенную ткань. Выделение из гетерогенных первичных культур БМТ и пересадка ее для размножения на среду, содержащу1с макрои микроэлементы по N 6, сахарозу 20000 мг, В1 1,0 мг, мезоинозиг !00 мi 2 4 1!::,6 мг аспарагин 000 м1, 11роли1,, 000 м1 позволяет получить клеточны» л, !ii!1 сс с .:, бильной интенсивнои поолифера,li- ..:

5 лой матовой ткани, ко-орая «рос 1-.. :,.ча-.. в течение 5 последовательнь1Х пасса>кой

Пример ы 2 и 3 Исс 1едп;.Пни = проводят аналогично примеру 1.::о: - д1,: гих генотипах сорго (сорта Ба, л; i .., i 10 при этом иссгедую г дейс гнив ко:: . аминокислот в других коли «.с-вах

Результаты представлены в при этом испольэованьi г,,; глзи М6.

15 заключается в возможности с,,;би роста эмбриоидогPi; !ОЙ I;.лi;I обходима для получения,- е";:,:.г:.,:

СПОСОбН ЫХ СyÑn i!.1ИО,:, i, Х КЛ -т;

20 культур и протопластов, исп".,i .,уовлгенной и клето 1нсй инженерии,.;г.= по экспериментально«у мута1ене-.ó туре in vitro и клеточной nånåK,! «

На среде исходного состава 1з .-=,ã.::

25 ному сг1особу) получено з i;;

Формулri изоб ре-::. и:.

30 Спосоо полу-.е ия э бри«и, " каллусн ых кул ьтур сор:-о, „.:.. о:.: плантацию зароды.I!ei!, а и,:;,ò,:. ду, культиви >пваl- ие с —,о:.,ед пассированием на свежу<;

35 среду, о т л и ч à 1о Ii и и i:. — i åi.:, ч о,: ... -л: . повьlшения Bb!xopd эм брио!1до c-:I-. -.о

ЛУСа, КУЛЬтИВИРОВàHIÅ ОСУи!,—.Ñ-1Л:,:-г тательной среде в приi.óiñTbl; I 50. мг/n (-аспарагина и 500 — 30 0::- "г,: г,—

-0 лина и для па;,ñировани;;; —,áÿi>;.матовую ткань.

1688807

Таблица 2 р1нтенсиенесте еыде- Выход кулетур с литыентсы, ) „ не средех с лениЯ пигмента. бал аминокислотами, 7У вЂ” аспасУин/поолин мг/л

Табл и (а 3

Инте сивность оста; Выхо к льт БЧ1 на с е ax, ду ур РЛ

По известному спосо- С аспарагином и про р

000 мг/л) 0

Г в сравнении с соответствующим показателем на другой среде.

Составитель В.Демкин

Техред М.Моргентал

Корректор - .Король

Редактор В.Бу; ренкова

Заказ 3 58 Тираж Подписное

ГНИИПИ Гссчдарственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Г1роизводственно-издательский комбинат "Патент", г, ужгород. ул.Гагарина, 101

П > и м е ч а н и е. *Р 0 01

68,8

18,7

12.5

О*

3000/2000

40 о,8

6 ,0 .6