Способ выделения дезоксирибонуклеиновой кислоты из органов животных
Изобретение относится к получению биохимических препаратов. Цель изобретения состоит в увеличении выхода ДНК и сокращении времени выделения. Орган, измельченный до состояния фарша, продавливают через пресс, на выходе которого имеется решетка с диаметром отверстий 5-8 мм, е жидкий азот или смесь диэтиловый эфир - сухой лед. Выход ДНК селезенки коровы 770-830 мг на 100 г сырья. Время выделения 3.5 ч. 1 табл.
СО 3 СОВЕ ГСКИХ социалис тичг. Ских
Р Г с Г! у ь л и к (я)ю С 07 Н 21/00
ГОСУлйГС1ВЕНГ<}, Й КОМИТЕТ пО иэОВГ Втсниям и Открытиям пли гкнт ссср
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4138620/13 (22) 24,10.86 (46) 15.01.92. Бюл. ¹ 2 (71) Институт биоорганической химии АН
БССР (72) В.П.Егорова, Д.Ю.Ландо. А.Г,Шпаковский, И.А.Брунс и В.В.Велика (53) 575.224,2 (088.8) (56) Биохимия, 1977, т. 42, М 10, с. 1783. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЗ ОРГАНОВ ЖИВОТНЫХ
Изобретение относится к получению биохимических препаратов, конкретно к получению ДНК из органов животных. и может быть использовано для крупномасштабного вйделения ДНК.
Целью изобретения является повышение выхода ДНК и сокращение времени выделения, Измельченный до состояния фарша орган эамораживают путем продавливания фарша через решетку с размерами отверстий 5-8 мм в сосуд, содержащий жидкий азот или смесь эфир-сухой лед, Пример 1. 1 кг селезенки пропускают через мясорубку. Фарш помещают в цилиндр пресса, на выходе которого имеется решетка с отверстиями диаметром 5 мм, и продавливают в жидкий азот. После замора- живания в течение 3 мин фарш извлекают из сосуда при помощи сита, а затем помещают в морозильник (t < -20 С), где он хранится до выделения, Перед выделением фаршу дают возможность оттаять (20 мин), затем размельчают при помощи гомогениэатора и ресуспендируют в 5 л стандартного солево„, 5Ц„„1705300 А1 (57) Изобретение относится к получению биохимических препаратов. Цель изобретения состоит в увеличении выхода ДНК и сокращении времени выделения. Орган, измельченный до состояния фарша, продавливают через пресс, на выходе которого имеется решетка с диаметром отверстий 5-8 мм, в жидкий азот или смесь диэтиловый эфир— сухой лед. Выход ДНК селезенки коровы
770-830 мг на 100 г сырья. Время выделения
3.5 ч. 1 табл.
Ю%
ro раствора, фильтруют через пластмассовую сетку с ячейками размером 2 мм и центрифугируют при 2500 об/мин (2000g) в течение 10 мин при 00С, Осадок повторно а гомогенизируют в 5 л стандартного солевого раствора и центрифугирование повторяют (5 мин). Осадок ресуспендируют в 5 л стандартного солевого раствора. добавляют
1,2 л 17 -ного раствора додецилсульфата натрия и нагреваютдо 65 С, Раствор охлаждают до 10 C и добавляют 5 л раствора 5 M
NaCI, имеющего температуру 0 С, Раствор центрифугируют в течение 30 мин (2500 об/мин). ДНК осаждают иэ надосадочной жидкости одним объемом этанола. Осадок последовательно промывают в 60, 70, 80.
1007.-ном иэопропаноле. Содержание белка в образце определяют методом Лоури, содержание РНК вЂ” путем хроматографии на оксиапатите, Характеристика ДНК. выход
760 мг на 100 г фарша (что составляет-94 ( исходной ДНК, белка 0,8ф,, РНК 2,07(„ мол.м 2,6 10 Д)
Пример 2. 1 кг селезенки коровы пропускают через мясорубку. Фарш поме1705300
Составитель Т. Забойкина
Редактор В. Трубченко Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор М, Максимишинец
Заказ 168 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 щают в цилиндр пресса, на выходе которого имеется решетка с отверстиями диаметром
8 мм и продавливают в смесь дизтиловый эфир-сухой лед. Все остальные операции проводят, как в примере 1.
Пример 3. 1 кг селезенки коровы пропускают через мясорубку. Фарш помещают в цилиндр пресса, на вь оде которого имеется решетка с диаметром отверстий 7 мм и продавливают в жидкий азот. Все остальные операции проводят как в примере 1.
Пример 4, 1 кг почек коровы пропускают через мясорубку. Фарш помещают в цилиндр пресса, на выходе которого имеется решетка с диаметром отверстий 5 мм, продавливают в жидкий азот. Все остальные операции проводят как в примере 1, Аналогичным образом осуществляют выделение ДНК иэ легких, сердца и печени.
Результаты выделения отражены в таблице.
Таким образом, изобретение позволяет повысить выход ДНК и сократить время выделения ДНК с мол.м. не менее 10 Д, содерт жащей не более 2,0$ белка, осадок которой имеет белый цвет (цвет ДНК иногда включают в технические условия, например, ТУ5 10П-555-71, ДНК высокополимерная из селезенки крупного рогатого скота).
Формула изобретения
Способ выделения деэоксирибонуклеи10 новой кислоты иэ органов животных, включающий замораживание органа,иэмельчение, гомогенизацию, отмывку ядерного материала гомогената. депротеинизацию и спиртовое осаждение ДНК, о т15 л и ч а ю шийся тем. что. с целью повышения выхода и сокращения времени выделения, орган измельчают до состояния фарша, а замораживание осуществляют путем продавливания фарша через
20 решетку с диаметром отверстий 5-8 мм в жидкий азот или смесь диэтиловый эфир— сухой лед.
