Способ выделения днк из селезенки крупного рогатого скота

 

Изобретение относится к получению биохимических препаратов. Цель изобретения состоит в увеличении выхода целевого продукта и ускорении способа. Способ заключается в том, что селезенку крупного рогатого скота пропитывают водой в течение 5-60 мин, замораживают, измельчают, гомогенизируют. Затем проводят отмывку ядерного материала стандартным солевым раствором, депротеинизацию с помощью хлористого натрия и додецилсульфата натрия , часть скоагулированного белка отделяют фильтрацией, лизат центрифугируют, еще раз фильтруют и осаждают ДН К изопропанолом. Выход ДНК 750-850 мг на ,100 г селезенки, время выделения 4,5 ч.

СОЮЗ СОВЕТскИх

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБПИК (5!)5 С 07 Н 21/04

ГОСУДАРСТ8Е1НЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЭОЬРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4140037/13 (22) 24,10.86 (46) 15.01,92. Бюл. N. 2 (71) Институт биоорганической химии АН

БССР (72) В.П,Егорова, Д.Ю.Ландо и А.Г,Шпаковский (53) 576.224.2 (088.8) (56) Апа!. Вlochem 1978, 85. N 2, р. 609, (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК ИЗ СЕЛЕЗЕНКИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА (57) Изобретение относится к получению биохимических препаратов. Цель изобретения

Изобретение относится к получению биохимических препаратов, конкретно к способу получению ДНК из селезенки крупного рогатого скота. Изобретение может быть использованоо дл я круп номас штаб ного получения ДНК.

Целью изобретения является ускорение способа и увеличение выхода целевого продукта.

Селезенку крупного рогатого скота пропитывают водой в течение 5-60 мин, замораживают, измельчают, гомогенизируют, проводят отмывку ядерного материала стандартным солевым раствором, депротеиниэируют ядерный материал с помощью додецилсульфата натрия и хлористого натрия, в присутствии которых белок отделяется от ДНК и коагулируют. Часть скоагулированного белка отделяют фильтрациеи, затем лизат центрифугируют и еще раэ фильтруют, ДНК осаждают зтанолом.

Выход ДНК составляет 750-850 мг на 100 г селезенки, время выделения 4,5 ч.

Б0 1705301 А1 состоит в увеличении выхода целевого продукта и ускорении способа. Способ заключается в том, что селезенку крупного рогатого скота пропитывают водой в течение 5-60 мин, эамораживают, измельчают, гомогенизируют. Затем проводят отмывку ядерного материала стандартным солевым раствором, депротеинизацию с помощью хлористого натрия и додецилсульфата натрия, часть скоагулированного белка отделяют фильтрацией, лизат центрифугируют, еще раэ фильтруют и осаждают ДН К иэопропанолом. Выход ДНК 750-850 мг на,100 r селезенки, время выделения 4,5 ч.

Пример 1. Селезенку коровы пропитывают водой в течение 30 мин и эамораживают сухим льдом. Селезенку с помощью ножа и молотка разрубают на куски и прокручивают через мясорубку. Взвешивают

100 г фарша, добавляют 500 мл стандартного солевого раствора (SSC, 0,15М NaCI +

0,015М цитрат натрия, рН 7,2) и гомогениэируют в течение 2 мин с помощью гомогениэатора PT-1, Гомогенат фильтруют через сетку с ячейками размером 2 мм и центрифугируют в одном стакане центрифуги (2500 об/мин, 10 мин, 0 С). После центрифугирования осадок повторно гомогениэируют 1 мин в 600 мл SSC и повторяют центрифугирование в течение 5 мин. Осадок ресуспендируют 10 с с помощью гомогенизатора в

600 мл SSC и приливают при перемешивании 120 мл 17 -ного раствора додецилсульфата натрия. Смесь нагревают до 60 С при перемешивании и через 10 мин добавляют

200 мл 5М ИаС(, Перемешивание продолжают 15 мин и затем раствор охлаждают до

1705301

fl р и м е р 2, Селезенку коровы пропитывают водой в течение 5 мин и замораживают сухим льдом, Далее все операции проводят, как в примере 1. Выход 850 мг на

100 г селезенки, содержание белка 0,67ь, содержание PHK 2,6ф,. гиперхромиэм

39,27ь, мол.м. 2,3 10 дальтон.

П р и м e p 3, Селезенку коровы пропитывают водой в течение 60 мин и эамораживают сухим льдом. Далее все операции проводят квк в примере 1. Выход — 820 мг на 100 г селезенки, содержание белка 0,87,.

Составитель Т. Забойкина

Редактор В. Трубченко Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор М, Кучерявая

Заказ 168 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент", r. Ужгород. ул.Гагарина. 101

10 С. Добавляют при перемешивании 500 мл 5 M NaCI, охлажденного до 0 С, Смесь фильтруют через два слоя марли и затем центрифугируют (2500 об/мин, 30 мин, 0 С). Надосадочную жидкость фильтруют самотеком через стеклянный фильтр (размер пор 300-500 мкм), Полученные 1350 мл раствора ДНК осаждают путем добавления одного обьема этанола. Осадок промывают последовательно 60, 70, 80 и 100 )ь-ным иэопропанолом. Выход ДНК составил 740 мг, что составляет 827ь от общего содержания

ДНК при мол.м, 2 ° 10 дальтон, содержании

2,5 (. белка 0,7$, гиперхромизм 40 . содержание РНК 2.4, гиперхромизм 40у.

Мол.м. 2,1 10 дальтон.

Преимущества данно о способа выдегения ДН К заключаются в том, что он поэво5 ляет повысить выход ДНК на 100 r селезенки до 750-850 мг, более чем в 5 раз сократить время выделения, использование низкоскоростных центрифуг (менее 2500g) с большим рабочим объектом. которые ис10 пользуются в заводских условиях, причем суммарное время центрифугирования сокращается от 2.5 ч до 45 мин. т

При этом ДНК имеет мол.м. не менее 2i

10 дальтон, содержит белка не более 1,57, 15 осадок которой имеет белый цвет, Формула изобретения

Способ выделения ДНК из селезенки крупного рогатого скота, включающий замораживание сырья. гомогенизацию, отмывку

20 ядерного осадка, депротеинизацию, центрифугирование материала и спиртовое осаждение ДНК, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа и увеличения выхода целевого продукта, селезенку

25 перед замораживанием выдерживают в воде 5-60 мин, а до и после центрифугирования проводят фильтрацию материала.