Способ определения фибриногена в крови

 

Изобретение относится ic медицигне, а именно к диагностике.и контролюлечения больных с нарушениями гомеостаза. Целью является повышение точности способа за счет определения дополнительно всех продуктов деградации фибриногена. Цель достигается тем, что кровь из пальца перед инкубацией в фосфатно-солевом буфере обрабатывают стабилизирукяцим раствором, содержзЕщм цитрат натрия, Е-аминокапроновую кислоту и физиологический раствор. Затем после олределения фабриногена иммуноферментным способом пробу крови дополнительно инкубируют с тромбином и далее в фосфатно-солевом буфере. Продукты деградации фибриногена определяют тем же иммуноферментным методом.g а.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

ЩСГЬ ЬЛик

Al (19) (1И

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОИ НЕНИЮ И ОтНРЫГИЛМ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

I (Ц1) G 01 N 1/28 (21) 4669551/14 (22) 03.04.89 (46) 30.01.92. Бюл.. Р 4 (71) Всесоюзный гематологический научньш центр .(72) Т.М.Шеленова, Н.А.Рогачева, Г.Г.Белозерская, В.А.Макаров, Л.Н.Делекторская и Г.А.Ермолин (53) 615.475 (088.8) (56) Балуда В.П. и др. Лабораторные методы исследования системы гемостаза, Томск, 1980, с. 13. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФИБРИНОГЕНА

В КРОВИ (57) Изобретение относится к медици-. не, а именно к диагностике и контролю

Изобретение относится к медицине, а имейно к диагностике и контролю лечения больных с патологическими изменениями функции гемостаза как в стационаре, так и в амбулаторных условиях.

Цель изобретения — повышение, точности способа за счет одновременногоопределения фибрйногена и продуктов

ere деградации без пункции вены.

Способ осуществляют следующим образом.

Из пальца берут О, 1-0,3 мл. капиллярной крови, разводят в 0,5 мл ста- билизирующего раствора, приготавляе-. мого из расчета: 5 мл физиологического раствора, 1 мл 20,47-ного раствора цитрата натрия, 87 мг Е-аминокапроно вой кислоты, определяют содержание лечения больных с нарушениями гомеостаза. Целью является повышение точности способа за счет определения дополнительно всех продуктов деградации фибриногена. Цель достигается тем, что кровь из пальца перед инкубацией в фосфатно-солевом буфере обрабатывают стабилизирующим раствором, содержащим .цитрат натрия, Е-аминокапроновую кислоту и физиологический растf вор. Затем после олределения фабриногена иммуноферментным способом пробу крови дополнительно инкубируют с тромбином и далее в фосфатно-солевом буфере. Продукты деградации фибриногена определяют тем .же иммуноферментным методом. фибриногена в указанной пробе, а затем, обработав тромбином, определяют концентрацию продуктов деградации фибриногена.

По полученным данным нормальное содержание фибриногена составляет

2,55+0,12 мг/мл (2,5540,12 г/л), ПДФ

49,9+0,24 мкг/мл.

Пример 1. Иатериалом для исследования явилась капиллярная кровь донора. Прокол кожи на пальце производят по общепринятой методике. Глубина прокола 4 мм. Первые две капли не учитывают, последующие 0,3 мл набирают в пластиковую посуду, содержащую 0,5 мл стабилизатора (приготовленного в соотношении 5 мл физиологического раствора, 1 мл 20,47-ного ра1709194

Формула из обре те ния

80-90

Корректор И. Самборская чух

Тираж Подписное

ВНИИА ;1 Государствеккого комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035 Москва, 5-35„ Ра1лаская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат " Пате нт", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 створа цитрата натрия и 78 г Е-аминокапроновой кислоты) .

Для определения фибриногена пробу стабилизированной крови разводят в

10000 раэ. Сначала в 100 раз. 0,857; ным раствором хлористого натрия путем добавления к i0 мкл 0,99 мл фосфатносолевого буфера с твином (содержащего

0„3 моль/дм натрия хлористого, 0,2 моль/дм фосфорно-кислого натрия, твин-20 добавляют из расчета 50 мкл на 100 мл раствора). Затеи определяют содержание фибриногена иммуноферментным методом, которое составило у донора 2,б мг/мл. Для определения продуктов деградации фибриногена 100 мкл образца стабилизированной капиллярной крови обрабатывают раствором тромбина (1 мг тромбина в 3,5 мл 0„85X-ного раствора хлористого натрия), выдерживают при комнатной температуре

10 мин. Затем 10 мкл супернатанта разводят 900 мкл ФСБР-Т. Определяют содержание продуктов деградации фибриногена иммуноферментным методом, что составило 18 мкг/мл.

П р и и е р 2. Материалом для исследования явилась капиллярная кровь больного 63 года,, находящегося на стационарном лечении с диагнозом .: острое наруиение мозгового кровообращения в правой средней мозговой артерии. Прокол кожи на пальце производят по общепринятой методике, Первые две капли не учитывают, последующие

0,3 мл набирают в пластиковую .пробир-ку, содержащую 0„3 мл стабилизатора, приготовленного из расчета 5 мл физиологического раствора плюс 1 мл

20Ä4%-ного раствора цитрата натрия с добавлением 78 мг Е-аминокапроновой кислоты).

Для определения фибриногена пробу с абилизированной капиллярной крови разводят в 10 000 .раз, Сначала 10 мкл образца этой крови-разводят физиологическим раствором, а затеи к 10 мкл разведенного образца прибавляют .990 мкл фосфатно-соленого буфера с

Составитель Л.

Редактор И,Келемеш Техред А.Края твином. Затем определяют содержание фибриногена иммуноферментным методом.

Оно составило у больного,С. 4 мг/мл.

Для определения продуктов деградации фибриногена образец капиллярной крови в объеме 100 мкл смешивают с .10 мкл раствора тромбина (1 мг тромбина в 3,5 мл физиологического раствора), выдерживают при комнатной температуре 10 мин. Затем к 10 мкл обработанного тромбином образца прибавляют 990 мкл фосфатно-солевоro буфера с твином,. затем определяют содержание продуктов деградации фибриногена иммуноферментным способом, оно составило 112 мкг/мл.

Прецложенный способ позволяет достоверно оценить состояние больного, йе прибегая к взятию крови иэ вены, а также выявлять полное содержание фибриногена и продуктов его деградации в крови.

Способ определения фибринагена в крови, путем ее инкубации в, фосфатносолевом буфере с последующим иммуноg,epMeíòíbù определением фибриногена, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа путем определения продуктов его. деградации„ исследуют капиллярную кровь, которую до инкубации обрабатывают стабилизиру ацж раствором, содержащем цитрат натрия, E-.аминокапроновую кислоту и физиологический раствор при следующих соотноиениях компонентов, мас.ч.:

Цитрат натрия 200-210

Е-аминокапроновая кислота

Физиологический раствор . Остальное после определения фибриногена кровь дополнительно инкубируют в течение 910 мнн с тромбином, а затем обрабатывают фосфатно-солевым буфером и определяют продукты деградации фибриногеня